嗜藍(lán)孢孔菌新種FomitiporiayanbeiensisS.Guo&L.Zhou菌絲培養(yǎng)條件研究

郭尚　李艷婷　周林

摘 要：Fomitiporia yanbeiensis S. Guo & L. Zhou是從山西雁北地區(qū)沙棘腐木上分離獲得的嗜藍(lán)孢孔菌屬的新種，這個(gè)種類具有特殊功能成分，具有很高的藥用價(jià)值。該研究對(duì)其菌絲培養(yǎng)條件即溫度、pH值、碳源營(yíng)養(yǎng)、氮源營(yíng)養(yǎng)進(jìn)行了試驗(yàn)和分析。結(jié)果表明，該菌菌絲體在人工培養(yǎng)基上容易生長(zhǎng)，其最適生長(zhǎng)溫度為25℃，在最適溫度下30d左右可長(zhǎng)滿平皿。最適培養(yǎng)條件：pH為6.0，碳源為葡萄糖，氮源為蛋白胨。這些結(jié)果為該菌的人工馴化栽培和功能食品開(kāi)發(fā)提供了參考和依據(jù)。

關(guān)鍵詞：Fomitiporia yanbeiensis S. Guo & L.Zhou；培養(yǎng)條件；溫度；pH值；碳源；氮源

中圖分類號(hào) R284 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 1007-7731（2017）15-0025-3

Abstract：Fomitiporia yanbeiensis S. Guo & L. Zhou is isolated from the thermophilic fungus spore species of blue hole in Shanxi Yanbei area. This species has a special functional component and has high medicinal value. The mycelial culture conditions， temperature， pH value， carbon source nutrition and nitrogen source nutrition were tested and analyzed. The results showed that the mycelium was easy to grow on the artificial medium， and the optimum growth temperature was 25 ℃， and the culture dish could be filled by mycelium in 30 days at the optimum temperature. The optimum culture pH was 6，carbon source was glucose，and nitrogen source was peptone. These results provide a reference and basis for the domestication cultivation and functional food development of the medicinal fungi.

Key words：Fomitiporia yanbeiensis S. Guo & L. Zhou；Culture conditions； Temperature； pH ； Carbon source； Nitrogen source

Fomitiporia yanbeiensis S. Guo & L. Zhou是一種從山西雁北地區(qū)沙棘樹(shù)分離獲得的嗜藍(lán)孢孔菌屬真菌，屬擔(dān)子菌門(mén)（Basidiomycota）、傘菌綱（Agaricomycetes）、銹革孔菌目（Hymenochaetales）、銹革孔菌科（Hymenochaetaceae）、嗜藍(lán)孢孔菌屬（Fomitiporia），子實(shí)體蛋白質(zhì)含量16.10%，粗多糖2.14%，粗脂肪1.02%，氨基酸12.51%，還含有三萜類化合物、葡聚糖、黃酮等多種對(duì)人體有益的功能性成分，是一種具有很高開(kāi)發(fā)和利用價(jià)值的藥食兩用菌類[1]。本試驗(yàn)初步研究了Fomitiporia yanbeiensis S. Guo & L. Zhou菌絲體的培養(yǎng)條件，探究了其最適溫度、pH值、最佳C源和N源，以期為新菌子實(shí)體的培養(yǎng)與開(kāi)發(fā)利用提供技術(shù)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株 試驗(yàn)菌株材料采集于山西雁北地區(qū)，地區(qū)海拔1352m；為針闊葉林和混交林地生長(zhǎng)地帶，寄主為沙棘樹(shù)（Hippophae rhamnoides Linn.），標(biāo)本編號(hào)SXSYJBB1510，保存于山西省農(nóng)業(yè)科學(xué)院食用菌研究所內(nèi)。以采集的新鮮子實(shí)體，進(jìn)行組織分離得到純菌株，保存于山西省農(nóng)科院食用菌所內(nèi)（SXSYJJZ No.1510）和中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心（CGMCC No.13380）。

1.2 培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法 從溫度、pH值、不同營(yíng)養(yǎng)成分C源和N源4個(gè)方面對(duì)Fomitiporia yanbeiensis S. Guo & L. zhou菌絲進(jìn)行室內(nèi)培養(yǎng)，將試驗(yàn)菌種0.5cm×0.5cm母鐘菌塊接種到培養(yǎng)皿（90mm×90mm）10mL培養(yǎng)基中，探索其最適溫度、pH值、最佳C源和N源。

1.2.1 溫度試驗(yàn)培養(yǎng)條件及其對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響 以馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，分別在15℃、20℃、25℃、30℃、35℃的溫度下進(jìn)行培養(yǎng)，每個(gè)培養(yǎng)皿（90mm×90mm）為一個(gè)處理，共5個(gè)處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。每天測(cè)量菌落的直徑，計(jì)算平均生長(zhǎng)速度，探索菌絲體生長(zhǎng)的最適溫度。馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基成分：馬鈴薯（去皮）200g、葡萄糖20g、瓊脂20g、磷酸二氫鉀1g、維生素B110mg，水1000mL，pH自然。

1.2.2 pH值試驗(yàn)培養(yǎng)條件及其對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響 以馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，滅菌前用1mol·L-1的NaOH溶液和1mol·L-1的HCl溶液進(jìn)行調(diào)節(jié)，pH值分別為5.0、6.0、7.0、8.0、9.0，共5個(gè)處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)。為便于測(cè)量，在25℃下培養(yǎng)，每天測(cè)量菌落直徑，計(jì)算平均生長(zhǎng)速度，探索菌絲體生長(zhǎng)的最適pH值。

1.2.3 不同C源對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度的影響 選擇葡萄糖、蔗糖、麥芽糖、玉米粉、可溶性淀粉等5種作為C源，分別加入無(wú)C基礎(chǔ)培養(yǎng)基，共5個(gè)處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)，培養(yǎng)條件25℃，每天測(cè)量菌落直徑，計(jì)算平均生長(zhǎng)速度，探索菌絲體生長(zhǎng)的最適C源。無(wú)C基礎(chǔ)培養(yǎng)基：KNO3 3.0g、KH2PO4 1.0g、K2HPO4 0.4g、MgSO4 0.5g，定容至1000mL，pH6。

1.2.4 不同N源對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度的影響 選擇蛋白胨、尿素、牛肉浸膏、酵母汁、硫酸銨等5種作為N源，分別加入無(wú)N基礎(chǔ)培養(yǎng)基，共5個(gè)處理，每個(gè)處理5個(gè)重復(fù)，在25℃下培養(yǎng)，每天測(cè)量菌落直徑，計(jì)算平均生長(zhǎng)速度，探索菌絲體生長(zhǎng)的最適N源。無(wú)N基礎(chǔ)培養(yǎng)基：葡萄糖20.0g、KH2PO4 1.0g、K2HPO4 0.4g、MgSO4 0.5g，定容至1000mL[2]，pH6。

2 結(jié)果與分析

2.1 溫度試驗(yàn)培養(yǎng)條件及其對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響 從表1看出，菌絲在15～35℃之間都可以生長(zhǎng)，從菌絲生長(zhǎng)勢(shì)上看，25℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)勢(shì)最強(qiáng)。15～20℃低溫時(shí)，菌絲較密，隨著溫度升高時(shí)菌絲生長(zhǎng)狀態(tài)變稀疏。在15～20℃時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度極為緩慢，25℃時(shí)生長(zhǎng)最快，達(dá)到2mm/d；當(dāng)溫度升高時(shí)，菌絲生長(zhǎng)明顯減緩，35℃菌絲生長(zhǎng)速度只有25℃時(shí)生長(zhǎng)速度的50%左右。而且在35℃下生長(zhǎng)至第7天時(shí)，由于培養(yǎng)溫度過(guò)高，培養(yǎng)皿內(nèi)培養(yǎng)基變干菌絲停止生長(zhǎng)。差異顯著性測(cè)驗(yàn)結(jié)果表明，菌絲在25℃和30℃時(shí)生長(zhǎng)速度最快，且與其他溫度處理之間存在顯著差異。

2.2 pH值試驗(yàn)培養(yǎng)條件及其對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響 表2所示，菌絲在培養(yǎng)基pH5.0～7.0范圍內(nèi)都能生長(zhǎng)。pH6.0時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度最快，達(dá)到2mm/d，菌絲較濃密，菌絲生長(zhǎng)勢(shì)旺盛；當(dāng)pH[>]6.0時(shí)，菌絲生長(zhǎng)速度隨著pH值的升高而減慢，生長(zhǎng)勢(shì)也減慢。由此可見(jiàn)，該菌菌絲適于在偏酸性的環(huán)境中生長(zhǎng)。同時(shí)，差異顯著性測(cè)驗(yàn)結(jié)果表明，pH6.0對(duì)菌絲生長(zhǎng)速度的影響與其他處理間有顯著差異。因此，在本實(shí)驗(yàn)中，pH6.0為該菌菌絲生長(zhǎng)的最適pH值。

2.3 不同C源對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響 從表3可以看出，F(xiàn)omitiporia yanbeiensis S. Guo & L. Zhou對(duì)不同的碳源利用效果不同，在麥芽糖、玉米粉、可溶性淀粉的培養(yǎng)基中雖然菌絲生長(zhǎng)速度很快，但菌絲非常稀疏，長(zhǎng)勢(shì)很弱；在以葡萄糖和蔗糖為主要碳源的培養(yǎng)基中，其菌絲生長(zhǎng)速度較慢，但菌絲濃密或致密，生長(zhǎng)勢(shì)較強(qiáng)。所以綜合來(lái)看，F(xiàn)omitiporia yanbeiensis S. Guo & L. zhou菌絲生長(zhǎng)的最適碳源為葡萄糖，其次為蔗糖。

2.4 不同N源對(duì)菌絲體生長(zhǎng)的影響 從表4中可以看出，蛋白胨和牛肉浸膏的培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)濃密、生長(zhǎng)速度快、生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，酵母膏次之，生長(zhǎng)速度和生長(zhǎng)時(shí)都很好，只是菌絲濃密程度不如前者。以尿素為N源的培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)極慢，生長(zhǎng)勢(shì)也弱，菌絲萌發(fā)也較遲，接種后10d才開(kāi)始萌發(fā)。

3 討論

本文從溫度、pH值、不同營(yíng)養(yǎng)成分C源和N源4個(gè)方面對(duì)Fomitiporia yanbeiensis S. Guo & L. Zhou菌絲生長(zhǎng)狀況進(jìn)行了初步探討，從菌絲生長(zhǎng)速度，菌絲密度和生長(zhǎng)勢(shì)等的觀察測(cè)試，初步找出了菌絲生長(zhǎng)的最適溫度為25℃、pH值6、最佳C源為葡萄糖和蔗糖和最佳N源為蛋白胨。

Fomitiporia yanbeiensis S. Guo & L. Zhou菌絲體在人工培養(yǎng)基上容易生長(zhǎng)，在最適溫度下30d左右長(zhǎng)滿培養(yǎng)皿，較慢于其他種類的木腐菌[3-5]。通過(guò)試驗(yàn)數(shù)據(jù)的分析可以看出，F(xiàn)omitiporia yanbeiensis S. Guo & L. Zhou具較廣的生長(zhǎng)溫度，10～35℃都能較好的生長(zhǎng)，在25℃和30℃時(shí)生長(zhǎng)速度最快。

在本次實(shí)驗(yàn)中，pH值不同，對(duì)菌絲的生長(zhǎng)狀態(tài)影響不是很顯著，pH值為6時(shí)，生長(zhǎng)勢(shì)稍強(qiáng)，其他處理未見(jiàn)明顯差異。但是在不同的pH條件下，對(duì)菌絲的生長(zhǎng)速度有很大的影響，菌絲在pH6.0時(shí)生長(zhǎng)速度最快，菌絲較濃密且生長(zhǎng)勢(shì)旺盛，雖然如此，但在從整體上看，其他pH梯度下也能較好生長(zhǎng)，表明pH值可能不是影響其生長(zhǎng)的主要因素。曹春蕾等在桑木層孔菌固體培養(yǎng)條件的研究中也得到了pH在5.5～8.0范圍內(nèi)變化時(shí)菌絲生長(zhǎng)差異不大的結(jié)論[6]。

該菌菌絲對(duì)不同的碳源利用情況差異顯著，在以葡萄糖和蔗糖為主要碳源的培養(yǎng)基中，其菌絲生長(zhǎng)速度較慢，但菌絲濃密或致密，生長(zhǎng)勢(shì)較強(qiáng)，所以最適碳源為葡萄糖，其次為蔗糖。在桑木層孔菌的固體培養(yǎng)條件研究中也表現(xiàn)為以葡萄糖為碳源時(shí)生長(zhǎng)速度比淀粉為碳源時(shí)稍慢，但長(zhǎng)勢(shì)最好[6]。菌絲在N源的利用上差異不大，蛋白胨是菌絲生長(zhǎng)最佳的N源。但在尿素培養(yǎng)基上卻抑制其生長(zhǎng)，其原因有待進(jìn)一步研究。

國(guó)內(nèi)首次報(bào)道Fomitiporia yanbeiensis S. Guo & L. Zhou菌絲培養(yǎng)條件研究結(jié)果，其最適溫度為25℃，最適pH為6.0，最佳碳源和氮源為葡萄糖和蛋白胨。該菌作為一新種極具研究和開(kāi)發(fā)價(jià)值，本試驗(yàn)提供了一些人工培養(yǎng)基本參數(shù)，為今后該菌的菌種制備及大規(guī)模發(fā)酵利用等提供了理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]郭尚，龐榮，郭麗宏，李艷婷，等.嗜藍(lán)孢孔菌屬一新種的營(yíng)養(yǎng)成分及其急性毒性分析[J].中國(guó)食用菌，2016，4.

[2]周緒申，李娟，戴玉成.木蹄層孔菌培養(yǎng)條件的研究[J].西北林學(xué)院學(xué)報(bào).2008，23（5）：127-129.

[3]劉春靜，張曉陽(yáng)，戴玉成，等.鮑氏層孔菌培養(yǎng)條件的研究[J].菌物學(xué)報(bào)，2005，24（2）：306-309.

[4]魏玉蓮，周寶祥.香味全緣孔菌培養(yǎng)條件的研究[J].林業(yè)科學(xué)研究，2005，18（4）：451-454.

[5]戚淑威，袁理春，趙琪，等.不同培養(yǎng)條件對(duì)野生豬苓菌絲生長(zhǎng)的影響[J].中國(guó)食用菌，2007，26（5）：41-43.

[6]曹春蕾，崔寶凱，包海鷹.桑木層孔菌固體培養(yǎng)條件的研究[J].菌物學(xué)報(bào)，2011，30（3）：486-490.

（責(zé)編：張宏民）