彭奎莉，張重葉，王雨薇，金子煜，車代弟*

（東北農(nóng)業(yè)大學園藝園林學院/園林植物遺傳育種與生物技術實驗室，哈爾濱黑龍江150030）

微型月季小仙女莖段快繁體系建立的研究

彭奎莉，張重葉，王雨薇，金子煜，車代弟*

（東北農(nóng)業(yè)大學園藝園林學院/園林植物遺傳育種與生物技術實驗室，哈爾濱黑龍江150030）

本研究以微型月季小仙女(Rosa The Fairy)優(yōu)良的莖段為外植體，篩選最適滅菌條件，發(fā)現(xiàn)采用1/2MS可以進行有效的芽誘導；MS+0.4 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA培養(yǎng)基可以有效誘導微型月季組培苗的增殖，增殖系數(shù)最高可達7.33；培養(yǎng)基1/2MS+0.1mg·L-1IBA可以有效誘導組培苗生根，生根率達到83.33%，平均每株根數(shù)為14.67。初步建立了小仙女快繁體系，以期為小仙女育種研究提供技術支撐。

小仙女；莖段；快繁體系；培養(yǎng)基

小仙女(Rosa The Fairy)是一種微型月季（Rosa chinensis Minima）[1]，株型矮小、花期長、花形精美，是良好的地被綠化或盆栽材料，應用前景廣泛，越來越受到人們的重視。

但是，由于微型月季植株矮小、莖細、扦插繁殖較難、繁殖系數(shù)較低，影響其規(guī)模化生產(chǎn)[2]，因此，建立高效、穩(wěn)定且可用于遺傳改良的小仙女快速繁殖體系具有重要意義。

我國目前對微型月季組織培養(yǎng)的研究較少，因此本實驗以小仙女優(yōu)良品種為材料，對影響建立莖段高頻快繁體系的激素組合進行研究，得到植株在各個階段的適宜培養(yǎng)方式，建立快繁體系，為小仙女育種研究提供技術支持。

1 試驗材料與方法

1.1 外植體的選擇及消毒

試驗材料小仙女優(yōu)質品種由東北農(nóng)業(yè)大學園林育種與生物技術實驗室保存。

取生長健壯無病蟲害的帶芽莖段為外植體，用洗衣粉水浸泡20 min，流水沖洗1 h，移至超凈工作臺，然后用75%酒精浸泡90 s，無菌水清洗3遍，采用2.0%、4.0%、6.0%NaClO 3個濃度滅菌，設置6 min、12 min、18 min 3個時間處理，每種處理接種10個外植體，3次重復，接種15 d后觀察記錄。

培養(yǎng)條件為：MS基本培養(yǎng)基，溫度25±1℃，光照時間12 h/d。

1.2 繼代培養(yǎng)

當外植體材料上萌發(fā)的芽長到0.5～1 cm時，將芽切下轉入繼代培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基以MS為基本培養(yǎng)基，加入不同濃度的6-BA及NAA，每個處理樣品30個，25 d后觀察記錄。

1.3 生根培養(yǎng)

當小仙女組培苗長到2～3 cm時，轉入生根培養(yǎng)基中，以1/2 MS為基礎培養(yǎng)基，設置2因素(NAA、IBA) 3水平試驗，接種后觀察記錄。

2 結果與分析

2.1 不同消毒時間對外植體污染率的影響

由表1可見，莖段的染菌率比較低，其中2%的Na-ClO處理12 min、18 min，4%的NaClO處理6 min染菌率為0，表明較高NaClO濃度及較長的消毒時間利于小仙女莖段滅菌；但6%的NaClO處理12 min、18 min，雖然污染率為0，但葉片死亡數(shù)增加，表明Na-ClO對外植體莖段造成一定的損傷。不同NaClO濃度和消毒時間對莖段滅菌情況有較大的影響，所以外植體在2%的NaClO處理12 min、18 min，4%的NaClO處理6 min效果最好，污染率為0、葉片損傷也相對較少。

表1 不同NaClO濃度和滅菌時間污染率比較情況

2.2 不同激素種類和濃度對小仙女繼代的影響

由表2可見，培養(yǎng)基中含0.4 mg/L 6-BA，0.1 mg/L IAA激素的X4處理的增殖系數(shù)最大，為7.33；X1處理增殖系數(shù)最小，為0.03；在X1-X6組合中，隨著6-BA激素濃度增加，分化系數(shù)隨之增大。實驗表明，適量激素能促進其生長發(fā)育，過量的激素反而抑制植株的生長。

2.3 不同激素組合對小仙女生根的影響

由表3可見，在9組1/2MS培養(yǎng)基中，不加NAA、IBA激素處理的，生根率可達100%，但部分根系發(fā)黑；加0.1mg·L-1IBA激素的培養(yǎng)基中不定根誘導效果最好，根系細長、明顯。不同濃度的NAA、IBA對小仙女誘導不定芽生根有一定的抑制作用，誘導出的不定芽的數(shù)量較少，而且根系細短而柔軟。

表2 不同激素組合對小仙女繼代的影響

3 討論與結論

目前，國內(nèi)幾乎沒有對小仙女的專門報道，而早在1996年產(chǎn)于丹麥的微型月季就已高達3 500萬株[3]。研究發(fā)現(xiàn)，利用帶芽莖段為外植體直接進行離體培養(yǎng)，建立了微型月季的快速繁殖體系，但繁殖頻率較低[4]。本研究初步建立了小仙女的快繁體系，為其育種研究奠定基礎。

小仙女外植體用75%酒精消毒90 s，2%的NaClO處理12 min、18 min，4%的NaClO處理6 min，污染率為0。細胞分裂素可以促進叢生芽的增殖[5]，與低質量濃度的NAA配合使用時，隨著6-BA質量濃度的增加，增殖倍數(shù)增加，當質量濃度為0.4 mg/L時達到最大，繼續(xù)增大，增殖倍數(shù)變化不大，反而有下降趨勢。結果表明小仙女增殖的最佳培養(yǎng)基為：MS+ 0.4 mg/L 6-BA+0.1 mg/L IAA，最佳生根培養(yǎng)基為1/2MS+ 0.1 mg/L IBA。

[1]陳有民.園林樹木學[M].中國林業(yè)出版社，1988.

[2]朱建華，湯曉.月季[M].北京：金盾出版社，1992.

[3]Müller R，Andersen AS，Serek M.Differences in display lifeofminiaturepottedroses(RosahybridaL.)[J].Sci Hortic，1998（76）：59-71.

[4]于冰沁.微型月季組織培養(yǎng)的研究[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學，2005（4）：53-54.

[5]譚文澄,戴策剛.觀賞植物組織培養(yǎng)技術[M].中國林業(yè)出版社，1991:147-171.

表3 不同激素組合對小仙女生根的影響

1005-2690（2017）08-0121-02

S685.12

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2017-07-05）