文光科

（廣東富陽生物科技有限公司，廣東 河源 517583）

茶樹油抗菌液的制備研究*

文光科

（廣東富陽生物科技有限公司，廣東 河源 517583）

采用茶樹油為原料，制備抗菌液，并對(duì)其殺菌試驗(yàn)和皮膚的刺激性試驗(yàn)進(jìn)行研究。試驗(yàn)結(jié)果表明，茶樹油抗菌液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌等多種致病菌和真菌有很好的殺滅和抑制作用，而對(duì)皮膚只有輕微的刺激作用。

茶樹油（TTO）；抗菌液；殺菌試驗(yàn)

由于化學(xué)消毒劑對(duì)人體具有較強(qiáng)的刺激性和危害性，而且對(duì)病毒的殺滅效果不理想。研究人員發(fā)現(xiàn)消毒劑還會(huì)“訓(xùn)練”細(xì)菌，使其對(duì)抗生素藥物也產(chǎn)生耐藥性，從而形成“超級(jí)病菌”［1］。因此，人們迫切希望能從天然中草藥中研制出抗菌作用強(qiáng)、無不良反應(yīng)、使用方便、不會(huì)產(chǎn)生抗藥性的中藥抗菌液。但目前市場上的純天然中藥抗菌液不多。主要原因是天然的中藥抗菌液抗菌活性低，只能殺滅多數(shù)細(xì)菌繁殖體、部分真菌和病毒，對(duì)耐藥菌作用不佳，屬于低效抗菌液，且性能價(jià)格比不合理，無法滿足市場需求。

互葉白千層（Melaleuca alterngotia）的新鮮枝葉經(jīng)水蒸汽蒸餾而得到的精油（俗稱茶樹油，Tea tree oil）茶樹油廣泛應(yīng)用于制藥、日化、食品、香料等行業(yè)應(yīng)用于個(gè)人護(hù)理品、護(hù)發(fā)品、化妝品、口腔用品、寵物用品、空氣清新劑、家庭清潔劑、消炎藥品等100多種系列產(chǎn)品中［2］。由于茶樹油中含有的松油烯-4-醇是一種主要的天然抗菌劑，其，其對(duì)細(xì)胞靶的作用方式是損毀病菌、病原體的細(xì)胞壁（膜），然后改變細(xì)胞成分。故微生物對(duì)許多抗菌素和磺胺藥的獲得性免疫（抗藥性）的情況，對(duì)茶樹油不會(huì)發(fā)生。然而，目前市場尚無純天然的茶樹油抗菌液產(chǎn)品。因此將茶樹油研發(fā)成天然環(huán)保的抗菌液系列產(chǎn)品，用于空氣清潔、家庭家居清潔、汽車清潔，皮膚清潔等方面，市場前景十分廣闊，經(jīng)濟(jì)價(jià)值十分可觀，是可持續(xù)發(fā)展的綠色產(chǎn)業(yè)。

1 材料與方法

1.1 茶樹油抗菌液制備

1.1.1 主要成分：茶樹油（TTO）100%(廣東富陽生物科技有限公司提供)、聚山梨酯80醫(yī)藥級(jí)（吐溫）(河南景昌化工產(chǎn)品有限公司提供)、薄荷腦(99%醫(yī)藥級(jí)，鄭州市食代添驕化工有限公司提供)、丙三醇AR（廣州市東征化玻儀器有限公司）、乙醇95%（食品級(jí)(普通級(jí))，廣州俱輝化工有限公司提供）、純化水（符合中國藥典2015年版，廣東富陽生物科技有限公司提供）等。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)步驟：稱取原料茶樹油、甘油、吐溫，混合均勻。用燒杯稱取原料薄荷腦于套式恒溫器中加熱溶解為薄荷腦液，加入茶樹油、甘油、吐溫的混合液中混勻，投入攪拌鍋，加入乙醇、純化水，攪拌30min后出料，成品檢測(cè)合格后入庫。

1.2 殺菌試驗(yàn)

1.2.1 材料

試驗(yàn)菌株：金黃色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus，ATCC25903)、大腸桿菌（Escherichia coli，ATCC25922）、綠膿桿菌（Pseudomonas aeruginosa，ATCC27853)、白色念珠菌（Candida albicans，ATCC103231)、以上菌種代數(shù)為4～6代，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供。試驗(yàn)樣品：茶樹油抗菌液。主要儀器：微孔濾膜濾器（上海信步）、濾膜（南京艾宇琦膜科技有限公司）、氣泵（ZH-ZKL007）等。

1.2.2 方法

1）菌懸液的制備：依據(jù)文獻(xiàn)［3］進(jìn)行試驗(yàn)，含菌量為 1×104 cfu/ml～ 9×104 cfu/ml。

2）過濾沖洗法鑒定試驗(yàn)：依據(jù)文獻(xiàn)［3］及文獻(xiàn)［4］進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)菌為金黃色葡萄球菌。試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理：①試驗(yàn)樣品＋菌懸液；②（試驗(yàn)樣品＋菌懸液）＋過濾沖洗法處理；③（菌懸液＋水〉＋過濾沖洗法處理；④菌懸液。分為A、B2組進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)，A組：試驗(yàn)樣品用原液，處理時(shí)間lmin，B組：試驗(yàn)樣品用50%的稀釋液，處理時(shí)間lmin。試驗(yàn)重復(fù)3次，試驗(yàn)溫度20～22℃。

3）懸液定量殺菌試驗(yàn)：根據(jù)文獻(xiàn)［5］及文獻(xiàn)［6］進(jìn)行試驗(yàn)。用試驗(yàn)樣品原液，處理時(shí)間分別為l、2、5。試驗(yàn)重復(fù)3次，試驗(yàn)溫度20～22℃，試驗(yàn)菌為金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌、白色念珠菌。

4）穩(wěn)定性試驗(yàn)：依據(jù)文獻(xiàn)［3］及文獻(xiàn)［4］進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)菌株：大腸桿菌、白色念珠菌。保存條件：樣品密封包裝，放置37℃的恒溫箱中，存放3個(gè)月（有效期2a試驗(yàn)），試驗(yàn)溫度 20～22℃。

1.3 皮膚刺激試驗(yàn)

1.3.1 材料和動(dòng)物

受試物：茶樹油抗菌液、液體、原樣直接供試。動(dòng)物：新西蘭家兔（普通級(jí)）3只，體重2.0～3.0kg，由廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.3.2 方法

依據(jù)文獻(xiàn)［6］，實(shí)驗(yàn)前24h先將家兔背部毛左右各剪去約3 cm×3cm。次日，在確定無皮膚損傷情況下用藥，將受試物0.5ml均勻涂抹在一側(cè)2.5cm×2.5cm去毛區(qū)皮膚，另一側(cè)作空白對(duì)照。敷藥4h后用溫水洗去殘留物。每天涂抹一次，連續(xù)14d。在每次涂抹24h后觀察結(jié)果，計(jì)算每天每只動(dòng)物平均積分（刺激指數(shù)）判定皮膚刺激強(qiáng)度。皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)及皮膚刺激強(qiáng)度分級(jí)見表1～2。

表1 皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 皮膚刺激強(qiáng)度分級(jí)

2 結(jié)果與分析

2.1 過濾沖洗鑒定

過濾沖洗法鑒定試驗(yàn)結(jié)果見表3，由表3可知，A組：處理①平均生長菌落數(shù)為0cfu/ml，處理②平均生長菌落數(shù)為0cfu/ml，處理③與處理④平均生長菌落數(shù)相近，各處理間菌落數(shù)誤差率為36.84%。陰性對(duì)照：稀釋液、培養(yǎng)基均無菌生長。B組：處理①平均生長菌落數(shù)為1.47×103 cfu/ml，處理②平均生長菌落數(shù)為1.32×104cfu/ml，處理③與處理④平均生長菌落數(shù)相近，各處理間菌落數(shù)誤差率為39.57%。陰性對(duì)照：稀釋液、培養(yǎng)基均無菌生長。兩組試驗(yàn)說明采用過濾沖洗法，可有效去除試驗(yàn)樣品對(duì)金黃色葡萄球菌的作用，且該方法對(duì)試驗(yàn)菌無不良影響。

2.2 滅菌效果及穩(wěn)定性

由表4可知，經(jīng)3次重復(fù)試驗(yàn)表明：茶樹油抗菌液在試驗(yàn)溫度 20～22℃時(shí)，該試驗(yàn)樣品原液，處理 lmin、2min、5min，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌的殺滅率均為100%；樣品于37℃的恒溫箱中，存放3個(gè)月后，該試驗(yàn)樣品原液，處理lmin，對(duì)大腸桿菌、白色念珠菌的殺滅率為100%。陰性對(duì)照：稀釋液、培養(yǎng)基均無菌生長。

表3 過濾沖洗法鑒定試驗(yàn)結(jié)果

表4 茶樹油抗菌液對(duì)金葡球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌的殺滅效果及穩(wěn)定性

表5 茶樹油抗菌液對(duì)家兔多次皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分

2.3 皮膚刺激試驗(yàn)

由表5可知，在觀察期內(nèi)，受試的新西蘭家兔在涂抹茶樹油抗菌液第4d皮膚勉強(qiáng)可見紅斑，第5d明顯可見紅斑，第6～14d有重度到嚴(yán)重紅斑。在14d觀察期內(nèi)未見水腫等異常反應(yīng)，刺激指數(shù)為0.71。說明茶樹油抗菌液對(duì)新西蘭家兔皮膚刺激屬輕度刺激性。

3 小結(jié)

采用過濾沖洗法可有效去除試驗(yàn)樣品對(duì)金黃色葡萄球菌的作用，且該方法對(duì)試驗(yàn)菌無不良影響。該試驗(yàn)樣品原液，處理lmin、2min、5min，對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌和白色念珠菌的殺滅率均為100%；于37℃的恒溫箱中，存放3個(gè)月后，樣品原液對(duì)大腸桿菌、白色念珠菌的殺滅效果無影響。

皮膚刺激試驗(yàn)表明，新西蘭家兔在涂抹茶樹油抗菌液第4d皮膚出現(xiàn)紅斑、在14d觀察期內(nèi)未見水腫等異常反應(yīng)，刺激指數(shù)為0.71。說明茶樹油抗菌液對(duì)新西蘭家兔皮膚刺激屬輕度刺激性。

[1]趙美麗．國內(nèi)外化學(xué)消毒劑應(yīng)用的研究進(jìn)展[J]．社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志，2011，9（9）：8-12．

[2] 鐘昌勇，陳海燕．茶樹油的應(yīng)用及市場前景[J]．林產(chǎn)化工通訊，2003，37（5）：31-35．

[3]國家衛(wèi)生部．GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)[S]．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2002．

[4]國家衛(wèi)生部．消毒技術(shù)規(guī)范[S]．北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2002．

[5]周南，宋丹丹，周建業(yè)．茶樹油在皮膚領(lǐng)域的研究及進(jìn)展[J]．江西中藥材，2008，39（10）：74-77．

責(zé)任編輯/羅美娟

Preparation ofTea Tree Oil Antibacterial Liquid

Wen Guangke
(Guangdong Fuyang Biological TechnologyCo.,Ltd.,Heyuan,Guangdong 517583,China)

Tea tree oil was used as the rawmaterial to prepare antibacterial liquid,and its bactericidal test and skin irritation test were studied.The test results showed that tea tree oil antibacterial liquid had good killing and inhibiting effect on Staphylococcus aureus,Escherichia coli,Pseudomonas aeruginosa,Candida albicansand other pathogenic bacteria and fungi,and onlya slight stimulation tothe skin.

tea tree oil;antibacterial liquid;bactericidal test

R285

A

1003-4382（2017）06-0040-04

2017-03-21

2017-05-20

文光科（1985—），男，海南東方人，助工，從事日用化工用品研發(fā)工作。