鄭思艷，陳艷云，袁春燕，夏兆飛

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀 100193)

北京地區(qū) 25例犬吉氏巴貝斯蟲病例分析

鄭思艷，陳艷云，袁春燕，夏兆飛

(中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，北京 海淀 100193)

為調(diào)查北京地區(qū)犬吉氏巴貝斯蟲病的感染與治療情況，2014年10月至2016年1月期間，本試驗(yàn)對(duì)中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院就診的25例犬吉氏巴貝斯蟲感染病例進(jìn)行調(diào)查統(tǒng)計(jì)，記錄其臨床癥狀，分析全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(Complete Blood Count，CBC)、生化檢測(cè)結(jié)果和三氮脒的治療效果。結(jié)果顯示，25例患犬均出現(xiàn)不同程度的貧血，73.3%(11/15)的患犬出現(xiàn)了免疫介導(dǎo)性溶血性貧血(Immune mediated hemolytic anemia，IMHA)，使用三氮脒和輸血療法治療后，71.2%(10/14)的患犬取得良好的療效，但目前跟蹤的病例中，21.4%(3/14)的患犬已復(fù)發(fā)。

犬;吉氏巴貝斯蟲;CBC;PCR檢查

犬巴貝斯蟲病，由巴貝斯蟲通過蜱媒傳播，寄生于脊椎動(dòng)物血液紅細(xì)胞中的一種寄生蟲病［1－2］，常引起間歇性發(fā)熱、進(jìn)行性貧血、血小板減少、脾腫大等臨床癥狀，嚴(yán)重感染導(dǎo)致死亡。該病在蜱流行區(qū)發(fā)病率較高，因此，東南亞、北美、南美等地廣泛流行［1－4］。我國(guó)已報(bào)道的犬巴貝斯蟲病多為吉氏巴貝斯蟲感染，偶見韋氏巴貝斯蟲感染，在我國(guó)江蘇、河南的部分地區(qū)呈地方性流行，隨著我國(guó)養(yǎng)犬業(yè)的快速發(fā)展，近年來有流行和暴發(fā)的趨勢(shì)，這對(duì)寵物犬構(gòu)成嚴(yán)重的危害［5－7］，因此對(duì)本病的及早診斷和治療尤為重要。

1 試驗(yàn)對(duì)象與試驗(yàn)方法

1.1 試驗(yàn)對(duì)象 2014年10月至2016年1月期間，從中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院就診病例中選取25例有蜱接觸史的患犬。

1.2 發(fā)病動(dòng)物病例整理 記錄其年齡、品種、性別、臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)(包括CBC和生化檢查)結(jié)果;對(duì)使用三氮脒治療的患犬，跟蹤其治療效果，監(jiān)測(cè)分析其各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)指標(biāo)的變化。

1.3 PCR檢測(cè)

1.3.1 DNA提取 參照QIAamp DNA mini kit試劑盒說明書提取DNA。

1.3.2 PCR擴(kuò)增 參照Muhlnickle C J等人設(shè)計(jì)的引物和反應(yīng)體系［1］，擴(kuò)增巴貝斯蟲的 18S rRNA基因。

1.3.3 電泳 將PCR反應(yīng)結(jié)束后，取5μL產(chǎn)物置于1.0%瓊脂凝膠上電泳。電泳后，紫外燈下觀察結(jié)果。

1.3.4 PCR測(cè)序 將PCR產(chǎn)物送至奧美德諾公司測(cè)序，然后將測(cè)序結(jié)果與NCBI中的18S rRNA序列進(jìn)行比對(duì)，同源性≥97%者判為吉氏巴貝斯蟲(B．gibsoni)。

2 結(jié)果

2.1 年齡、品種和性別分布 本次調(diào)查顯示，發(fā)病犬的年齡從7月齡至16歲不等，平均發(fā)病年齡為3.87±3.68歲，患犬多為公犬(16只，64%)，母犬8只(32%)，絕育犬1只(4%);患犬品種以雜種犬(4只，16%)、德國(guó)牧羊犬(4只，16%)、金毛尋回犬(3只，12%)居多，其他品種如拉布拉多尋回犬、雪納瑞犬、貴賓犬和西施犬等也有發(fā)病

2.2 臨床癥狀 24例患犬主要表現(xiàn)黏膜蒼白、精神沉郁、食欲減退、發(fā)熱、消瘦、嘔吐等癥狀，僅1例(4%)患犬就診時(shí)表現(xiàn)為明顯黃疸。見表1。

表1 臨床癥狀

2.3 實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果

2.3.1 CBC檢查結(jié)果 患犬于初診時(shí)表現(xiàn)為紅細(xì)胞總數(shù)(2.68±1.48 ×1012/L)下降、紅細(xì)胞比容(18.53±7.88%)下降、血紅蛋白(6.83±3.76 g/ dL)下降、平均紅細(xì)胞體積(72.39±12.76 fL)輕度升高，網(wǎng)織紅細(xì)胞(214.92±193.17 K/μL)輕度升高;另外，白細(xì)胞總數(shù)(21.61±13.82 ×109/L)升高，血小板(83.67±102.06 K/μL)下降。見表2。

表2 患犬治療前后血液檢查結(jié)果

2.3.2 血清生化檢查結(jié)果 患犬于初診時(shí)總膽紅素(21.09±29.87μmol/L)和直接膽紅素(12.2± 21.59μmol/L)輕微升高;天門冬酰胺氨基轉(zhuǎn)移酶(80.57±34.59 U/L)和堿性磷酸酶(396.6± 253.48 U/L)升高;肌酐(201.56±470.17μmol/L)和尿素氮(27.02±34.16μmol/L)升高;肌酸激酶(597.5±948.04 U/L)和乳酸脫氫酶(485.43± 465.35 U/L)升高。見表3。

表3 患犬初診就診時(shí)生化檢查結(jié)果

2.3.3 PCR檢查結(jié)果 25只患犬中，23只(92%)血涂片鏡檢 B．gibsoni陽性，PCR檢查均為陽性(100%)。如圖1。

2.4 治療及監(jiān)測(cè) 25例患犬中，其中僅有14例接受了三氮脒的治療，4例患犬因嚴(yán)重貧血同時(shí)進(jìn)行輸血治療，有4例患犬的主人直接放棄治療，5例失聯(lián);電話回訪結(jié)果顯示，接受治療的14例患犬中，10例(71.4%)于首期治療后病情得到控制，但目前有3例(21.4%)復(fù)發(fā);4例(28.6%)因貧血及其他嚴(yán)重的并發(fā)癥死亡。

圖1 18S rRNA擴(kuò)增結(jié)果(陰性條帶排除B．gibsoni)

3 討論

我國(guó)已報(bào)道的犬巴貝斯蟲病多為B．gibsoni感染，在我國(guó)江蘇、河南的部分地區(qū)呈地方性流行，對(duì)寵物犬構(gòu)成嚴(yán)重危害［7］。本次調(diào)查在中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院(全年接診量約65 000例)完成，歷時(shí)14個(gè)月，期間僅有25例犬被診斷為B．gibsoni感染，整體發(fā)病率并不高。這一結(jié)果提示北京并非犬B．gibsoni高發(fā)區(qū)，和流行病學(xué)特征相符。雖然北京并非蜱流行區(qū)，但根據(jù)Jefferies等人于2007年的報(bào)道，咬傷也可能會(huì)導(dǎo)致蟲體經(jīng)過直接的血液接觸傳播，這一途徑不需要傳播媒介，鑒于此，還應(yīng)加強(qiáng)B．gibsoni流行病學(xué)的監(jiān)控。

B．gibsoni感染的潛伏期從數(shù)天到數(shù)周不等，患犬主要表現(xiàn)精神沉郁、體重下降、黃疸、淤血等癥狀，實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)多表現(xiàn)再生性貧血、肝酶升高等，嚴(yán)重血管內(nèi)溶血的病例還會(huì)出現(xiàn)黃疸［8］。本次調(diào)查中，所有患犬均表現(xiàn)出不同程度的精神沉郁，96%的患犬有食欲不振和黏膜蒼白的癥狀，僅有一例有明顯黃疸;實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)結(jié)果證實(shí)所有黏膜蒼白的病例均出現(xiàn)了嚴(yán)重貧血(3.24±2.18× 1012/L)，貧血程度和病程有一定關(guān)系，精神沉郁超過1周的患犬貧血極其嚴(yán)重，這可能跟病原體在紅細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行胞內(nèi)復(fù)制，引發(fā)血管內(nèi)和血管外溶血性貧血有關(guān)。機(jī)體對(duì)抗蟲體的免疫介導(dǎo)反應(yīng)和自身抗原的改變能加重溶血性貧血，巨噬細(xì)胞受刺激后能引起發(fā)熱和肝脾腫大。本次調(diào)查中，73.3%(11/15)的病例出現(xiàn)了IMHA，不但誘發(fā)了嚴(yán)重貧血，也會(huì)誘發(fā)骨髓代償作用，使外周血白細(xì)胞升高(伴有核左移);另外，本次調(diào)查中，患犬的血小板也明顯下降，由于這些患犬無明顯出血現(xiàn)象，排除了血小板消耗的因素，最有可能的原因是免疫介導(dǎo)性的。

該病主要依靠實(shí)驗(yàn)室診斷，外周血血涂片見到病原體結(jié)合臨床癥狀即可確診，但隨著PCR技術(shù)和血清學(xué)檢查的應(yīng)用，診斷率大大提高。本次調(diào)查中，25例患犬中23例血涂片檢查為陽性，但所有PCR檢查均為陽性，這一結(jié)果提示血涂片檢查有一定的漏診率，在臨床工作中，若高度懷疑該病，可通過PCR檢查輔助診斷。

目前尚無犬B．gibsoni感染的標(biāo)準(zhǔn)治療方案，主要治療原則為殺蟲和輔助治療(如輸血治療)［9］。亞洲一些國(guó)家地區(qū)普遍使用三氮脒(一線藥物，3 mg/kg體重，肌肉注射，每天一次，連用3 d)和阿托喹酮(atovaquone，13.3 mg/kg體重，口服，每天3次)［10］，國(guó)內(nèi)主要使用 DIMINAPHEN granules(主要成分為三氮脒和安替比林，10 mg/kg體重，皮下注射/肌肉注射，隔天1次，連用3次)。阿托喹酮和阿奇霉素(10 mg/kg，口服，每天1次)聯(lián)合應(yīng)用治療效果良好。報(bào)道顯示，三氮脒治療的患犬復(fù)發(fā)率較高，近年來一些病例使用阿托喹酮治療后也會(huì)復(fù)發(fā)，基因檢測(cè)證實(shí)病原體已出現(xiàn)CYTb基因(抗阿托喹酮的基因)突變［11］。本次調(diào)查中，14例患犬接受了DIMINAPHEN granules的治療，10例(71.4%)患犬于首期治療后癥狀得到緩解，1例于治療當(dāng)天死亡;1例于治療半個(gè)月時(shí)死亡，另外2例治療20 d后仍未見好轉(zhuǎn)。這些預(yù)后不良的病例于初次診斷時(shí)已出現(xiàn)嚴(yán)重的IMHA，提示本病需及時(shí)診斷，在治療時(shí)還應(yīng)注意加強(qiáng)對(duì)IMHA的控制。目前跟蹤回訪顯示，3例患犬已復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)時(shí)患犬均表現(xiàn)嚴(yán)重貧血。由于本次調(diào)查未涉及耐藥性研究，尚不清楚復(fù)發(fā)病例的病原對(duì)三氮脒的耐藥性，需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié)論

本次調(diào)查中，北京地區(qū)犬B．gibsoni發(fā)病率并不高;主要通過血涂片檢查診斷，但PCR檢查能提高檢出率;北京地區(qū)主要的特異性治療藥物為DIMINAPHEN granules，治療效果和并發(fā)的IMHA有很大關(guān)系;有些病例出現(xiàn)復(fù)發(fā)，需進(jìn)一步進(jìn)行耐藥性研究，以指導(dǎo)臨床工作。

［1］ Muhlnickel C J，Jefferies R，Morgan－Ryan，et al．Babesia gibsoni infection in three dogs in Victoria［J］．Aust Vet J，2002．80: 606-610．

［2］ Passos L M F，Geiger S M，Ribeiro M F B，et al．First molecular detection of Babesia vogeliin dogs from Brazil［J］．Veterinary Parasitology，2005，127(1):81-85．

［3］ Iguchi A，Shiranaga N，Matsuu A，et al．Efficacy of Malarone (R)in Dogs Naturally Infected with Babesia gibsoniL［J］．JOURNAL OF VETERINARY MEDICAL SCIENCE，2014，76 (9):1 291-1 295．

［4］ Jefferies R，Ryan U M，Jardine J，etal．Blood，Bull Terriers and Babesiosis:further evidence for direct transmission of Babesia gibsoni in dogs［J］．Aust Vet J，2007，85(11):459-463．

［5］ 權(quán)中會(huì)，魏莉，趙獻(xiàn)軍，等．西安地區(qū)犬吉氏巴貝斯蟲病的診斷與治療［J］．中國(guó)獸醫(yī)雜志，2012，48(4):64-65．

［6］ 徐孝宙．一例犬吉氏巴貝斯蟲病的診治［J］．黑龍江畜牧獸醫(yī)，2010(10):106．

［7］ 尚澤松，張才，張振芳，等．豫西地區(qū)犬巴貝斯蟲病及媒介流行病學(xué)特征［J］．河南科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)，2014 (4):73-76．

［8］ Imre M，F(xiàn)arkas R，Ilie M S，et al．Survey ofbabesiosis in symptomatic dogs from Romania:Occurrence of Babesia gibsoni associated with breed［J］．Ticks and Tick－borne Diseases，2013，4 (6):500-502．

［9］ Hii S F，Kopp S R，Thompson M F et al．Canine vector-borne disease pathogensin dogs from south－east Queensland and northeast Northern Territory［J］．Aust VetJ，2012，90:130-135．

［10］ Lin E C，Chueh L，Lin C，et al．The therapeutic efficacy of two antibabesial strategies against Babesia gibsoni［J］．Veterinary Parasitology，2012，186(3-4):159-164．

［11］ Sakuma M，Setoguchi A，Endo Y．Possible Emergence of Drug-Resistant Variants ofBabesia gibsoni in Clinical Cases Treated with Atovaquone and Azithromycin［J］．Journal of Veterinary Internal Medicine，2009，23(3):493-498．

Babeia gibsoni infection in 25 dogs in Beijing

ZHENG Si-yan，CHEN Yan-yun，YUAN Chun-yan，XIA Zhao-fei

(College of VeterinaryMedicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China)

To investigate the infection and treatment of canine babesiosis in Beijing area，present study was conducted from Octorber 2014 to January 2016 to studied the infection of25 cases of canine babesiosis in the animal hospital of China Agricultural University．We recorded the clinical symptoms，performed complete blood count CCBC，biochemical test and diminazene treatment effect．The results showed that25 cases had differentdegrees of anemia，and the rate was 73.3%(11/15)in dogs with immune mediated hemolytic anemia．The use of diminazene and blood transfusion therapy，achieved good therapeutic effect and the response rate was 71.2%(10/14)．But in the case of the current track，21.4%(3/14)of the affected dogs had recurrence．

B．gibsoni;CBC;PCR

XIA Zhao-fei

S858.292

A

0529-6005(2017)06-0053-03

2016-06-29

鄭思艷(1989-)，女，碩士生，研究方向?yàn)樾?dòng)物內(nèi)科學(xué)，E-mail:zhengsiyan@cau．edu．cn

夏兆飛，E-mail:drxia@126．com