曾憲瑞

APE、VEGF在宮頸癌組織中的表達及其與MVD的關(guān)系

曾憲瑞

目的探討宮頸癌組織中脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶(APE)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達及其與微血管密度(MVD)的關(guān)系。方法50份宮頸癌術(shù)后未經(jīng)放化療治療的腫瘤石蠟組織標本設(shè)為宮頸癌組, 50份宮頸上皮內(nèi)瘤變組織蠟塊設(shè)為宮頸上皮內(nèi)瘤變組, 50份子宮肌瘤行子宮切除宮頸正常組織臘塊設(shè)為對照組, 采用免疫組織化學方法對三組APE、VEGF、MVD指標進行檢測并對比。結(jié)果APE在宮頸癌組織中, 與組織分化、臨床分期有關(guān), 差異具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)；與病理類型無關(guān), 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。在宮頸癌組織中, APE與VEGF呈正相關(guān)性(r=0.796, P＜0.01), APE與MVD呈正相關(guān)性(r=0.606, P＜0.01), VEGF與MVD呈正相關(guān)性(r=0.651, P＜0.01)。結(jié)論APE在誘導VEGF表達中有參與, 并對腫瘤血管生成有促進作用, VEGF、APE均可作為對宮頸癌預(yù)后進行監(jiān)測的指標, 也可用于癌前病變的評估。

脫嘌呤/脫嘧啶核酸內(nèi)切酶；血管內(nèi)皮生長因子；宮頸癌組織；微血管密度

APE屬多功能蛋白范疇, 其異常表達、功能的改變同神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病、腫瘤等病理過程關(guān)聯(lián)密切。VEGF為最為重要的一個對腫瘤血管生成發(fā)揮刺激作用的生長因子［1-3］。本文經(jīng)免疫組織化學方法對正常組織、宮頸癌組織等處的VEGF、APE表達進行檢測, 分析其與MVD的關(guān)系, 為宮頸癌預(yù)后的監(jiān)測提供準確參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2017年2月本院宮頸癌術(shù)后未經(jīng)放化療治療的腫瘤石蠟組織標本設(shè)為宮頸癌組, 其中高分化7份,中分化20份, 低分化23份；依據(jù)2000年國際婦產(chǎn)科聯(lián)盟制定的相關(guān)標準分級, 0期6份, Ⅰ期18份, ≥ Ⅱ期26份。病理類型：腺癌16例, 鱗癌34例。另選取50份宮頸上皮內(nèi)瘤變組織蠟塊設(shè)為宮頸上皮內(nèi)瘤變組, 50份子宮肌瘤行子宮切除宮頸正常組織臘塊設(shè)為對照組。均經(jīng)常規(guī)切片處理,厚度為4 μm, 均經(jīng)病檢和HE染色確診。

1.2 方法 準備鼠抗人APE單克隆抗體, 以1∶50作為工作濃度；準備Pv-6000試劑盒、鼠抗人CD34單克隆抗體、VEGF單克隆抗體。實驗步驟嚴格根據(jù)說明書要求開展。

1.3 觀察指標及評定標準 依據(jù)Mark Kelley實驗室標準對APE染色結(jié)果進行評估, VEGF在細胞質(zhì)和(或)細胞膜內(nèi)有棕褐色、棕色、淺黃色顆粒沉著, 可定義為陽性細胞。分析經(jīng)監(jiān)測所得的陽性細胞比例, 并依據(jù)具體的著色強度, 對免疫組織化學半定量計分標準進行綜合制定。①陽性細胞計分標準：0分：陽性細胞＜1%；1分：陽性細胞占1%～10%；2分：陽性細胞占11%～50%；3分：陽性細胞占51～80%；4分：陽性細胞＞80%。②著色強度計分標準：1分：著色強度為弱；2分：著色強度中等；3分：著色較強。上述兩分值相加, 獲取最終評估結(jié)果, 1分：可按(-)計, 2～3分：可按(+)計；4～5分：可按(++)計；6～7分, 可按(+++)計。低表達組：(-)和(+)；高表達組：(++)和(+++)。被CD34抗體染成孤立的呈黃棕色顯示的內(nèi)皮細胞簇團或內(nèi)皮細胞, 與鄰近腫瘤細胞、微血管及其他結(jié)締組織只要分開, 即可作為新微血管；結(jié)構(gòu)只要不相連, 可將分支結(jié)構(gòu)看作一個血管。依據(jù)Weidne報道法行MVD計數(shù)。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用S P S S 13.0統(tǒng)計學軟件進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差表示, 采用t檢驗；計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。相關(guān)性檢驗采用S p e a r m a n相關(guān)分析。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 A P E、V E G F、M V D同病理類型的關(guān)系 APE在宮頸癌組織中, 與組織分化、臨床分期有關(guān), 差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)；與病理類型無關(guān), 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。相較于高、中分化宮頸癌, APE在低分化宮頸癌中有更高表達；相較0期及Ⅰ期, ≥Ⅱ期有更高表達；比較差異均具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)。VEGF及MVD計數(shù)與組織分化、臨床分期無關(guān), 差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；病理類型腺癌VEGF及MVD計數(shù)高于鱗癌, 差異均具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)。見表1。

表1 A P E、V E G F、M V D同病理類型的關(guān)系 ［n(%)

表1 A P E、V E G F、M V D同病理類型的關(guān)系 ［n(%)

注：與高、中分化比較,aP＜0.05；與0、Ⅰ期比較,bP＜0.05；與鱗癌比較,cP＜0.05

臨床病理特征例數(shù)A P E高表達V E G F高表達M V D計數(shù)組織分化高73(42.9)4(57.1)33.6±4.1中2017(85.0)13(65.0)41.5±6.7低2323(100.0)a16(69.6)44.5±6.1臨床分期064(66.7)3(50.0)31.9±9.1Ⅰ1813(72.2)11(61.1)42.5±5.7≥Ⅱ2626(100.0)b19(73.1)45.9±6.2病理類型鱗癌3429(85.3)19(55.9)33.5±6.7腺癌1614(87.5) 14(87.5)c46.8±8.3c

2.2 A P E與V E G F在宮頸癌組織中的表達同M V D的關(guān)系 在宮頸癌組織中, APE與VEGF呈正相關(guān)性(r=0.796, P＜0.01), APE與MVD呈正相關(guān)性(r=0.606, P＜0.01), VEGF與MVD呈正相關(guān)性(r=0.651, P＜0.01)。

2.3 A P E、V E G F及M V D在不同組織中的表達 經(jīng)測定, APE陽性產(chǎn)物呈細顆粒狀顯示, 呈棕褐或棕黃色, 以在胞核定位為主, 間質(zhì)也存在一定表達的情況。宮頸癌組織中, 呈高表達43份, 占86%；呈低表達7份, 占14%。VEGF陽性表達經(jīng)觀察為棕黃色顆粒, 以在胞質(zhì)定位為主, 胞膜也存在一定表達的情況；CD34陽性產(chǎn)物于血管內(nèi)皮細胞質(zhì)定位。APE和VEGF陽性表達率在對照組、宮頸上皮內(nèi)瘤變組、宮頸癌組組織中呈依次遞增趨勢。宮頸癌組陽性表達率高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和對照組, 差異均具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)；宮頸上皮內(nèi)瘤變組陽性表達率高于對照組, 差異具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)。宮頸癌組MVD計數(shù)高于宮頸上皮內(nèi)瘤變組和對照組, 差異均具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05) ；宮頸上皮內(nèi)瘤變組MVD計數(shù)高于對照組, 差異具有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)。見表2。

表2 A P E、V E G F及M V D在不同組織中的表達 ［n(%)

表2 A P E、V E G F及M V D在不同組織中的表達 ［n(%)

注：與對照組比較,aP＜0.05；與宮頸上皮內(nèi)瘤變組比較,bP＜0.05

組別例數(shù)A P E高表達V E G F高表達M V D計數(shù)對照組503(6.0)04.9±1.1宮頸上皮內(nèi)瘤變組5016(32.0)a12(24.0)a19.4±6.2a宮頸癌組5043(86.0)ab33(66.0)ab41.4±2.8ab

3 討論

APE同細胞的損傷修復、增殖均具一定相關(guān)性, 在腫瘤病程中所起作用顯著。其在機體內(nèi)的表達具器官和組織特異性, 因分化程度和功能存在區(qū)別, 共包括胞核表達、胞質(zhì)表達、核質(zhì)共表達3種形式, 主要功能定位同胞核存在密切關(guān)聯(lián)［4-6］。有研究示［7,8］, 在前列腺癌、肺癌等諸多腫瘤類型中, APE均可過表達和(或)擴增表達。本次研究中, APE陽性表達率在對照組、宮頸上皮內(nèi)瘤變組、宮頸癌組組織中呈依次遞增趨勢。宮頸癌中有最高表達, 且分化程度越低, 表達率越高, 表明此指標同病程發(fā)展關(guān)聯(lián)密切, 可作為腫瘤惡性程度鑒別的標志［9-11］。

另外, VEGF可對血管內(nèi)皮細胞的增殖和分裂加以刺激,促某些基因在內(nèi)皮細胞的表達改變, 使微血管通透性增加,進而為腫瘤血管的轉(zhuǎn)移、浸潤提供有利條件［12-15］。通過對MVD值測量, 可對腫瘤血管生成程度評價, 正確反映腫瘤的侵襲性及惡性程度, 本次研究顯示, VEGF在腺癌中有較高表達, MVD也高于鱗癌, MVD計數(shù)與VEGF的表達呈正相關(guān), 表明VEGF經(jīng)對腫瘤血管生成途徑誘導, 在宮頸癌病程中參與。

綜上所述, APE在誘導VEGF表達中有參與, 并對腫瘤血管生成有促進作用, VEGF、APE均可作為對宮頸癌預(yù)后進行監(jiān)測的指標, 也可用于癌前病變評估。

［1］ Puglisi F, Barbone F, Tell G, et al.Prognostic role of Ape/Ref-1 subcellular expression in stage Ⅰ-Ⅲ breast carcinomas.Oncology Reports, 2002, 9(1):11.

［2］ Parsons JL, Dianova II.APE1 is the major 3prime-phosphoglycolate activity in human cell extracts.Nucleic Acids Research, 2004, 32(12):3531-3536.

［3］ Wong D, Demple B.Modulation of the 5’-deoxyribose-5-Phosphatelyase and DNA synthesis activities of manunalian DNA polymerasebeta by apurinic/apyrimidinic endonuclease 1.Journal of Biological Chemistry, 2004, 279(24):25268-25275.

［4］ Gros L, Ishchenko AA, Ide H, et al.The major hurman AP endonuclease(Apel) is involved in the nucleotide incision repair pathway.Nucleic Acids Res, 204, 32(1):73-81.

［5］ Evans AR, Limpfoster M, Kelley MR.Going APE over ref-1.Mutation Research/dna Repair, 2000, 461(2):83-108.

［6］ 徐平平, 紀新強, 張奎美.APE、VEGF在宮頸癌組織中的表達及其與MVD的關(guān)系.現(xiàn)代醫(yī)學, 2008, 36(6):389-393.

［7］ 栗美榮, 孫麗洲.宮頸癌組織及血清血管內(nèi)皮生長因子C表達及其與淋巴轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析.中華實用診斷與治療雜志, 2016, 30(9):860-863.

［8］ 曾憲瑞.宮頸癌中APE-Ref-1、VEGF、MVD的表達及臨床意義.廣東醫(yī)學院, 2010.

［9］ 張國玲.介入治療對宮頸癌VEGF、MVD的影響.石河子大學, 2008.

［10］ 莫平, 馬德花, 趙淑萍.介入栓塞化療對局部晚期宮頸癌組織VEGF表達及MVD影響.齊魯醫(yī)學雜志, 2008, 23(3):213-216.

［11］ 曹振東.宮頸癌組織中VEGF表達及MVD計數(shù)與MSCT灌注的相關(guān)性研究.河北醫(yī)科大學, 2011.

［12］ 葉再挺.介入治療前后宮頸癌組織內(nèi)腫瘤細胞VEGF、MVD表達的動態(tài)變化.放射免疫學雜志, 2010, 23(1):75-77.

［13］ 劉華.Galectin-1與VEGF、CD105在宮頸癌組織中的表達及其臨床意義.河南科技大學, 2012.

［14］ 林伍梅, 李艷芳, 劉富元.Ⅰb～Ⅱa期宮頸癌組織中HIF-1α、VEGF的表達變化及其與MVD的關(guān)系.山東醫(yī)藥, 2010, 50(42):95-96.

［15］ 張國玲, 趙新建, 高永昌.經(jīng)子宮動脈化療栓塞術(shù)對宮頸癌VEGF、MVD的影響.中國臨床醫(yī)學影像雜志, 2008, 19(9):646-648.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2017.14.015

2017-05-19］

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