沉香醇提物對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用△

王燦紅，王帥，彭德乾，劉洋洋，郭鵬，*，魏建和，*

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所海南分所(海南省南藥資源保護(hù)與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家中醫(yī)藥管理局沉香可持續(xù)利用重點(diǎn)研究室)，海南 海口 570311；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所(中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，瀕危藥材繁育國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室)，北京 100193；3.海南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，海南 ?？?571199)

·專題·

沉香醇提物對(duì)四氯化碳致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用△

王燦紅1，王帥2，彭德乾3，劉洋洋1，郭鵬1，2*，魏建和1，2*

(1.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所海南分所(海南省南藥資源保護(hù)與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，國(guó)家中醫(yī)藥管理局沉香可持續(xù)利用重點(diǎn)研究室)，海南 ?？?570311；2.中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院 藥用植物研究所(中草藥物質(zhì)基礎(chǔ)與資源利用教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，瀕危藥材繁育國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室)，北京 100193；3.海南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，海南 海口 571199)

目的：探討沉香醇提物對(duì)四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用。方法：采用CCl4腹腔注射制備小鼠急性肝損傷模型，給藥處理后計(jì)算肝臟指數(shù)；檢測(cè)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性；肝組織勻漿液中髓過氧化物酶(MPO)、一氧化氮(NO)、總抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)；肝臟進(jìn)行病理切片觀察；酶聯(lián)免疫法(ELISA)檢測(cè)血清中白介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)的表達(dá)水平。結(jié)果：與模型組相比，通體沉香醇提物能劑量依賴性顯著降低血清ALT、AST活性，降低MPO活性、NO含量，提高T-AOC能力及SOD活性；緩解肝臟組織病理?yè)p傷；減低IL-1β和升高IL-10的表達(dá)水平，且通體沉香醇提物高劑量效果最好，優(yōu)于等劑量的野生沉香和火烙沉香醇提物。結(jié)論：沉香醇提物對(duì)肝損傷有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與抗氧化應(yīng)激，抑制脂質(zhì)過氧化及抗炎作用有關(guān)。

沉香醇提物；四氯化碳；急性肝損傷；抗氧化損傷；抗炎

國(guó)產(chǎn)沉香為瑞香科(Thymelaeaceae)植物白木香Aquilariasinensis(Lour.)Gilg.含樹脂的木材，主產(chǎn)于海南、廣東、廣西、云南等地。沉香味辛、苦，性微溫，有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘的功效[1]。沉香作藥用已有千余年歷史，有“藥中黃金”之稱?，F(xiàn)代藥理研究表明，沉香具有鎮(zhèn)痛[2-3]、抗炎[4-5]、抗氧化[6-7]、鎮(zhèn)靜安神[8]等較廣泛的藥理活性，但受天然沉香藥材匱乏的影響，現(xiàn)代藥理研究還較粗淺；自2011年課題組發(fā)明的高效、穩(wěn)定的白木香“通體結(jié)香”技術(shù)在國(guó)內(nèi)外較廣泛的應(yīng)用，優(yōu)質(zhì)沉香已開始大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化供應(yīng)市場(chǎng)和臨床[9]，也促進(jìn)了沉香功效研究的深入。有研究顯示，沉香葉醇提物有肝臟保護(hù)作用[10]，但關(guān)于沉香本身防治肝損傷的研究尚未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)采用四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝損傷模型，觀察沉香醇提物的保肝作用及可能機(jī)制，為沉香進(jìn)一步研究開發(fā)及臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1藥物

通體結(jié)香技術(shù)(專利號(hào)：ZL201010104119.5)產(chǎn)沉香(簡(jiǎn)稱通體沉香)原料來自廣東化州，野生沉香和火烙法產(chǎn)沉香(簡(jiǎn)稱火烙沉香)購(gòu)自廣東省茂名市化州，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所魏建和研究員鑒定均為白木香Aquilariasinensis(Lour.)Gilg.產(chǎn)沉香。稱取通體沉香1000g粉碎后，置于圓底燒瓶容器中，按通體沉香重量：95%乙醇體積=1∶5的比例，向所述圓底燒瓶中加入5L95%乙醇，浸泡2h后，將電熱套緩緩加熱至溶液沸騰，并保持微沸1h，停止加熱，自然冷卻至室溫后過濾，過濾后的藥渣按照以上操作重復(fù)3次，最后合并濾液，減壓濃縮得浸膏，繼續(xù)蒸干4h，至無醇味得到黑褐色固體即通體沉香醇提物140g，浸出率為14%，因其易吸潮，故置-20℃密封保存?zhèn)溆?；野生沉香和火烙沉香醇提物制備方法同上，所得醇提物浸出率分別為10.5%和14%。

1.2動(dòng)物

雄性ICR小鼠70只，體重18～22g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCKX(京)2014-0001。飼養(yǎng)于中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥用植物研究所SPF級(jí)動(dòng)物房，溫度20～24℃，濕度52%～58%，白晝光照周期12h/12h，自由飲水和攝食，適應(yīng)性喂養(yǎng)3d后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.3試劑

AST、ALT 檢測(cè)試劑盒購(gòu)于中生北控生物科技股份有限公司；四氯化碳(CCl4)購(gòu)自上海國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。考馬斯亮藍(lán)蛋白定量試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)、總抗氧化能力(T-AOC)、髓過氧化物酶(MPO)、一氧化氮(NO)購(gòu)于南京建成生物科技公司，ELISA試劑盒IL-1β、IL-10購(gòu)自Bossbio公司。

1.4儀器

離心機(jī)(德國(guó)Heraeus公司，型號(hào)：Labofuge400R)；全自動(dòng)生化儀(美國(guó)Beckman Coulter公司，型號(hào)：AU480)；酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek公司，型號(hào)：MQX200)；熒光倒置顯微鏡(日本Olympus，型號(hào)：CKX41)。

2 方法

2.1模型的建立與分組給藥

70只小鼠隨機(jī)分別為正常組、模型組、野生沉香醇提物組(相當(dāng)于生藥2.84g/kg)、火烙沉香醇提物組(相當(dāng)于生藥2.84g/kg)、通體沉香醇提物低、中、高劑量組(相當(dāng)于生藥0.71，1.42，2.84g/kg)。正常組和模型組給予等體積的蒸餾水灌胃，受試藥物組灌胃給予相應(yīng)藥物，20mL/kg，連續(xù)給藥7d。末次給藥1h后，除正常組外，每只小鼠腹腔注射0.1% CCl4花生油溶液，10mL/kg，復(fù)制急性肝損傷模型。禁食不禁水，24h后稱體重，摘眼球取血，3000rpm離心15min，取血清，凍存于-20℃。脫臼處死動(dòng)物，摘取肝臟稱重，小心用剪刀剪取一塊，置于4%多聚甲醛溶液中固定，做病理組織切片觀察；剩余肝臟置于-80℃保存，用于其他指標(biāo)檢測(cè)。

2.2肝臟指數(shù)

2.3肝臟病理切片觀察

取肝臟組織，置4%多聚甲醛溶液中固定，按照常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片5μm厚度，進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，在高倍顯微鏡(×400)下觀察肝細(xì)胞脂肪變性、炎癥浸潤(rùn)、肝細(xì)胞脫落、壞死等。

2.4肝組織勻漿上清中MPO、NO、T-AOC和SOD的檢測(cè)

稱取-80℃保存的肝組織約100mg，按1∶9加入生理鹽水，冰浴、充分勻漿，制備10% 的組織勻漿液，4℃，3000rpm離心15min，吸取上清，凍存于-80℃；通過BCA蛋白定量試劑盒檢測(cè)組織上清的蛋白濃度，按照脂質(zhì)過氧化及抗氧化試劑盒操作說明檢測(cè)MPO、NO、T-AOC和SOD含量。

2.5采用ELISA方法檢測(cè)血清中IL-1β和IL-10

摘眼球采血后，3000 rpm離心15 min，吸取上清，凍存于-20 ℃。參照試劑盒說明書操作檢測(cè)IL-1β和IL-10含量。

2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

3.1對(duì)小鼠肝臟重量和肝臟指數(shù)的影響

與正常組相比，模型組小鼠的肝臟重量和肝臟指數(shù)均顯著升高(P<0.01)，說明CCl4導(dǎo)致肝臟發(fā)生明顯腫脹。與模型組相比，野生沉香醇提物和通體沉香醇提物均能不同程度顯著降低肝臟重量和肝臟指數(shù)(P<0.05)，見表1。

表1 對(duì)小鼠肝臟重量和肝臟指數(shù)的影響

注：與正常組相比，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05

3.2對(duì)血清中ALT和AST的影響

與正常組相比，模型組小鼠血清中ALT和AST水平均顯著升高(P<0.001)，表明肝臟出現(xiàn)顯著損傷，模型制備成功。與模型組相比，野生沉香醇提物、火烙沉香醇提物和通體沉香醇提物均能不同程度降低ALT和AST水平(P<0.05，P<0.01)，且通體沉香醇提物2.84g/kg效果最顯著，見表2。

3.3對(duì)肝組織病理切片形態(tài)學(xué)的影響

肝組織切片結(jié)果顯示，正常組肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，細(xì)胞排列整齊，大小均勻無壞死、變性等病理變化，未見炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)(見圖1A)。模型組肝小葉結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，細(xì)胞排列紊亂，大面積肝細(xì)胞壞死或細(xì)胞核溶解，可見大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)和壞死灶(見圖1B)。

表2 對(duì)血清中ALT和AST的影響

注：與正常組相比，***P<0.001；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01而野生沉香、火烙沉香和通體沉香醇提物組均不同程度改善肝細(xì)胞損傷，其中通體沉香醇提物2.84 g/kg 組效果最好，肝細(xì)胞壞死、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等均較顯著減輕(見圖1G)；野生沉香醇提物作用次之(見圖1C)；通體沉香醇提物1.42 g/kg組與火烙沉香醇提物組效果相當(dāng)(見圖1F和圖1D)；而通體沉香醇提物0.71 g/kg組改善肝損傷程度較輕，肝細(xì)胞仍見輕度腫脹，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，但灶性壞死顯著減少(見圖1E)。

3.4對(duì)肝臟組織勻漿中MPO、NO、T-AOC和SOD的影響

相比正常組，模型組髓過氧化物酶MPO活性和NO的含量顯著升高(P<0.01)，而總抗氧化物能力T-AOC和SOD活性則顯著降低(P<0.05)。而給予各沉香醇提物后均不同程度的降低MPO活性和NO含量(P<0.01)，升高T-AOC能力和SOD活性(P<0.05，P<0.01)，且通體沉香醇提物呈現(xiàn)劑量依賴性地降低或升高，見表3。

注：A：正常對(duì)照；B：模型對(duì)照；C：野生沉香醇提物 2.84 g/kg；D：火烙沉香醇提物 2.84 g/kg；E：通體沉香醇提物 0.71 g/kg；F：通體沉香醇提物 1.42 g/kg；G：通體沉香醇提物 2.84 g/kg圖1 對(duì)肝損傷小鼠肝組織病理形態(tài)學(xué)的影響(HE，×400)

組別劑量(g/kg)MPO(U/g)NO(μmol/g)T-AOC(U/mg)SOD(U/mg)正常對(duì)照1.08±0.432.36±0.260.64±0.19237.32±52.75模型對(duì)照4.40±0.32**4.48±0.97**0.47±0.08*193.99±27.39*野生沉香醇提物2.843.10±0.28##1.97±0.51##0.56±0.07#277.35±53.28##火烙沉香醇提物2.844.02±0.501.84±0.66##0.84±0.17##283.85±73.64##通體沉香醇提物0.713.22±0.44##1.60±0.26##0.51±0.19263.29±67.43#1.422.71±0.67##1.53±0.39##0.60±0.09#263.43±61.92#2.840.83±0.22##1.42±0.66##0.66±0.16#287.69±79.52#

注：與正常組相比，*P<0.05，**P<0.01；與模型組相比，#P<0.05，##P<0.01

3.5對(duì)血清中IL-1β和IL-10的影響

相比正常組，模型組炎性細(xì)胞因子IL-1β水平顯著升高(P<0.01)，而抗炎細(xì)胞因子IL-10則顯著降低(P<0.01)。與模型組相比，各沉香醇提物組均不同程度降低炎性細(xì)胞因子IL-1β和升高抗炎細(xì)胞因子IL-10水平(P<0.01)，且通體沉香醇提物呈現(xiàn)劑量依賴性，見表4。

表4 對(duì)血清中IL-1β和IL-10的影響

注：與正常組相比，**P<0.01；與模型組相比，##P<0.01

4 討論

肝臟是人體最大的實(shí)質(zhì)器官，也是解毒代謝的重要場(chǎng)所。當(dāng)各種化學(xué)物質(zhì)、藥物、毒物及機(jī)體代謝產(chǎn)物等超過肝臟負(fù)荷則對(duì)其造成損傷。CCl4是經(jīng)典的誘導(dǎo)肝損傷的化學(xué)物質(zhì)，其誘導(dǎo)肝損傷的機(jī)制為，CCl4產(chǎn)生的大量有毒氯自由基代謝產(chǎn)物，損傷肝細(xì)胞DNA和生物膜，引起脂質(zhì)過氧化降解；細(xì)胞內(nèi)各種酶、毒素等釋放到血液，誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)發(fā)生，促進(jìn)肝星形細(xì)胞(HSC)增殖、分化，導(dǎo)致肝纖維化；嚴(yán)重則激活細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白，最終誘發(fā)肝細(xì)胞凋亡、壞死[11]。

CCl4在肝細(xì)胞內(nèi)經(jīng)肝細(xì)胞色素P450代謝酶激活，生成大量氯自由基攻擊肝細(xì)胞膜引發(fā)脂質(zhì)過氧化，引起肝細(xì)胞膜通透性增高，使正常情況下主要分布于肝細(xì)胞漿和線粒體的ALT、AST大量釋放入血，使血清中酶的活性顯著增高，檢測(cè)血清中ALT、AST升高情況能反應(yīng)肝細(xì)胞壞死的程度[12]；病理?yè)p傷可見肝臟腫脹、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、肝細(xì)胞空泡變性和灶性壞死等[13]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，通體沉香醇提物呈劑量依賴性地降低肝損傷小鼠血清中AST、ALT的水平，減低肝臟重量和肝臟指數(shù)，并能顯著減輕肝組織的病理?yè)p傷程度，提示通體沉香醇提物能夠有效改善急性肝損傷小鼠的肝功能，對(duì)肝臟損傷起保護(hù)作用。

目前公認(rèn)的CCl4肝損傷的作用機(jī)制主要是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)。CCl4作用機(jī)體后，可產(chǎn)生大量過氧化自由基，在MPO等的催化反應(yīng)下形成大量脂質(zhì)過氧化物MPO、NO、MDA、ROS等，它們可嚴(yán)重破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、壞死[14-15]。正常情況下，機(jī)體的抗氧化防御系統(tǒng)可清除自由基，修復(fù)損傷及誘導(dǎo)總抗氧化能力T-AOC、抗氧化酶SOD、GSH-Px等的分泌。當(dāng)化學(xué)藥物誘導(dǎo)肝損傷后，會(huì)導(dǎo)致抗氧化能力降低，同時(shí)促進(jìn)過氧化物的產(chǎn)生[16]。當(dāng)體內(nèi)毒素激活巨噬細(xì)胞、多形核白細(xì)胞等，能誘發(fā)誘導(dǎo)型NOS合成大量NO，對(duì)鄰近組織產(chǎn)生毒性，也參與炎癥反應(yīng)；同時(shí)NO也是參與氧化應(yīng)激損傷的主要自由基之一，其含量增加可抑制多種與線粒體有關(guān)的酶，導(dǎo)致自由基產(chǎn)生增多，加重氧化應(yīng)激反應(yīng)[17]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，通體沉香醇提物呈劑量依賴性顯著降低肝損傷小鼠肝組織勻漿MPO活性和NO含量，升高總抗氧化能力T-AOC和抗氧化物酶SOD活性，這提示通體沉香醇提物可能是通過減少自由基的生成，抑制脂質(zhì)過氧化損傷，進(jìn)而達(dá)到保護(hù)肝細(xì)胞的作用。

有研究報(bào)道，CCl4可誘導(dǎo)肝組織枯否細(xì)胞(Kuffer cells)分泌炎性細(xì)胞因子，如IL-1β、IL-6、TNF-α等引起炎癥反應(yīng)發(fā)生，導(dǎo)致肝損傷[18]。白介素是重要的炎癥介質(zhì)和免疫調(diào)節(jié)因子家族，可誘導(dǎo)核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的激活、表達(dá)，啟動(dòng)炎癥介質(zhì)、粘附分子等的轉(zhuǎn)錄引發(fā)炎癥，同時(shí)又促使IL-1β、IL-6及TNF-α等的大量生成，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的加重[19]。白介素10(IL-10)是一種多細(xì)胞源、多功能的細(xì)胞因子，可調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化，參與機(jī)體炎性調(diào)節(jié)和免疫反應(yīng)，是目前公認(rèn)的抗炎與免疫抑制因子[20]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，通體沉香醇提物呈劑量依賴地降低肝損傷所致的炎性細(xì)胞因子IL-1β的分泌，升高抗炎細(xì)胞因子IL-10的水平。這提示通體沉香醇提物保肝的機(jī)制可能是通過抑制炎癥細(xì)胞因子的分泌，阻斷炎癥反應(yīng)的發(fā)生來實(shí)現(xiàn)。

綜上所述，通體沉香醇提物呈劑量依賴性地降低CCl4所致肝損傷模型小鼠血清中轉(zhuǎn)氨酶ALT和AST的活性，降低髓過氧化物酶MPO和NO含量，升高抗氧化物能力T-AOC和抗氧化物酶SOD的活性，降低炎性細(xì)胞因子IL-1β水平，升高抗炎細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)，改善肝組織的病理?yè)p傷程度，發(fā)揮肝臟保護(hù)作用，且通體沉香醇提物高劑量效果最好，優(yōu)于等劑量的野生沉香和火烙沉香醇提物，可能的保肝機(jī)制是抗氧化應(yīng)激及抗炎作用，還可能涉及線粒體損傷和細(xì)胞凋亡等信號(hào)通路，但具體作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究證實(shí)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015，172-173.

[2] 李紅念，梅全喜，林煥澤，等.沉香葉與沉香藥材鎮(zhèn)痛作用的對(duì)比研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23(8)：1958-1959.

[3] Zhou M H，Wang H G，Suolangjiba，et al.Antinociceptive and anti-inflammatory activities of Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg.leaves extract[J].J Ethnopharmacol，2008，117(2)：345-350.

[4] Zhu Z，Gu Y，Zhao Y，et al.GYF-17，a chloride substituted 2-(2-phenethyl)-chromone，suppresses LPS-induced inflammatory mediator production in RAW264.7 cells by inhibiting STAT1/3 and ERK1/2 signaling pathways[J].Inter Immunopharmacol，2016，35(35)：185-192.

[5] Kumphune S，Prompunt E，Phaebuaw K，et al.Anti-inflammatory effects of the ethyl acetate extract of Aquilaria crassna inhibits LPS-induced tumor necrosis factor-alpha production by attenuating P38 MAPK activation[J].Inter J Gre Pharmacy，2011，5(1)：291-296.

[6] 陳地靈，吳祎，林勵(lì)，等.沉香茶提取物的體外抗氧化和體內(nèi)降血脂作用評(píng)價(jià)[J].現(xiàn)代食品科技，2013，29(6)：1198-1201.

[7] 段宙位，李維國(guó)，竇志浩，等.沉香葉黃酮類化合物的提取及其抗氧化活性[J].食品科學(xué)，2015，36(6)：45-50.

[8] Takemoto H，Ito M，Shiraki T，et al.Sedative effects of vapor inhalation of agarwood oil and spikenard extract and identification of their active components[J].J Nat Med，2008，62(1)：41-46.

[9] Liu Y，Chen H，Yang Y，et al.Whole-tree agarwood-inducing technique：an efficient novel technique for producing high-quality agarwood in cultivated Aquilaria sinensis trees[J].Molecules，2013，18(3)：3086-3106.

[10]Alam J，Mujahid M，Badruddeen，et al.Hepatoprotective potential of ethanolic extract of Aquilaria agallocha leaves against paracetamol induced hepatotoxicity in SD rats[J].J Trad & Comple Med，2017，7(1)：9-13.

[11]王穎芳，王宇亮.中藥治療肝損傷作用機(jī)理的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展[J].中醫(yī)學(xué)報(bào)，2003，18(1)：33-34.

[12]Hwang Y P，Choi J H，Jeong H G.Protective effect of the Aralia continental root extract against carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in mice[J].Food Chem Toxicol，2009，47(1)：75-81.

[13]Klamt F，Dal PizzolF，Conte DF MJ，et al.Imbalance of antioxidant defensein mice lacking cellular prion protein.Free Radic Biol Med，2001，30(10)：1137-1144.

[14]Deng X，Wu K，Wan J，et al.Aminotriazole attenuated carbon tetrachloride-induced oxidative liver injury in mice.Food Chem Toxicol，2012，50(9)：3073-3078.

[15]Abdullah，Khan M A，Ahmad W，et al.Hepatoprotective effect of the solvent extracts of Viola canescens Wall.ex.Roxb.against CCl4induced toxicity through antioxidant and membrane stabilizing activity[J].Bmc Complementary & Alternative Med，2017，17(1)：10.

[16]Michiels C，Raes M，Toussaint O，et al.Importance of SE-glutathione peroxidade，catalaseand Cu/Zn-SOD for cell survival against oxidative stress.Free Radic Biol Med，1994，7(3)：235-248.

[17]Zhu W，F(xiàn)ung P C.The roles played by crucial free radicals like lipid free radicals，nitric oxide，and enzymes NOS and NADPH in CCl4-induced acute liver injury of mice[J].Free Radic Biol Med，2000，29(9)：870-880.

[18]黃振青，韋燕飛，劉雪梅，等.穗花杉雙黃酮對(duì)急性肝損傷大鼠炎癥相關(guān)因子的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20(11)：147-150.

[19]Chen Q，Qi Z，Li Y，et al.Schisandra Lignan Extract Protects against Carbon Tetrachloride-Induced Liver Injury in Mice by Inhibiting Oxidative Stress and Regulating the NF-κB and JNK Signaling Pathways[J].Evidence-based complement and alter med：eCAM，2017，2017：5140297.

[20]Turovsky E A，Turovskaya M V，Gaidin S G，et al.Cytokine IL-10，activators of PI3-kinase，agonists of α-2 adrenoreceptor and antioxidants prevent ischemia-induced cell death in rat hippocampal cultures[J].Arch Biochem & Biophy，2017，615：35-43.

ProtectiveEffectsofAlcoholExtractofAgarwoodonAcuteLiverInjuryInducedbyCarbonTetrachlorideinMice

WANG Canhong1，WANG Shuai2，PENG Deqian3，LIU Yangyang1，GUO Peng1，2*，WEI Jianhe1，2*

(1.Hainan Provincial Key Laboratory of Resources Conservation and Development of Southern Medicine & Key Laboratory of State Administration of Traditional Chinese Medicine for Agarwood Sustainable Utilization，Hainan Branch Institute of Medicinal Plant，Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College，Haikou 570311，China；2.Key Laboratory of Bioactive Substances and Resources Utilization of Chinese Herbal Medicine，Ministry of Education & National Engineering Laboratory for Breeding of Endangered Medicinal Materials，Institute of Medicinal Plant Development，Chinese Academy of Medical Science & Peking Union Medical College，Beijing 100193，China；3.School of Pharmacy，Hainan Medical College，Haikou，Hainan 571199)

Objective：This study is aimed to investigate the hepatoprotective effect of alcohol extract of agarwood on acute liver injury induced by carbon tetrachloride (CCl4) in mice.Methods：Mice were injected with CCl4to establish acute liver injury model.Alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST) were measured of serum.The myeloperoxidase (MPO)，nitric oxide (NO)，total peroxide (T-AOC) and superoxide dismutase (SOD) of the liver tissue homogenate were measured，and observed degree of liver injury by pathological sections.The interleukin-1β (IL-1β) and Interleukin-10 (IL-10) expression levels were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA).Results：Compared with the model group，the alcohol extract of Agar-Wit agarwood groups significantly decreased the activities of serum ALT，AST，MPO and NO contents as well as the expression level of IL-1β，enhanced the capacity of T-AOC，the activity of SOD and IL-10 level，and improved pathological injury of liver tissue，especially the alcohol extract of Agar-Wit agarwood 2.84 g/kg group.Conclusion：Alcohol extracts of agarwood show a significantly protective effect on acute liver injury in mice，and its mechanism may be related to anti-oxidative stress，inhibition of lipid peroxidation and anti-inflammatory effect.

Alcohol extracts of agarwood；Carbon tetrachloride；Acute liver injury；Anti-oxidant；Anti-inflammatory

海南省重大科技計(jì)劃項(xiàng)目(ZDKJ2016004)；海南省自然科學(xué)基金(817290)；國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81673545)；中組部“萬人計(jì)劃”(99950534)

] 郭鵬，副研究員，碩士生導(dǎo)師，研究方向：心血管藥理學(xué)研究，Tel：010-57833235，E-mail：pguo@implad.ac.cn.；魏建和，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥用植物基因資源、分子育種及次生代謝產(chǎn)物調(diào)控研究，Tel：010-57833016，E-mail：wjianh@263.net

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.8.008

2017-05-30)

*[