賀海燕，張 淼，李 晶，梁沛芬，肖紅燕，王 婧，牛牧文，李 靜，王 平，樸文花,2

·論 著·

TRIM29、SKP2、MLH1在早期胃癌及癌前病變表達意義的臨床研究

賀海燕1，張 淼1，李 晶1，梁沛芬1，肖紅燕1，王 婧1，牛牧文1，李 靜1，王 平1，樸文花1,2

目的探討胃鏡活檢標本中早期胃癌與高級別上皮內(nèi)瘤變及胃炎TRIM29、SKP2、MLH1抗體表達的差異性，尋找早期胃癌與高級別上皮內(nèi)瘤變的診斷鑒別方法。方法使用免疫組織化學(xué)方法對46例胃炎標本、44例低級別上皮內(nèi)瘤變組和42例高級別上皮內(nèi)瘤變胃鏡活檢標本進行染色觀察，采用統(tǒng)計學(xué)分析，比較其表達的差異性。結(jié)果40例胃炎組中TRIM29無表達，SKP2弱表達，MLH1有3例表達。44例低級別上皮內(nèi)瘤變組中MLH1全部表達，TRIM29有18例表達，SKP2全部表達。42例早期高級別上皮內(nèi)瘤變中TRIM29全部表達，SKP2有28例表達，MLH1全部表達。三種抗體在3組間的表達比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且表達程度與胃癌惡性進程有明顯相關(guān)性。結(jié)論TRIM29、SKP2、MLHI三種抗體可以作為胃鏡活檢標本中胃炎與上皮內(nèi)瘤變及早期胃癌診斷的可靠標記物。

TRIM29；SKP2；MLH1；早期胃癌

隨著現(xiàn)代內(nèi)鏡技術(shù)的進步，早期胃癌的病理診斷尤為重要。但早期胃癌的病理診斷卻比較困難，目前病理醫(yī)師僅依靠組織形態(tài)對胃癌及癌前病變進行診斷，個人主觀性很大，易產(chǎn)生過診斷和漏診斷情況，給患者及臨床帶來極大風險。篩選幾種抗體，用客觀指標對可疑病例進行分子、蛋白水平檢測，使病理醫(yī)師對不同病變的判讀獲得可靠的參考依據(jù)是我們研究的重點。本研究旨在了解TRIM29、SKP2和MLH1三種因子在胃炎、早期胃癌和胃高級別上皮內(nèi)瘤變中的表達特點和差異性。

1 材料與方法

1.1 材料：選取本院2015年1月-2016年3月門診及住院胃鏡活檢患者132例作為研究對象，所有病歷臨床資料完整。所有病歷資料，均由兩名高年資醫(yī)師按照WHO2016年診斷標準重新復(fù)核。按病理診斷分為胃炎組46例，低級別上皮內(nèi)瘤變組44例，高級別上皮內(nèi)瘤變組42例。

1.2 方法：HE及免疫組化染色方法：對所有病理標本均用10%中性甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，4 nm連續(xù)切片，切片后行HE染色。染色采用SP法，一抗、二抗及生物素卵白素及DNB顯色液均購自北京中杉山生物試劑有限公司，即用型。使用DaKO Autostainer link 48型免疫組織化學(xué)自動染色機染色，嚴格按標準程序操作，用試劑盒提供的陽性切片進行對照，用PBS代替一抗做陰性對照，DAB顯色。

1.3 HE診斷標準

1.3.1 胃炎：腺體呈管狀，大小形態(tài)較均勻一致，細胞核圓形、淡染，染色質(zhì)顆粒細，無核仁，核膜不明顯，無核分裂像。

1.3.2 癌前病變：腺體呈管狀，大小形態(tài)較不均勻，細胞核圓形、深染，染色質(zhì)顆粒粗，無核仁或有小核仁，核膜不明顯，無或可見分裂像。

1.3.3 早期胃癌：腺體呈管狀，大小形態(tài)不一致，細胞層次增多，核圓形、卵圓形、深染，染色質(zhì)顆粒粗，可見核仁，核膜明顯，可見分裂像，累及黏膜全層。

1.4 免疫組化結(jié)果判斷：切片背景清晰，腫瘤細胞根據(jù)抗體在胞漿、胞核和胞膜上特異性著色，呈棕黃色或棕褐色顆粒為陽性。設(shè)陽性及陰性對照。染色部位：TRIM2細胞漿陽性，SKP2細胞核陽性，MLH1細胞核陽性。染色強度：<5%為弱陽性，25%～50%為中等陽性，>50為強陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法：應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件，計數(shù)資料組間比較用χ2檢驗，不同因子與胃癌惡變程度相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MLH1、TRIM29、SKP2在早期胃癌和癌前病變標本中的表達: 46例慢性淺表性胃炎組中6例TRIM29 陽性，40例陰性；26例SKP2弱陽性，2例中等陽性，18例陰性；MLH1中3例陽性，43例陰性。44例低級別上皮內(nèi)瘤變組中，44例MLH1強陽性，0例陰性；12例TRIM29弱陽性，6例中等陽性，26例陰性；4例SKP2強陽性，28例中等陽性，12例弱陽性。42例高級別上皮內(nèi)瘤變組中，40例MLH1強陽性，2例弱陽性，0例陰性；8例TRIM29強陽性，26例中等陽性，6例弱陽性，2例陰性；4例SKP2強陽性，34例中等陽性，4例弱陽性，0例陰性，見表1。

本研究結(jié)果顯示，三種因子在慢性淺表性胃炎組、低級別上皮內(nèi)瘤變組、高級別上皮內(nèi)瘤變組3組 間的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義，而且隨著病變逐漸加重，三個因子表達逐漸增強，陽性率逐漸增高。

2.2 MLH1、TRIM29、SKP2與胃病變程度的相關(guān)性分析： Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MLH1(r=-0.832，P<0.05)、TRIM29(r=-0.666，P<0.05)、SKP2(r=-0.358，P<0.05)和胃惡性變程度具有明顯的相關(guān)性。三種抗體聯(lián)合應(yīng)用，可以用于鑒別診斷胃炎與上皮內(nèi)瘤變、低級別上皮內(nèi)瘤變和高級別上皮內(nèi)瘤變、上皮內(nèi)瘤變和早期癌變。

表1 早期胃癌和癌前病變標本中MLH1、 TRIM29、SKP2的表達[n(%)]

3 討論

胃癌是我國也是我區(qū)最常見的惡性腫瘤之一，嚴重威脅著廣大患者的生命健康。目前我國發(fā)現(xiàn)的胃癌病例70%為晚期胃癌，手術(shù)后經(jīng)放療、化療及生物治療5年生存率只有30%左右，許多患者臨床及病理診斷后已發(fā)生廣泛轉(zhuǎn)移，失去了手術(shù)治療機會。因此，如何提高早期胃癌的確診率，做到早診斷、早治療成為廣大病理工作者的一項重要課題。國內(nèi)外研究資料表明，早期胃癌5年生存率可達90%以上，但早期胃癌的病理診斷仍比較困難，目前缺乏客觀的診斷依據(jù)。通常低級別上皮內(nèi)瘤變被認為是癌前病變，而高級別上皮內(nèi)瘤變被是為早期胃癌，需要內(nèi)鏡下進行治療，病理工作者的任務(wù)是能夠明確診斷早期胃癌。

SKP2是F-box蛋白家族成員，主要參與降解CKD抑制蛋白，是細胞由G1期進入S期所必需，SKP2過表達與腫瘤的增殖分化及腫瘤形成密切相關(guān)[1-2]，具有癌基因的特性。國內(nèi)外有關(guān)SKP2研究表明[3-4]，SKP2可能成為一些抑制細胞周期的抗腫瘤藥物的新靶點。本研究顯示，SKP2在慢性淺表性胃炎組和低級別上皮內(nèi)瘤變組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義，在低級別上皮內(nèi)瘤變組間和高級別上皮內(nèi)瘤變組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。說明在胃癌發(fā)生過程中，尤其是由低級別上皮內(nèi)瘤變向高級別上皮內(nèi)瘤變演變的過程中，隨著其表達的升高趨勢，參與了胃癌的發(fā)生，并且促進胃癌的發(fā)展。但本研究同時提示，在由胃炎向低級別上皮內(nèi)瘤變轉(zhuǎn)化的過程中，SKP2的作用不明顯，國內(nèi)外尚無相關(guān)研究報道[5]。結(jié)果提示SKP2可以作為早期胃癌和癌前病變鑒別診斷的有意義的標記物。

TRIM29蛋白屬于TRIM蛋白家族的成員[6]，是近年來逐漸受到關(guān)注的具有多種生物學(xué)功能的蛋白，其表達有明顯的組織和細胞特異性，推測是一種參與腫瘤的發(fā)生和分化的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，多種腫瘤細胞表達明顯增高[7]。在肺癌和胰腺癌中均有高表達的研究報道，與腫瘤的加速生長和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[8]。國內(nèi)劉春曉[6]研究了TRIM2在肺非小細胞肺癌與癌旁組織中的表達情況，發(fā)現(xiàn)TRIM29表達明顯高于癌旁組織，國內(nèi)尚無TRIM29用于早期胃癌的相關(guān)研究。本研究顯示，TRIM29在慢性淺表性胃炎組和低級別上皮內(nèi)瘤變組間、低級別上皮內(nèi)瘤變組間和高級別上皮內(nèi)瘤變組間均存在明顯統(tǒng)計學(xué)差異，說明TRIM29參與了胃癌發(fā)生的全過程。結(jié)果提示TRIM29可以作為胃炎與癌前病變、癌前病變與早期胃癌鑒別診斷的有意義的抗體。在今后的工作中，將進一步驗證該抗體的作用及臨床意義。

MLH1是人類錯配修復(fù)基因家族中的一個重要基因，在保持遺傳信息的完整性，避免遺傳突變的產(chǎn)生具有重要的作用[9-10]，在多種腫瘤組織中均有表達。MLH1基因定位于3p21.3，是DNA錯配修復(fù)的高密度分布區(qū)，啟動區(qū)CPG島甲基化后，引起MLH1基因的沉默，導(dǎo)致了錯配修復(fù)(MMR)的失活，進而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。MLH1基因表達于細胞核，MLH1的功能位點缺陷被認為是腫瘤發(fā)病的重要機制，成為今年來研究的熱點[11-12]。本研究顯示，MLH1在慢性淺表性胃炎組中僅3例表達，但在低級別上皮內(nèi)瘤變組和高級別上皮瘤組中全部表達。說明在MLH1正常胃黏膜中幾乎不表達，但從胃黏膜增生、更新到發(fā)生癌前病變甚至早期胃癌的過程中，卻不停地發(fā)揮錯配修復(fù)的功能[13]，在惡性病變中持續(xù)高表達，MLH1無法區(qū)分早期胃癌和癌前病變，但可以作為胃黏膜炎癥性病變和上皮內(nèi)瘤變的有意義的抗體。

本研究結(jié)果表明，三種抗體在3組 間的表達比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，且表達程度與胃惡性進程存在明顯相關(guān)性。但同時三種抗體各自又有其表達特點，可以區(qū)分胃炎及胃上皮內(nèi)瘤變，低級別上皮內(nèi)瘤變和高級別上皮內(nèi)瘤變。三種抗體聯(lián)合應(yīng)用，必將明顯提高早期胃癌及癌前病變的檢出率，對提高患者生存率和延長壽命有十分重要的意義。

[1] 曾錦榮，阮族明，莫林芳，等.MLH1基因啟動子甲基化和結(jié)腸癌關(guān)系的META分析[J].世界華人消化雜志，2013，21(36)：4204-4209.

[2] 錢妍娟，周志毅，馮一中.非小細胞肺癌中TRIM29與p53/-catenin表達及意義[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2014，3(30)：283-285.

[3] 胡光，趙文江.胃癌中Skp2和CyclinE的表達及其意義[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39(20)：5386-5387.

[4] 梁佳，付杰軍.Skp2在惡性腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中的作用[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2017，25(5)：478-482.

[5] 李云霄.SKP2與其底物CDKN1B(p27)在結(jié)直腸癌中的作用[J].實用腫瘤雜志，2016，31(5)：478-482.

[6] 田麗軍，楊鶴，范寶峰，等.非小細胞肺癌中TRIM29、caspase-8、β-catenin蛋白表達情況及臨床意義研究[J].癌癥進展，2016，14(11)：1128-1131.

[7] Davoodi A，Gholizadeh L，Rezazadeh H，et al.Effects of a self-care education program on quality of Life of patients with gastric cancer after gastrectomy[J].The Journal of Community and Supportive Oncology，2015，13(9):330-336.

[8] Chung LY，Tang SJ，Wu YC，et al.Galectin-3 augments tumor initiating property and tumorigenicity of lung cancer through interaction with β-catenin[J].Oncotarget，2015，6(7):4936-4952.

[9] 李惠，孫怡，劉春樣，等.MLH1,MSH2,MSH6和PMS2蛋白在結(jié)直腸癌中的表達及在Lynch綜合征篩查中的意義[J].臨床與實驗病理學(xué)雜志，2017，33(4)：360-364.

[10] Carlino MS，Kwan V，Miller DK，et al.New RAS-mutant pancreatic adenocarcinoma with combined BRAF and MEK inhibition for metastatic melanoma[J].Journal of Clinical Oncology，2015，33(11):52-56.

[11] 李龍，李靜，黃東蘭，等.胃癌患病風險關(guān)鍵基因篩選[J].中華腫瘤防治雜志，2014，21(2)：95-99.

[12] Kosaka Y，Inoue H，Ohmachi T，et al.Tripartite motif-containing 29 (TRIM29)is a novel marker for lymph node metastasis in gastric cancer[J].Annals of Surgical Oncology，2007，14(9):2543-2549.

[13] Jiang Tao，Tang Huamei，Lu Su，et al.Up-regulation of tripartite motif-containing 29 promotes cancer cell proliferation and predicts poor survival in colorectal cancer[J].Medical Oncology，2013，30(4):715.

Theclinical?significanceofRIM29，SKP2，MLH1inearlygastriccancerandprecancerouslesions

HEHaiyan1,ZHANGMiao1,LIJing1,LIANGPeifen1,XIAOHongyan1，WANGJing1,NIUMuwen1,LIJing1,WANGPing1,PIAOWenhua1,2.

1.DepartmentofAnatomyPathology,NingxiaPeople'sHospital,Yinchuan750002,China； 2.TheFirstAffiliatedHospitalofNorthwestUniversityforNationalities,Yinchuan750002,China

Correspondingauthor:PIAOWenhua,Email:wenhuapiao@163.com

ObjectiveTo explore the diversity of TRIM29,SKP2,MLH1 in gastroscope biopsy specimens of early gastric cancer,high-grade intraepithelial neoplasia and gastritis in order to look for the differential diagnosis methods.to the early gastric cancer and high level intraepithelial neoplasia.MethodsThe differences of the expression from Specimens in 40 cases of gastritis,44 cases of low level intraepithelial neoplasia and 42 cases of high level intraepithelial neoplasia gastroscope were performed by immunohistochemical methods.ResultsTRIM29 were no expressed,while SKP2 weak expressed,3cases had MLH1 in 40 cases with gastritis group; MLH1 were all expressed,while TRIM29 had 18 cases expression,SKP2 all expressed in 44 cases of low level intraepithelial neoplasia group; TRIM29 were all expressed in the group,SKP2 28 expressed,MLH1 all expressed in 42 cases of high level intraepithelial neoplasia.The expression level among three kinds of proteins was significantly difference,and the expression level was related with gastric malignant process.ConclusionTRIM29,SKP2,MLHI can be used as a reliable marker of early diagnosis in gastric cancer and intraepithelial neoplasia.

TRIM29;SKP2;MLH1;Earlygastriccancer

寧夏自然科學(xué)基金項目(NZ1502)

1.寧夏人民醫(yī)院病理科，寧夏 銀川 750002 2.西北民族大學(xué)第一附屬醫(yī)院，寧夏 銀川 750002

賀海燕(1963-)，男，河南籍，主任醫(yī)師，從事臨床病理診斷工作

樸文花，Email:wenhuapiao@163.com

http://kns.cnki.net/kcms/detail/64.1008.R.20170814.1453.010.html

10.13621/j.1001-5949.2017.08.0679

R735

A

2017-02-14 [責任編輯]王凱榮