趙玉璽++閆磊++閆躍飛++皇超英++李亞昆++薛永康++趙新芳++張震

摘要：闡述了犢牛分泌性腹瀉形成機制、分類及治療方法，以期促進新藥物的開發(fā)和犢牛養(yǎng)殖行業(yè)的健康發(fā)展。

關(guān)鍵詞：犢牛；分泌性腹瀉；治療方法；研究進展

中圖分類號：S858.23 文獻標識碼：B 文章編號：1007-273X（2017）08-0010-03

幼犢期疾病對養(yǎng)牛業(yè)的經(jīng)濟產(chǎn)生重大影響，犢牛的損失、治療的直接成本、生產(chǎn)性能降低等[1]。犢牛腹瀉是一種常見的疾病，也是造成奶牛經(jīng)濟損失的主要原因。分泌性腹瀉是犢牛腹瀉的一種類型，了解分泌性腹瀉的形成機理對于犢牛腹瀉的防治十分必要。

1 分泌性腹瀉形成的機制

腹瀉是由于腸上皮細胞分泌過多或吸收的液體和電解質(zhì)受損造成的。流體在腸腔和血液流動是由離子的主動運輸驅(qū)動的，主要是Na+、Cl-、HCO3-、K+和溶質(zhì)（主要是葡萄糖）。液體吸收或分泌涉及位于頂端（面向管腔）和基底（面向循環(huán)）上皮細胞膜膜轉(zhuǎn)運蛋白的協(xié)調(diào)[2]。腸上皮細胞結(jié)構(gòu)由手指狀突起（絨毛）和腺狀的管狀結(jié)構(gòu)（隱窩）組成，相對絨毛和腺窩比例不同。在功能上，吸收和分泌可以發(fā)生在相同的上皮細胞，隱窩在分泌過程占主導地位，絨毛在吸收過程占主導地位。

液體吸收的主要驅(qū)動力來自于跨腸上皮細胞Na+的主動運輸和Cl-或者HCO3-的吸收。這個過程的電化學驅(qū)動力來自于基底外側(cè)的Na+/K+-ATP酶。在小腸中液體的吸收是在Na+/H+轉(zhuǎn)運蛋白3（NHE3，又叫做SLC9A3）、Na+/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運蛋白1（SLC5A1）和Cl-/HCO3-轉(zhuǎn)換器[DRA（SLC26A3）和PAT1（SLC26A6）]作用下完成的[3]。電中性液體的吸收是在NHE3和Cl-/HCO3-轉(zhuǎn)換器協(xié)同活化作用下完成（PAT1主要影響HCO3-的吸收，而DRA主要影響空腸和結(jié)腸對Cl-的吸收）[4]?；|(zhì)特異性轉(zhuǎn)運蛋白（如SLC5A1）促進Na+與D-葡萄糖（或半乳糖）一起跨越頂膜，電中性葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白SLC2A2促進葡萄糖離開基底外側(cè)膜[5]。在近端結(jié)腸Na+的轉(zhuǎn)運除了Na+/H+轉(zhuǎn)運蛋白，還可與通過Na+通道轉(zhuǎn)運和短鏈脂肪酸的轉(zhuǎn)運來協(xié)同轉(zhuǎn)運。胞內(nèi)信使包括Ca2+和環(huán)化核苷酸，例如cAMP和cGMP可以抑制細胞膜頂端的Na+轉(zhuǎn)運蛋白的活性[6]，從而抑制液體的吸收。

腸液分泌是通過基底外側(cè)和頂端Cl-通道和轉(zhuǎn)運蛋白的跨上皮分泌物驅(qū)動的。Cl-通過由Na+/K+-ATP酶產(chǎn)生的Na+濃度梯度驅(qū)動的Na/K/Cl轉(zhuǎn)運體（NKCC1，也稱為SLC12A2）在基底外側(cè)膜轉(zhuǎn)運到細胞中[7]?；淄鈧?cè)K+通道（KCNQ1/KNE3和KCNN4）提供了跨過Cl-通道的頂端Cl-離子的電化學驅(qū)動力[8]，這一過程主要是環(huán)核苷酸激活的囊性纖維化跨膜傳導調(diào)節(jié)子（CFTR）和Ca2+活化了Cl-通道。腸神經(jīng)和細胞表面受體如鈣敏感受體（CaSR）也被認為可調(diào)節(jié)細胞內(nèi)信號通路，從而調(diào)節(jié)電解質(zhì)的吸收和分泌[9]。

2 分類

2.1 細菌性腹瀉

細菌，如霍亂弧菌和腸毒素性大腸桿菌分泌特異性腸毒素（分別為霍亂毒素和熱穩(wěn)定腸毒素），增加細胞內(nèi)環(huán)核苷酸的水平，導致頂端CFTR Cl-通道的活化，因此引起腸液分泌[10]。來自永生化和原代人腸細胞的數(shù)據(jù)顯示，細菌腸毒素的cAMP、cGMP和Ca2+濃度的升高也抑制NHE3[11]。細菌也可以增加各種體液激動劑，神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)肽受體例如5羥色胺，VIP肽和1型甘藍素受體，從而激活Cl-分泌并抑制Na+吸收[12]。侵入性細菌如沙門氏菌和志賀氏菌引起組織炎癥反應，包括免疫細胞的聚集和細胞因子的釋放，導致細胞內(nèi)Ca2+發(fā)生信號傳導[13]。致腸病侵襲性的細菌也導致運輸?shù)鞍妆磉_的改變，引起腹瀉。

2.2 病毒性腹瀉

輪狀病毒感染腸道后會引起液體的分泌和小腸上皮細胞結(jié)構(gòu)的改變，產(chǎn)生與年齡相關(guān)的分泌性腹瀉[14]。復雜的輪狀病毒蛋白（NSP4）被認為是通過結(jié)合膜受體（整聯(lián)蛋白α1β2），神經(jīng)肽甘丙肽或通過腸神經(jīng)激活引起細胞質(zhì)Ca2+濃度升高的腸毒素[15]。輪狀病毒NSP4還抑制NHE3和SLC5A1[16]。目前尚不知道其他腸道病毒，例如諾如病毒引起腹瀉的分子機制[17]?？赡艽嬖谒幬镎T導腹瀉的多種致病機制，但有證據(jù)表明某些藥物，例如化療藥物通過類似于輪狀病毒性腹瀉的細胞內(nèi)Ca2+依賴機制誘導腹瀉[18]。

2.3 炎性腹瀉

自身免疫性疾病，如犢牛乳糜瀉可見腸道炎癥。雖然這些疾病的主要特征是繼發(fā)于不適當?shù)拿庖呒毎罨穆越M織損傷，但幾種重疊的信號傳導途徑影響腸液輸送穩(wěn)態(tài)[19]。激活上皮炎癥信號通路如NF-κB導致Ca2+或環(huán)狀核苷酸信號傳導和刺激分泌或抑制Na+吸收。通過激活的T細胞和嗜中性粒細胞釋放炎癥介質(zhì)如TNF和IL-6，導致黏膜肥大細胞脫顆粒、組胺、前列腺素的釋放也可以刺激分泌[20]。也可能通過炎癥影響上皮Na+吸收，主要是因為一些細菌病原體，如艱難梭菌，這是導致抗生素相關(guān)性腹瀉的最常見原因。艱難梭菌相關(guān)性腹瀉和結(jié)腸炎發(fā)生是繼發(fā)性的，可以激活上皮細胞炎癥信號通路并招募免疫細胞。

3 治療方法

3.1 口服補液法

動物腹瀉口服補液治療方法是從人治療霍亂的基礎(chǔ)上發(fā)展而來的，口服補液治療腹瀉被認為是20世紀醫(yī)學最重要的進步[21]。有效的口服補液一般要求溶液易被吸收、能補充細胞外液量、糾正酸中毒[22]。

在選擇口服補液藥物時需要考慮以下因素。由于Na+是細胞外液滲透壓的主要離子，所以在選擇的藥物應該含有Na+。研究發(fā)現(xiàn)，Na+濃度為120 mmol/L的溶液糾正了脫水，而濃度較低的溶液則沒有[23]。較少的研究表明，溶液中Na+的濃度>130 mmol/L是有害的。獸醫(yī)師一般建議口服補液的藥物Na+的濃度在90～130 mmol/L[24]。促進口服補液治療發(fā)展的關(guān)鍵科學是發(fā)現(xiàn)鈉和葡萄糖的偶聯(lián)轉(zhuǎn)運[25]。除了葡萄糖外，中性氨基酸（例如甘氨酸或谷氨酰胺）和揮發(fā)性脂肪酸（如乙酸鹽或丙酸鹽）已被證明能增強腸內(nèi)鈉的吸收[26]。葡萄糖與鈉比例為1～3∶1在獸醫(yī)臨床上已被推薦。endprint

代謝性酸中毒被認為是新生犢牛腹瀉頻繁且潛在的嚴重并發(fā)癥。腹瀉導致更少的碳酸氫鹽通過糞便排出體外，減少腎小球?qū)潆x子的濾過率，L-乳酸在犢牛體內(nèi)的積累，導致更為嚴重的酸中毒。除此之外，反芻動物產(chǎn)生和吸收D-乳酸在犢牛代謝性酸中毒中也起到重要的作用[27]。代謝性酸中毒在反芻動物幼年期比其他動物更為常見[28]，這很可能是目前關(guān)于犢牛使用口服補液藥物的堿化能力的建議（60-80毫克/升[29]）遠高于當前WHO推薦的（30 mmol/L）[30]，通常用于商業(yè)口服補液的碳酸氫鹽和碳酸氫鹽前體主要是乙酸鹽和丙酸鹽。碳酸氫鹽使酸酐比丙酸鹽和乙酸鹽更高程度地酸化，從而降低小牛抗細菌感染的非特異性抗性[31]。在喂奶后不到2～4 h，避免使用含碳酸氫鹽的口服補液藥物。

3.2 持續(xù)飼喂法

傳統(tǒng)上無論是短時間腹瀉還是持續(xù)性腹瀉，首先被推薦的是取消犢牛牛奶喂養(yǎng)[32]。但是沒有足夠的科學證據(jù)能證明饑餓可以提高腹瀉犢牛的治愈率。事實上，盡管在腹瀉期間犢牛消化能力有所降低，但是，喂奶不會惡化或延長腹瀉的過程。相反，取消牛奶供應會迅速導致營養(yǎng)不良和體重下降[33]。持續(xù)喂奶不僅提供了整個腹瀉期間增重和增長所需的能量，而且提供了恢復腸黏膜所必需的營養(yǎng)[34]。

3.3 適當?shù)氖褂每股?/p>

獸醫(yī)行業(yè)也面臨著使用抗生素日趨嚴峻的壓力，濫用抗生素可促進抗生素耐藥菌株的選擇和隨后的增殖[35]。在這種情況下，Constable[35]對新生小牛腹瀉中抗菌素治療的益處進行了研究，得出以下結(jié)論：不推薦在沒有系統(tǒng)疾病的犢牛中使用口服或注射用抗生素；腹瀉和全身疾病的犢牛（顯著的抑郁癥、厭食、發(fā)熱），有細菌血癥或敗血病風險以及小腸細菌過度生長的風險時，推薦使用廣譜β-內(nèi)酰胺抗菌藥（頭孢噻呋，阿莫西林或氨芐青霉素），強化磺胺類或氟喹諾酮類；從糞便樣本培養(yǎng)的細菌敏感性測試不能可靠地預測腹瀉犢牛的治療結(jié)果。

3.4 輔助治療用藥

使用美洛昔康的非甾體抗炎藥物治療已被證明在改善腹瀉犢牛的食物攝入和體重增加方面是有效的，氟尼辛葡甲胺在治療由熱穩(wěn)定大腸桿菌腸毒素引起犢牛便血有比較好的效果。過去有人使用糖皮質(zhì)激素、運動性調(diào)節(jié)劑來治療犢牛腹瀉，現(xiàn)該治療方法已被禁止，也有人使用腸道保護劑和益生菌來治療腹瀉，但沒有科學證據(jù)證明它們確實有效[36]。

4 小結(jié)

分泌性腹瀉（細菌、病毒、炎性）是引起犢牛腹瀉的常見病因。明白分泌性腹瀉的致病機理、常用的治療方法以及犢牛腹瀉治療的誤區(qū)，在治療腹瀉犢牛時選擇合理的藥物和合理的方法，提高腹瀉犢牛治愈率，減輕奶農(nóng)負擔，促進中國奶牛養(yǎng)殖健康發(fā)展。

參考文獻：

[1] DONOVAN GA，DOHOO IR，MONTGOMERY DM，et al.Calf and disease factors affecting growth in female Holstein calves in Florida，USA[J].Prev Vet Med 1998，33（1-4）：1-10.

[2] THIAGARAJAH J R，VERKMAN A S. Water transport in the gastrointestinal tract[J].Physiology of the Gastrointestinal，2006， 187（10）：1827-1845.

[3] WALKER N M，SIMPSON J E，BRAZILL JM，et al. Role of down-regulated in adenoma anion exchanger in HCO3- secretion across murine duodenum[J].Gastroenterology，2009，136（3）：893-901.

[4] SEIDLER U E. Gastrointestinal HCO3- transport and epithelial protection in the gut：New techniques，transport pathways and regulatory pathways[J].Curr Opin Pharmacol，2013，13：900-908.

[5] XIA W，YU Q，RIEDERER B，et al. The distinct roles of anion transporters Slc26a3 （DRA） and Slc26a6（PAT-1） in fluid and electrolyte absorption in the murine small intestine[J].Pflugers Arch，2014，466：1541-1556.

[6] ZACHOS N C，ROSSUM D B，LI X，et al. Phospholipase C-γ binds directly to the Na+/H+ exchanger 3 and is required for calcium regulation of exchange activity[J].J Biol Chem，2009， 284：19437-19444.

[7] BBARRETT K E，KEELY S J. Chloride secretion by the intestinal epithelium：molecular basis and regulatory aspects[J].Annu Rev Physiol，2000，62：535-572.

[8] MATOS J E，SAUSBIER M，BERANEK G，et al. Role of cholinergic-activated KCa1.1（BK），KCa3.1（SK4） and KV7.1（KCNQ1） channels in mouse colonic Cl- secretion[J].Acta Physiol （Oxf），2007，189：251-258.endprint

[9] GEIBEL J，SRITHARAN K，GEIBEL R，et al. Calcium-sensing receptor abrogates secretagogue- induced increases in intestinal net fluid secretion by enhancing cyclic nucleotide destruction[J].Proc Natl Acad Sci USA，2006，103：9390–9397.

[10] RAO M C，GUANDALINI S，SMITH P L，et al. Mode of action of heat-stable Escherichia coli enterotoxin. Tissue and subcellular specificities and role of cyclic GMP[J].Biochim Biophys Acta，1980，632：35-46.

[11] HECHT G，HODGES K，GILL R K，et al. Differential regulation of Na+/H+ exchange isoform activities by enteropathogenic E. coli in human intestinal epithelial cells[J].Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2004，287：370-378.

[12] WAPNIR R A，TEICHBERG S. Regulation mechanisms of intestinal secretion：implications in nutrient absorption[J].J Nutr Biochem，2002，13：190-199.

[13] BERKES J，VISWANATHAN V K，SAVKOVIC S D，et al. Intestinal epithelial responses to enteric pathogens：effects on the tight junction barrier， ion transport，and inflammation[J].Gut，2003，52：439-451.

[14] Morris A P，Scott J K，Ball J M，et al. NSP4 elicits age-dependent diarrhea and Ca2+ mediated I- influx into intestinal crypts of CF mice[J]. Am J Physiol，1999，277：431-444.

[15] SEO N S，ZENGC Q，HYSER J M，et al. Integrins α1β1 and α2β1 are receptors for the rotavirus enterotoxin[J].Proc Natl Acad Sci USA，2008，105：8811-8818.

[16] HALAIHEL N，LI？魪VIN V，BALL J M，et al. Direct inhibitory effect of rotavirus NSP4 （114-135） peptide on the Na+-Dglucose symporter of rabbit intestinal brush border membrane[J].J Virol，2000，74：9464-9470.

[17] PAYNE D C，VINJ？魪 J，SZILAGYI P G，et al. Norovirus and medically attended gastroenteritis in，U. S children[J].N Engl J Med，2013，368：1121-1130.

[18] RUFO P A，LIN P W，ANDRADE A，et al. Diarrhea-associated HIV-1 APIs potentiate muscarinic activation of Cl- secretion by T84 cells via prolongation of cytosolic Ca2+ signaling[J].Am J Physiol Cell Physiol，2004，286：998-1008.

[19] GAREAU M G，BARRETT K E. Fluid and electrolyte secretion in the inflamed gut：novel targets for treatment of inflammation-induced diarrhea[J].Curr Opin Pharmacol，2013，13：895-899.

[20] GELBMANN C M，SCHTEINGART C D，THOMPSON S M，et al. Mast cells and histamine contribute to bile acid-stimulated secretion in the mouse colon[J].J Clin Invest，1995，95：2831-2839.

[21] VICTORA C G，BRYCE J，F(xiàn)ONTAINE O，et al.Reducing deaths from diarrhoea through oral rehydration therapy[J].Bull World Health Organ，2000，78：1246-1255.endprint

[22] MICHELL A R.Why has oral rehydration for calves and children diverged：direct vs. indirect criteria of efficacy[J].Res Vet Sci，2005，79：177-181.

[23] MICHELL A R，BROOKS H W，WHITE D G，et al.The comparative effectiveness of three commercial oral solutions in correcting fluid，electrolyte and acid-base disturbances caused by calf diarrhoea[J].Br Vet J，1992，148：507-522.

[24] SMITH G W.Treatment of calf diarrhea：Oral fluid therapy[J].Vet Clin N Am：Food Anim Pract，2009，25：55-72.

[25] AVERY M E，SNYDER J D. Oral therapy for acute diarrhea. The underused simple solution[J].N Engl J Med，1990，323：891-894.

[26] DEMIGNE C，REMESY C，CHARTIER F，et al.Effect of acetate or chloride anions on intestinal absorption of water and solutes in the calf[J].Am J Vet Res，1981，42：1356-1359.

[27] LORENZ I. Influence of D-lactate on metabolic acidosis and on prognosis in neonatal calves with diarrhoea[J].J Vet Med A Physiol Pathol Clin Med，2004，51：425-428.

[28] BLEUL U，SCHWANTAG S，STOCKER H，et al. Floppy kid syndrome caused by D-lactic acidosis in goat kids[J].J Vet Int Med，2006，20：1003-1008.

[29] DESJEUX J F，TANNENBAUM C，TAI Y H，et al. Effects of sugars and amino acids on sodium movement across small intestine[J].Am J Dis Child，1977，131：331-340.

[30] BACHMANN L，HOMEIER T，ARLT S，et al.Influence of different oral rehydration solutions on abomasal conditions and the acid-base status of suckling calves[J].J Dairy Sci，2009， 92：1649-1659.

[31] RADOSTITS O M，RHODES C S，MITCHELL M E，et al.A clinical evaluation of antimicrobial agents and temporary starvation in the treatment of acute undifferentiated diarrhea in newborn calves[J].Can Vet J，1975，16：219-227.

[32] GARTHWAITE B D，DRACKLEY J K，MCCOY G C，et al.Whole milk and oral rehydration solution for calves with diarrhea of spontaneous origin[J].J Dairy Sci，1994，77：835-843.

[33] HEATH S E，NAYLOR J M，GUEDO B L，et al.The effects of feeding milk to diarrheic calves supplemented with oral electrolytes[J].Can J Vet Res，1989，53：477-485.

[34] MATEU E，MARTIN M. Why is anti-microbial resistance a veterinary problem as well[J].J Vet Med B Infect Dis Vet Public Health，2001，48：569-581.

[35] CONSTABLE P D. Antimicrobial use in the treatment of calf diarrhea[J].J Vet Int Med，2004，18：8-17.

[36] PHILIPP H，SCHMIDT H，D？譈RING F，et al.Efficacy of meloxicam （Metacam） as adjunct to a basic therapy for the treatment of diarrhea in calves[J].Acta Vet Scand，2003，44：1.endprint