魏 鳳，張文通，李 峰，沈志強,

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

豬瘟疫苗免疫血清ELISA抗體測定及分析

魏 鳳1，張文通2，李 峰1，沈志強1,2

（1.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東 濱州 256600；2.山東綠都生物科技有限公司，山東 濱州 256600）

為掌握魯北區(qū)域豬瘟免疫情況，采用ELISA抗體檢測技術，對本單位于2016年收集1 902份豬血清進行檢測。結果顯示：魯北區(qū)域中大型規(guī)模豬場豬瘟ELISA抗體陽性率高于小型養(yǎng)豬場及散養(yǎng)戶。分析結果將為本區(qū)域防控豬瘟提供理論支撐。

豬瘟；ELISA抗體；檢測結果

豬瘟（Classical swine fever，CSF）是由豬瘟病毒（Classical swine fever virus，CSFV）引起的，以淋巴結周邊出血、脾臟邊緣出血性梗死、回盲部淋巴紐扣狀腫和腎臟密集點狀出血等為特征性病理變化的豬的重大傳染病[1,2]。CSF被國際動物衛(wèi)生組織（OIE）列為A類動物傳染病，我國將其列為一類動物傳染病。目前，盡管豬瘟疫苗已普及使用，但在筆者所在單位門診接診的病例中仍檢測到較高比例的豬瘟病毒[3,4]。因此豬瘟現(xiàn)仍是危害養(yǎng)豬業(yè)健康發(fā)展的最重要傳染病。合格的豬瘟疫苗，已被公認能夠較好地預防豬瘟病毒。豬瘟病例仍大量發(fā)生，豬瘟疫苗免疫情況存疑。為弄清楚魯北地區(qū)豬瘟疫苗免疫效果情況，對2016年本單位收集的1 902份豬血清進行檢測及分析，其目的是獲得該區(qū)域豬瘟疫苗免疫效果情況，為防控本區(qū)域CSF提供科學參考。

1 材料和方法

1.1 材料

豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒購自武漢科前動物生物制品有限公司。

1.2 方法

1.2.1 血液采集及血清分離

血液采集方法：所有采集血液的豬場或散養(yǎng)戶均免疫過豬瘟疫苗（免疫豬瘟脾淋苗或免疫豬瘟細胞毒苗），且在免疫3周后采集血液。采集的豬均為保育階段仔豬。

為便于統(tǒng)計與分析將血液來源豬場按規(guī)模分為四種類型：散養(yǎng)戶、小型養(yǎng)豬場、中型養(yǎng)豬場及大型養(yǎng)豬場。其中散養(yǎng)戶為年出欄商品豬100頭以下；小型養(yǎng)豬場為年出欄商品豬1 000頭以下；中型養(yǎng)豬場為年出欄商品豬5 000頭以下；大型養(yǎng)豬場為年出欄商品豬5 000頭以上。散養(yǎng)戶每戶采集5份血樣，小型養(yǎng)豬場每個豬場采集15份血樣，中型養(yǎng)豬場和大型養(yǎng)豬場每個豬場均采集30份血樣。

血清分離：采用頸部靜脈采集，血液37 ℃放置1 h，4 ℃靜置過夜；4 000 r/min離心10 min。

1.2.3 血清ELISA抗體測定

按照豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒說明書對收集的1 902份血清進行測定。

2 結果

2.1 豬瘟脾淋苗免疫ELISA抗體測定結果

本組所采血樣的豬場均來自接種豬瘟脾淋苗豬場。按照豬瘟病毒ELISA抗體檢測試劑盒判定標準：ELISA（S/ P值）大于0.17為免疫合格（血清ELISA抗體S/P值大于或等于0.17，相當于豬瘟正向間接血凝抗體大于或等于25）。表1結果顯示大型和中型養(yǎng)豬場CSF病毒ELISA抗體免疫檢測合格的豬場數(shù)較高，分別達91.7%和70.0%；而小型豬場和散養(yǎng)戶CSFV免疫合格豬場數(shù)較低，分別為50.0%和33.3%。大型養(yǎng)豬場血清總免疫合格率為85.0%；而中型豬場，小型養(yǎng)豬場及散養(yǎng)戶總免疫合格率分別為56.3%、42.0%、45.6%。

2.2 豬瘟細胞毒苗免疫ELISA抗體測定結果

本組所采血樣的豬場均來自接種豬瘟細胞毒苗豬場。試劑盒判定標準如2.1中所述。表2結果顯示大型和中型養(yǎng)豬場CSF病毒ELISA抗體免疫合格的豬場數(shù)較高，分別達91.7%和83.3%；而小型豬場和散養(yǎng)戶CSFV免疫合格豬場數(shù)較低，分別為57.1%和50.0%。大型養(yǎng)豬場和中型養(yǎng)豬場血清總免疫合格率分別為93.9%和87.2%；而小型養(yǎng)豬場及散養(yǎng)戶總免疫合格率分別為53.8%、54.2%。

表1 豬瘟脾淋苗免疫血清ELISA抗體測定結果

表2 豬瘟細胞毒苗免疫血清ELISA抗體測定結果

3 分析與討論

本單位門診2016年接診來自魯北區(qū)域豬病病例403例，實驗室檢測到豬瘟野毒病例108例，比率為26.8%。這說明本區(qū)域豬瘟仍在不同程度的流行。為弄清楚豬瘟野毒發(fā)生率如此高的原因，對本區(qū)域免疫豬瘟疫苗的不同規(guī)模豬場免疫效果情況進行調(diào)查。

現(xiàn)在市售豬瘟疫苗主要有豬瘟脾淋苗和豬瘟細胞毒疫苗，因此在檢測時特別區(qū)分了2種疫苗。并且還對不同規(guī)模豬場免疫豬瘟疫苗情況檢測時進行了細分。從檢測結果看，不論是用脾淋苗還是細胞毒苗大型和中型豬場免疫效果均優(yōu)于小型豬場和散養(yǎng)戶。從實際檢測豬場數(shù)或總血樣數(shù)，豬瘟細胞毒苗稍優(yōu)于豬瘟脾淋苗。

在上述檢測結果的基礎上對免疫不合格的豬場進行了詳細調(diào)查，并收集了12種豬瘟疫苗（其中豬瘟脾淋苗6種、豬瘟細胞毒苗6種）。對這12種豬瘟疫苗進行了效力檢驗（測疫苗兔體感染量），發(fā)現(xiàn)4種豬瘟脾淋苗和1種豬瘟細胞毒苗不合格。這說明豬瘟免疫失敗疫苗不合格是一個重要原因，但不可能是唯一原因。

該研究的分析結果提示魯北養(yǎng)豬行業(yè)在豬瘟防疫過程中，一方面要選擇合格豬瘟疫苗，另一方面要正確使用豬瘟疫苗。

[1] 單虎，李明義，沈志強．現(xiàn)代獸醫(yī)獸藥大全[M]．中國農(nóng)業(yè)大學出版社，2011：304-307．

[2] 蔡寶祥．家畜傳染病學． [M]．3版.北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2000：147-151．

[3] 蔡奕琪，朱燕秋，王悅彬．2001-2008年豬瘟抗體和豬瘟病毒監(jiān)測結果分析[J] ．養(yǎng)豬，2009(3)﹕73-74．

[4] 楊慧君．淺談豬瘟流行新特點與防治措施[J]．農(nóng)業(yè)科技與信息，2009(5)﹕50．

2017-01-15）

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術體系生豬創(chuàng)新團隊項目 SDAIT-08-17

魏鳳，女（1979-），河南遂平人，碩士，助理研究員，主要從事獸用生物制品研究，E-mail：hzndzwt1@163.com