王曉月，邸子真，王光函，劉 晶，張 穎,*

·藥學(xué)研究·

黃芩射干湯中千層紙素A和次野鳶尾黃素的含量測(cè)定

王曉月1，邸子真2，王光函2，劉 晶2，張 穎1,2*

目的 建立黃芩射干湯有效成分千層紙素A和次野鳶尾黃素的定量分析方法。方法 采用HPLC-DAD法測(cè)定制劑中千層紙素A和次野鳶尾黃素含量，使用Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，以乙腈-0.1%磷酸水為流動(dòng)相，進(jìn)行梯度洗脫，流速1.0 mL/min，柱溫：25 ℃。結(jié)果 千層紙素A和次野鳶尾黃素含量的線性范圍分別為0.058 32～0.641 52 μg(r=0.999 4)和0.053 76～0.591 36 μg(r=0.999 6)；平均回收率(n=6)分別為96.98%和97.37%，RSD分別為1.68%和1.98%。結(jié)論 所建方法快速、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可作為此制劑的定量分析方法。

黃芩射干湯；千層紙素A；次野鳶尾黃素；定量分析

0 引言

黃芩射干湯收載于“醫(yī)鈔類編”第十二卷“咽喉門方”，是由中藥黃芩和射干兩味藥材組成，用于治療由肺胃兩經(jīng)熱毒所致的喉中腥臭[1]。研究表明，黃芩[2-4]和射干[5-7]的有效成分均具有抗炎、抗病毒、抑菌等藥理作用。為了更好地開(kāi)發(fā)黃芩射干湯，本實(shí)驗(yàn)采用HPLC-DAD雙波長(zhǎng)切換檢測(cè)法建立了制劑的有效成分千層紙素A和次野鳶尾黃素的含量測(cè)定方法，為該制劑的質(zhì)量控制提供了參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀：四元泵、DAD檢測(cè)器。次野鳶尾黃素對(duì)照品(批號(hào)：111557-200602)購(gòu)于中國(guó)藥品生物制品檢定所，千層紙素A對(duì)照品(批號(hào)：150808，高效液相色譜法純度>98%)購(gòu)于江蘇永健醫(yī)藥科技有限公司；乙腈、磷酸為色譜純；其他試劑均為分析純；黃芩射干湯提取物(遼寧省中醫(yī)藥研究院，批號(hào)：20160601、20160602、20160603)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Ultimate XB C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：0.1%磷酸水(A)-乙腈(B)，梯度洗脫(0～5 min，70%A→65%A；5～10 min，65%A→60%A；10～15 min，60%A→50%A；15～22 min，50%A)；流速1.0 mL/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣5 μL；DAD檢測(cè)器波長(zhǎng)切換，次野鳶尾黃素的選擇波長(zhǎng)為266 nm，千層紙素A的選擇波長(zhǎng)為278 nm。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取對(duì)照品次野鳶尾黃素和千層紙素A適量，加色譜甲醇制成濃度為1.344 mg/mL和1.458 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液。分別精密量取上述對(duì)照品溶液各0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1 mL，置于25 mL量瓶中，加甲醇至容量瓶刻度，各對(duì)照液混勻，待用。

2.2.2 供試品溶液 取黃芩射干湯提取物10 g(批號(hào)：20160601)，研缽研細(xì)，取0.2 g，精密稱定，精密加入70%乙醇超聲(功率250 W，頻率40 kHz)，提取30 min，稱重，補(bǔ)重，搖勻，濾紙濾過(guò)，取續(xù)濾液，過(guò)0.22 μm微孔濾膜，待測(cè)。

2.2.3 陰性樣品溶液 根據(jù)處方比例，分別在處方中除去黃芩或者射干藥材，按原工藝制備陰性樣品，按“2.2.2”項(xiàng)下制備陰性供試液。

2.3 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 精密吸取陰性供試液、供試品溶液、次野鳶尾黃素和千層紙素A混合對(duì)照品溶液，分別注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，見(jiàn)圖1。結(jié)果表明：陰性供試液色譜圖中，在與次野鳶尾黃素和千層紙素A對(duì)照品相同保留時(shí)間處未見(jiàn)相應(yīng)色譜峰干擾，實(shí)驗(yàn)方法的專屬性良好。

圖1 次野鳶尾黃素和千層紙素A的HPLC色譜圖

注：A.陰性樣品(缺射干)，B.陰性樣品(缺黃芩)，C.混合對(duì)照品，D.樣品；1.次野鳶尾黃素，2.千層紙素A

2.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取次野鳶尾黃素和千層紙素A混合對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀中，以峰面積對(duì)進(jìn)樣量(μg)作線性回歸，結(jié)果次野鳶尾黃素和千層紙素A相應(yīng)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。見(jiàn)表1。

2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取次野鳶尾黃素和千層紙素A混合對(duì)照品溶液，注入液相色譜儀中，平行6針，測(cè)定。次野鳶尾黃素和千層紙素A對(duì)照品溶液峰面積的RSD分別為1.04%和1.03%，說(shuō)明色譜系統(tǒng)響應(yīng)值重復(fù)性良好。

表1 線性關(guān)系考察(n=6)

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在放置0、2、4、8、12、20 h時(shí)，注入液相色譜儀中，測(cè)定，計(jì)算，RSD分別為0.89%和0.40%，說(shuō)明供試品溶液在20 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取批號(hào)為20160601的本品10 g，研細(xì)，取0.2 g，平行6份，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下實(shí)驗(yàn)方法制備供試品溶液，分別精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀中，測(cè)定，計(jì)算，6份樣品中次野鳶尾黃素和千層紙素A的含量均值分別為2.52 mg/g和1.81 mg/g，RSD分別為1.61%和1.62%，重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收試驗(yàn) 取批號(hào)為20160601的本品10 g，研細(xì)，取0.1 g，平行6份，向樣品中分別加入次野鳶尾黃素和千層紙素A混合對(duì)照品溶液，按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液。分別精密吸取供試品溶液，注入液相色譜儀中，測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果次野鳶尾黃素的平均加樣回收率為97.37%，變異系數(shù)為1.98%，千層紙素A的平均加樣回收率為96.98%，變異系數(shù)為1.68%，實(shí)驗(yàn)方法準(zhǔn)確度良好。見(jiàn)表2。

2.9 樣品含量測(cè)定 取不同批號(hào)的本品3批樣品各10 g，研細(xì)，取0.2 g，精密稱定，按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，精密吸取各批號(hào)供試品溶液，分別注入液相色譜儀中，測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

本文在考察了黃芩射干湯藥效學(xué)及復(fù)方指紋圖譜的基礎(chǔ)上，對(duì)黃芩的有效成分千層紙素A、射干的有效成分次野鳶尾黃素進(jìn)行了含量測(cè)定研究。其中，千層紙素A又名千層紙黃素，木蝴蝶素，具有抗炎[8-9]、抗腫瘤[10]等作用；次野鳶尾黃素是中藥射干(2015版藥典)含量測(cè)定的指標(biāo)性成分[11]。筆者對(duì)流動(dòng)相系統(tǒng)進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，乙腈-磷酸水系統(tǒng)、梯度洗脫可使兩成分分離度良好，次野鳶尾黃素的保留時(shí)間為17.189 min，千層紙素A的保留時(shí)間為19.507 min。在選擇測(cè)定波長(zhǎng)上，千層紙素A和次野鳶尾黃素分別在波長(zhǎng)278 nm和266 nm附近有特征吸收峰，因此,選擇上述波長(zhǎng)切換作為本研究含量測(cè)定的波長(zhǎng)。

表2 加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表3 含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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Determination of oroxylin A and irisflorentin in Huangqin Shegan decoction

WANG Xiao-yue1,DI Zi-zhen2,WANG Guang-han2,LIU Jing2,ZHANG Ying1,2*

(1.Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110032,China;2.Liaoning Academy of Chinese Medicine,Shenyang 110034,China)

Objective To establish a quantitative analysis method for the determination of oroxylin A and irisflorentin in Huangqin Shegan decoction.Methods HPLC-DAD method was used to determine the content of oroxylin A and irisflorentin in Huangqin Shegan decoction.The chromatographic separation was performed on Ultimate XB-C18(4.6 mm×250 mm,5 μm),the mobile phase was composed of a mixture of acetonitrile-0.1% phosphoric acid water,the flow rate was 1.0 mL/min,and the temperature was at 25 ℃.Results The linear range of oroxylin-A and irisflorentin was 0.058 32～0.641 52 μg (r=0.999 4) and 0.053 76～0.591 36 μg (r=0.999 6).The average recoveries(n=6) were 96.98% and 97.73%,withRSDof the recoveries being 1.68% and 1.98%.Conclusion This method is quick,accurate and practical,and it can be used for the quantitative analysis of Huangqin Shegan decoction.

Huangqin Shegan decoction;Oroxylin-A;Irisflorentin;Quantitative analysis

2016-10-20

1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)，沈陽(yáng) 110032;2遼寧省中醫(yī)藥研究院，沈陽(yáng) 110034

國(guó)家自然科學(xué)基金(81273927)；遼寧省自然科學(xué)基金(2015020387)

10.14053/j.cnki.ppcr.201705020

*通信作者