馮霞,梁國(guó)強(qiáng),陳偉
(1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京腦科醫(yī)院藥劑科,江蘇 南京 210029;2.蘇州市吳門醫(yī)派研究院,江蘇 蘇州 215003)
氣相色譜法測(cè)定珍珠明目滴眼液中的乙醇?xì)埩袅?/p>
馮霞1,梁國(guó)強(qiáng)2,陳偉2
(1.南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京腦科醫(yī)院藥劑科,江蘇 南京 210029;2.蘇州市吳門醫(yī)派研究院,江蘇 蘇州 215003)
目的:建立珍珠明目滴眼液中乙醇?xì)埩袅康臏y(cè)定方法。方法:采用氣相色譜法,鍵合交聯(lián)聚乙二醇為固定液的毛細(xì)管柱,載氣為氮?dú)?,氫火焰離子化檢測(cè)器(FID),進(jìn)樣口溫度為190℃,檢測(cè)器溫度為250℃,柱溫采用程序升溫,初始溫度為50℃,保持3 min,再以50℃/min的升溫速率升溫至200℃,保持5 min。載氣流速1.5 mL/ min,空氣流量450 mL/min;氫氣流量45 mL/min,分流比為30∶1。結(jié)果:乙醇濃度在21.01~105 050.48 μg/mL內(nèi)具有良好的線性關(guān)系,72批樣品中有18批樣品的乙醇?xì)埩袅砍^(guò)0.5%。結(jié)論:本方法準(zhǔn)確、可靠,靈敏度高,適用于珍珠明目滴眼液中乙醇?xì)埩袅康臋z測(cè)。
氣相色譜法;氫火焰離子化檢測(cè)器;珍珠明目滴眼液;乙醇?xì)埩?/p>
珍珠明目滴眼液主要由珍珠液和冰片配伍制成,是國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的二級(jí)中藥保護(hù)品種,收載于《中藥成方制劑》第17冊(cè),其主要功能為清熱瀉火、養(yǎng)肝明目,主要用于肝虛火旺引起視力疲勞癥和慢性結(jié)膜炎,長(zhǎng)期使用可以保護(hù)視力[1-4]。
珍珠明目滴眼液生產(chǎn)過(guò)程中運(yùn)用到乙醇,而滴眼液屬眼科用藥,要求比較嚴(yán)謹(jǐn),對(duì)制劑中乙醇?xì)埩袅啃枰M(jìn)行控制。因此,本研究采用氣相色譜法鑒定不同廠家珍珠明目滴眼液中的乙醇?xì)埩袅縖5-10],評(píng)價(jià)不同生產(chǎn)企業(yè)制劑生產(chǎn)工藝,為確保生產(chǎn)工藝的穩(wěn)定性及有效控制珍珠明目滴眼液的質(zhì)量提供參考依據(jù)。
PE Clarus 680 氣相色譜儀(美國(guó)PerkinElmer公司),乙醇為色譜純(美國(guó)Sigma-Aldrich公司),無(wú)水乙醇標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定研究院,批號(hào):1612772),正丁醇標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)藥品生物制品檢定研究院,批號(hào):160108),水為超純水(美國(guó)millipore公司Q3制備),色譜柱DB-WAX(30 m×0.320 mm,0.50 μm),樣品為市場(chǎng)收集的7個(gè)廠家的72批樣品。
2.1 色譜條件
按照氣相色譜法[《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版)附錄Ⅵ E]測(cè)定,用鍵合交聯(lián)聚乙二醇為固定液的毛細(xì)管柱;起始溫度為50℃,維持3 min,再以10℃/min的速率升溫至80℃,再以50℃/min的速率升溫至200℃,維持5 min;進(jìn)樣口溫度190℃;氫火焰離子化檢測(cè)器(FID)溫度250℃。載氣(N2)流量1.5 mL/min;空氣流量450 mL/min;氫氣流量45 mL/min,分流比為30∶1。
2.2 溶液制備
2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取無(wú)水乙醇對(duì)照品8.429 67 g,置20 mL量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,精密量取1 mL,置20 mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,作為對(duì)照品溶液。
2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液制備 精密稱取正丁醇4.7951 g,置100 mL量瓶中,用水稀釋至刻度,搖勻,精密量取1 mL,置100 mL量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,作為內(nèi)標(biāo)溶液。
2.2.3 樣品溶液制備 取0.50 g樣品加內(nèi)標(biāo)溶液0.5 mL,混勻,作為供試品溶液。
3.1 專屬性實(shí)驗(yàn)
在“2.1”色譜條件下,對(duì)照品溶液中乙醇、正丁醇保留時(shí)間均在13 min內(nèi),分離良好,說(shuō)明上述色譜條件適用于本品的含量測(cè)定。見圖1。
圖1 專屬性實(shí)驗(yàn)HPLC圖
3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍
精密量取上述對(duì)照品溶液加內(nèi)標(biāo)溶液適量稀釋制成每1 mL濃度分別為21.01,52.53,105.05,210.11,420.22,1050.55,2101.10和10505.48 μg濃度的溶液,各取1 μL,注入氣相色譜儀,記錄色譜圖,以各自的峰面積(Y)對(duì)其濃度(X)進(jìn)行線性回歸,回歸方程為:
Y=0.003X-0.093(R2=0.999),
結(jié)果表明在21.01~105 050.48 μg/mL范圍內(nèi)乙醇色譜峰面積與其濃度成良好線性關(guān)系。
3.3 精密度
取高、中、低濃度對(duì)照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣5次,計(jì)算待測(cè)組分乙醇峰面積與內(nèi)標(biāo)物正丁醇峰面積之比的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)分別為2.55 %,1.22%和3.88%,表明該方法精密度良好。
3.4 重復(fù)性
取同一批號(hào)的珍珠明目滴眼液(批號(hào):20120119)按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份,照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣,內(nèi)標(biāo)法計(jì)算乙醇含量平均值為0.22%,RSD為0.65%,表明該方法重復(fù)性良好。
3.5 穩(wěn)定性
取同一批號(hào)的珍珠明目滴眼液(批號(hào):20120119)按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,照“2.1”項(xiàng)下色譜條件,分別于配制后0,2,4,8,10,20 h后進(jìn)樣,計(jì)算待測(cè)組分乙醇峰面積與內(nèi)標(biāo)物正丁醇峰面積之比的RSD為2.84%,表明20 h內(nèi)供試品溶液基本穩(wěn)定。
3.6 加樣回收率
取已知乙醇?xì)埩袅康臉悠罚ㄅ?hào):20120119)6份,分別加入1 050.55 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件,以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算回收率平均值為96.65%,RSD為3.70 %。見表1。
取“2.2.3”項(xiàng)下樣品溶液1 μL注入氣相色譜儀,測(cè)定。按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液6份,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定迷迭香酸的色譜峰面積,內(nèi)標(biāo)法計(jì)算乙醇含量,測(cè)定結(jié)果見表2。
表1 乙醇加樣回收率
表2 72批樣品乙醇?xì)埩袅?/p>
(續(xù)表)
《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年版)二部附錄Ⅷ P中規(guī)定,乙醇為第三類溶劑殘留,不得超過(guò)0.5%。針對(duì)現(xiàn)行法定標(biāo)準(zhǔn)未設(shè)置滴眼液中乙醇?xì)埩袅康臋z查項(xiàng),建立了一種靈敏的氣相色譜測(cè)定乙醇?xì)埩袅康姆椒?,該方法能將珍珠明目滴眼液中的乙醇有效分離,具有較高的靈敏度和準(zhǔn)確性,可用于珍珠明目滴眼液的有關(guān)物質(zhì)檢查,對(duì)滴眼液中的第三類溶劑殘留進(jìn)行控制。依據(jù)上述方法檢驗(yàn),72批樣品中有20批樣品的乙醇?xì)埩袅砍^(guò)0.5%。從72批珍珠明目滴眼液樣品乙醇?xì)埩袅糠植记闆r圖中可以看出不同廠家生產(chǎn)的珍珠明目滴眼液樣品乙醇?xì)埩袅孔儎?dòng)幅度差別較大。建議增加珍珠明目滴眼液的乙醇?xì)埩袅康臋z查項(xiàng),以進(jìn)一步規(guī)范珍珠明目滴眼液的生產(chǎn)。
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本文編輯:魯守琴
Determination of Residual Ethanol Content in Zhenzhu Mingmu Eye Drops by Gas Chromatography
Feng Xia1, Liang Guo-qiang2, Chen Wei2
(1. Department of Pharmacy, Nanjing Brain Hospital Affiliated to Nanjing Medical University, Jiangsu Nanjing 210029, China; 2. Suzhou Institute of Wumen Chinese Medicine, Jiangsu Suzhou 215003, China)
Objective:To establish a method for determination of residual ethanol content in zhenzhu mingmu eye drops.Methods:Gas chromatography (GC) was adopted by using a capillary column (DB-WAX) with FID detector, serving hehelium as carrier gas. The temperature of injection port was 190℃ and that of detector was 250℃. Programmed rising of column temperature was adopted. The initial column temperature was 50℃, which was maintained for 3 mins and raised to 200℃ at a rate of 50℃/min, then maintained for 5 mins. The flow rate of carrier gas was 1.5 mL/min, while the air flow was 450 mL/min, the hydrogen flow was 45 mL/min, and the split ratio was 30∶1.Results:The calibration curve showed a good linearity at a ethanol concentration range of 21.01~105 050. 48 μg/mL. The residual ethanol contents in 18 of 72 batches of samples were more than 0.5%.Conclusion:The method is accurate, reliable and sensitive for the determination of residual ethanol content in zhenzhu mingmu eye drops.
Gas Chromatography; Hydrogen Flame Ionization Detector; Zhenzhu Mingmu Eye Drops; Residual Ethanol Content
R286.0
A
10.3969/j.issn.2096-3327.2017.05.014
2017 - 04 - 01
馮霞,女,主管中藥師。研究方向:中藥學(xué)、中藥藥理。E-mail:1565661221@qq.com
陳偉,男,碩士,主管中藥師。研究方向:中藥學(xué)。E-mail:540584399@qq.com