饒曉兵 邱桑 莊韜 周林

桑白皮總黃酮對(duì)小鼠睡眠功能和自發(fā)活動(dòng)影響的研究

饒曉兵1邱桑2莊韜1周林1

（1南昌大學(xué)第四附屬醫(yī)院藥學(xué)部，江西南昌330003；2南昌市第九醫(yī)院藥劑科，江西南昌330002）

目的研究桑白皮總黃酮對(duì)小鼠睡眠功能和自發(fā)活動(dòng)的影響。方法1）催眠：昆明種小鼠隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組、1.0 mg/kg桑白皮總黃酮組、2.0 mg/kg桑白皮總黃酮組、4.0 mg/kg桑白皮總黃酮組（下同），觀察給藥后桑白皮總黃酮對(duì)各組小鼠閾上劑量和閾下劑量戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間和入睡時(shí)間（睡眠作用）的影響；2）自發(fā)活動(dòng)：采用抖籠法測(cè)定桑白皮總黃酮對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)（鎮(zhèn)靜作用）的影響。結(jié)果1）各劑量的桑白皮總黃酮均能顯著縮短閾上劑量和閾下劑量戊巴比妥鈉的入睡時(shí)間和顯著延長(zhǎng)閾上劑量和閾下劑量戊巴比妥鈉的睡眠時(shí)間；2）各劑量的桑白皮總黃酮對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)均具有明顯抑制作用，均能明顯減少中波和大波的活動(dòng)。結(jié)論桑白皮總黃酮具有明顯的抑制小鼠自發(fā)活動(dòng)和鎮(zhèn)靜催眠作用。

桑白皮總黃酮；催眠；自發(fā)活動(dòng)；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

桑白皮為?？坡淙~灌木或小喬木植物除去粗皮的干燥根皮。現(xiàn)代研究表明桑白皮中主要含有黃酮類化合物、香豆素類、苯駢呋喃衍生物、多糖類、甾體和萜類、揮發(fā)油等多種成分[1]。桑白皮提取物具有耐缺氧、抗糖尿病、抗炎、抗過(guò)敏、平喘等作用[2-14]。但桑白皮總黃酮鎮(zhèn)靜催眠作用研究未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)研究桑白皮總黃酮（Total Flavonoid of Cortex Mori；TFCM）對(duì)小鼠睡眠功能和自發(fā)活動(dòng)的影響，可能填補(bǔ)國(guó)內(nèi)外對(duì)桑白皮總黃酮鎮(zhèn)靜催眠研究的空白，并為桑白皮總黃酮的開(kāi)發(fā)提供有價(jià)值的基礎(chǔ)研究與臨床研究資料。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物

1.1.1 藥品桑白皮總黃酮的提?。悍Q取桑白皮粉末200 g，加入500 mL乙醚，混勻，充分?jǐn)嚢韬蠼? h。過(guò)濾浸液，濾渣再次加入同樣體積乙醚，重復(fù)操作2次，回收乙醚。脫脂濾渣加入50%分析純乙醇600 mL，控溫在50℃，超聲萃取30 min。過(guò)濾，濾渣再用600 mL 50%乙醇超聲萃取，重復(fù)操作2次，桑白皮濾液95℃水浴蒸干得桑白皮總黃酮粉末，密封后冰箱保藏備用。

桑白皮總黃酮實(shí)驗(yàn)時(shí)加數(shù)滴吐溫-80，用生理鹽水配成至所需濃度備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠：購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（動(dòng)物中心許可證號(hào)：SCXK（湘）2011-0003，動(dòng)物合格證號(hào)：43004700003244，級(jí)別：清潔級(jí)。取清潔級(jí)昆明種小鼠，每組40只，體重20±2 g，雌雄各半。

1.3 給藥方式給藥組喂以1.0、2.0、4.0 mg/kg桑白皮總黃酮，對(duì)照組喂以同體積的生理鹽水（NS）。自由飲食。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器二道生理記錄儀（LMS-2A）。拉力換能器（JZ100型肌肉張力換能器）。吊籠自制（寬10 cm，高7.5 cm，重100 g），小掛鉤。

1.5 方法

1.5.1 小鼠自發(fā)活動(dòng)（鎮(zhèn)靜作用）拉力換能器與生理記錄儀相連，吊籠拉力換能器與相連，小鼠自發(fā)活動(dòng)記錄在LMS-2A型二道生理記錄儀上。

觀察指標(biāo)：①波幅小于5 mm為小波，小波為小鼠輕度活動(dòng)，如舐毛、瘙癢等；②波幅在5 mm～10 mm為中波，中波為適當(dāng)活動(dòng)，如走動(dòng)、立起等；③波幅10 mm以上大波，大波為強(qiáng)度活動(dòng)，如跑動(dòng)等。

小鼠禁食8 h后實(shí)驗(yàn)。小鼠在吊籠中適應(yīng)3 min，記錄小鼠在吊籠中15 s內(nèi)小鼠正常自發(fā)活動(dòng)情況。小鼠適應(yīng)15 s后，所有實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃給予不同劑量的桑白皮總黃酮或等量NS，給藥后30 min再次測(cè)定15 s內(nèi)小鼠給予桑白皮總黃酮后自發(fā)活動(dòng)的波幅，觀察小鼠給予桑白皮總黃酮后鎮(zhèn)靜作用的影響。

1.5.2 戊巴比妥鈉閾上劑量和閾下劑量（睡眠作用）的影響給藥組灌胃給予不同劑量的桑白皮總黃酮或等量NS，15 min后，閾上劑量各組均腹腔注射0.25%戊巴比妥鈉，0.20 ml/10 g，閾下劑量各組均腹腔注射0.25%戊巴比妥鈉，0.10 ml/10 g，觀察小鼠給予桑白皮總黃酮后睡眠作用的影響。

1.6 數(shù)據(jù)處理各測(cè)量指標(biāo)的數(shù)據(jù)資料以（x±s）表示，組間比較用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 桑白皮總黃酮對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響結(jié)果顯示：桑白皮總黃酮能有效抑制小鼠自發(fā)活動(dòng)。提示桑白皮總黃酮具有明顯的中樞抑制作用。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 桑白皮總黃酮對(duì)小鼠自發(fā)活動(dòng)的影響（x±s，n=10）

2.2 桑白皮總黃酮對(duì)閾上劑量戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響結(jié)果顯示：桑白皮總黃酮能有效縮短閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠入睡時(shí)間和延長(zhǎng)閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間，表明桑白皮總黃酮對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有催眠作用。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 桑白皮總黃酮對(duì)閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間的影響（x±s，n=10）

2.3 桑白皮總黃酮對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉睡眠時(shí)間的影響結(jié)果顯示：桑白皮總黃酮能有效增強(qiáng)閾下劑量戊巴比妥鈉的催眠作用，使小鼠入睡數(shù)目顯著增多。表明桑白皮總黃酮與閾下劑量戊巴比妥鈉有協(xié)同催眠作用。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 桑白皮總黃酮對(duì)閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時(shí)間的影響（x±s，n=10）

3 討論

研究資料表明，全球約有27%的人存在失眠[14]。失眠是一種睡眠障礙性疾病。長(zhǎng)期失眠嚴(yán)重影響著人們身心健康、生活質(zhì)量和工作效率。現(xiàn)有治療失眠的藥物催眠作用較好，但其副作用大且易產(chǎn)生依賴性[15]。中草藥對(duì)失眠的治療歷史悠久，且療效確切，副作用小[16-18]，因此從中草藥尋找抗失眠藥具有較重要意義。自主活動(dòng)由大腦皮層控制，大腦皮層興奮性增強(qiáng)，則自主活動(dòng)增多，反之亦然。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)自主活動(dòng)的作用，間接探討了其對(duì)大腦皮層興奮性的影響。觀察桑白皮總黃酮抑制大腦皮層興奮性，促進(jìn)睡眠的影響。我們研究結(jié)果表明：桑白皮總黃酮能有效抑制小鼠自發(fā)活動(dòng)；同時(shí)桑白皮總黃酮還能有效縮短閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠的入睡時(shí)間，延長(zhǎng)閾上劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠時(shí)間和增強(qiáng)閾下劑量戊巴比妥鈉的催眠作用。提示桑白皮總黃酮具有明顯的鎮(zhèn)靜和催眠作用。

[1]張國(guó)剛，黎瓊紅，葉英子博，等.桑白皮黃酮化學(xué)成分的研究[J].中國(guó)藥物化學(xué)雜志，2005，15(2):108-112.

[3]肖海，曾昭毅，葉和楊，等.桑白皮提取物的耐缺氧效應(yīng)[J].中國(guó)臨床康復(fù)，2006，10(35):187-189.

[4]馬松濤，張效科，王秋林，等.桑白皮提取物對(duì)糖尿病大鼠坐骨神經(jīng)結(jié)構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志，2008，24(2):201-204.

[5]馬松濤，王秋林，張效科，等.桑白皮提取物對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病神經(jīng)病變的保護(hù)作用[J].中華中醫(yī)藥雜志，2006，21(12):776-777.

[6]馬松濤，張效科.桑白皮提取物對(duì)糖尿病大鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子、堿性髓鞘蛋白表達(dá)的影響[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2007，13(10):760-760，763.

[7]趙文杰，劉菲，劉南，等.桑白皮提取物對(duì)胰島素抵抗2型糖尿病小鼠的降糖作用[J].中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10(20):93-94.

[8]韋媛媛，徐峰，陳曉偉，等.桑白皮提取物抗炎實(shí)驗(yàn)研究[J].廣西工學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，17(4):23-26.

[9]馮冰虹，蘇浩沖，楊俊杰，等.桑白皮丙酮提取物對(duì)呼吸系統(tǒng)的藥理作用[J].廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，21(1):47-49.

[10]馮冰虹，蘇浩沖，楊俊杰，等.桑白皮丙酮提取物舒張血管作用機(jī)制研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2005，16(4):247-250.

[11]秦向征，李良昌，延光海，等.桑白皮水提取物對(duì)哮喘模型小鼠支氣管肺泡灌洗液中炎性細(xì)胞的影響[J].延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào)，2011，34(2):93-95.

[12]周鋒，董志，李晶，等.桑白皮總黃酮抗糖尿病作用的初步研究[J].激光雜志,2010，31(5):93-94.

[13]李良昌，秦向征，延光海，等.桑白皮水提取物的抗過(guò)敏作用[J].延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào)，2011，34(2):103-105.

[14]劉永存，張波.失眠調(diào)節(jié)機(jī)制中西醫(yī)研究進(jìn)展[J].按摩與康復(fù)醫(yī)學(xué)，2012，3(3)：55.

[15]周曉喜.治療失眠的藥物及其研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2011，23(3)：88-90．

[16]許繼宗，楊建宇，李彥知，等.失眠的中醫(yī)藥治療概況[J].中國(guó)中醫(yī)藥現(xiàn)代遠(yuǎn)程教育，2011，9(11)：166-167.

[17]劉順益.不寐的中醫(yī)藥研究概況[J].福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，15(2)：63-64.

[18]李瑜.中醫(yī)藥治療頑固性失眠的研究進(jìn)展[J].繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育，2010，24 (3)：91-93.

Study on Effect of the Total Flavones of Cortex Mori on the Function of Sleep and Spontaneous Activity in Mice

RAO Xiaobing1,QIU Sang2,ZHUANG Tao1,ZHOU Lin1
(1.Department of Pharmacy,the Fourth Affiliated Hospital of Nanchang University,Jiangxi Province,Nanchang 330003,China; 2.Department of Pharmacy,Nanchang No.9 Hospital,Jiangxi Province,Nanchang 330002,China)

Objective To study the effects of the sedative hypnosis of the flavonoids in white mulberry root-bark.Methods Hypnosis: kunming mice were randomly divided into normal saline control group,1.0 mg/kg flavonoids in white mulberry root-bark group,2.0 mg/kg flavonoids in white mulberry root-bark group,4.0 mg/kg flavonoids in white mulberry root-bark group(the same below),observe the effetcs of the dosage groups of mice on the threshold dose and subthreshold dose of sodium pentobarbital to sleeping time and fall-sleep time(sleep effects);spontaneous activity:to determine the effect of spontaneous activity(sedation)in mice by using the shaking-cage method.Results Each dose of flavonoids in white mulberry root-bark group can significantly accelerate the threshold dose and subthreshold dose of sodium pentobarbital fall-sleep time and significantly prolong threshold dose and subthreshold dose of sodium pentobarbital sleeping time.Each dose of flavonoids in white mulberry root-bark group can significantly inhibit the spontaneous activity of the mice,and they can also significantly reduce the activity of middle and large waves.Conclusion Flavonoids in white mulberry root-bark can obviously inhibiting the spontaneous activity of mice and have sedative hypnosis effect.

total flavones of cortex mori;hypnosis;spontaneous activity;animal experiment

10.3969/j.issn.1672-2779.2017.15.063

1672-2779（2017）-15-0145-02

：李海燕本文校對(duì)：錢進(jìn)

2017-06-13）