楊秀青，谷江華，石征蓉，袁強(qiáng)華，宋英#，何成詩

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，成都610075；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，成都 610072）

銀菊解毒口服液的水提工藝研究

楊秀青1＊，谷江華1，石征蓉1，袁強(qiáng)華2，宋英2#，何成詩2

（1.成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，成都610075；2.成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科，成都 610072）

目的：對(duì)銀菊解毒口服液水提工藝進(jìn)行優(yōu)化，為該制劑的工業(yè)化生產(chǎn)提供參考。方法：通過對(duì)銀菊解毒方中的綠原酸提取時(shí)間-提取率曲線及川銀花與方中其他藥味配伍合煎后綠原酸的提取率進(jìn)行考察，確定川銀花的煎煮方式及時(shí)間；以蒙花苷、哈巴俄苷、（R，S）-告依春、補(bǔ)骨脂素+異補(bǔ)骨脂素含量及干膏率的綜合評(píng)分為指標(biāo)，以加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為考察因素設(shè)計(jì)L9（34）正交試驗(yàn)，優(yōu)化川銀花藥渣與其余藥味的提取工藝并進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)。結(jié)果：最優(yōu)水提工藝為川銀花加8倍量水先煎30 min，留存藥液；藥渣與其余藥味加8倍量水煎煮3次，每次1 h；所有藥液合并。驗(yàn)證試驗(yàn)中綠原酸、蒙花苷、哈巴俄苷、（R，S）-告依春、補(bǔ)骨脂素+異補(bǔ)骨脂素含量平均值依次為34.51、10.31、1.97、0.21、9.79 mg/g（RSD分別為1.24%、1.19%、1.40%、1.71%、1.28%，n＝3），干膏率平均值為25.4%（RSD＝1.64%，n＝3），綠原酸平均提取率為78.95%（RSD＝1.24%，n＝3）。結(jié)論：優(yōu)化的水提工藝中綠原酸的提取率及其他藥效成分的含量均較高，且工藝穩(wěn)定、可行。

銀菊解毒口服液；綠原酸；提取時(shí)間；提取率；配伍合煎；正交試驗(yàn)；水提工藝

ABSTRACTOBJECTIVE：To optimize the water extraction technology of Yinju jiedu oral liquid，and provide reference for the industrial production of the preparation.METHODS：According to the investigation of extraction time-extraction rate curves of chlorohenic acid of Yinju jiedu formula and extraction rate of chlorohenic acid in Lonicera japonica and other combined medicinal materials in the formula，decoction methods and time of L.japonica were determined.Using the comprehensive scores of linarin，harpagoside，（R，S）-epigoitrin，psoralen+angelicin contents and dry extraction yield as indexes，L9（34）orthogonal test was designed to detect the effects of adding water amount，decoction time times and optimize the extraction technology of the residues and other medicinal materials.Verification test was conducted.RESULTS：The optimal technology was L.japonica decocted first for 30 min with 8-fold water；the residues and other medicinal materials were decocted with 8-fold water for 3 times，1 h each time；combining all the syrups.In verification test，the average contents of chlorohenic acid，linarin，harpagoside，（R，S）-epigoitrin，psoralen+angelicin were respectively 34.51，10.31，1.97，0.21，9.79 mg/g（RSD＝1.24%，1.19%，1.40%，1.71%，1.28%，n＝3）；average dry extraction yield was 25.4%（RSD＝1.64%，n＝3）；average extraction rate of chlorohenic acid was 78.95%（RSD＝1.24%，n＝3）.CONCLUSIONS：In the optimized water extraction technology，both the extraction rate of chlorohenic acid and contents of other ingredients are relatively high.The technology is stable and feasible.

KEYWORDSYinju jiedu oral liquid；Chlorogenic acid；Extraction time；Extraction rate；Compatibility decoction；Orthogonal test；Water extraction technology

銀菊解毒口服液為在研中藥新制劑，源自成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院治療牙齦炎、牙周炎應(yīng)用了二十余年的臨床經(jīng)驗(yàn)方。全方由川銀花、野菊花等5種藥味組成。方中川銀花具有清熱解毒、疏散風(fēng)熱作用，為方中君藥；野菊花與板藍(lán)根協(xié)助川銀花加強(qiáng)清熱解毒作用，為臣藥；玄參具有養(yǎng)陰清熱作用，為佐藥；補(bǔ)骨脂具有補(bǔ)腎固齒、引藥入腎作用，為使藥；諸藥合用，共奏清熱泄火、養(yǎng)陰補(bǔ)腎之效[1]。為便于本方在臨床使用，基于本方藥效成分在水溶液中具有較好的穩(wěn)定性的特點(diǎn)，擬將本方開發(fā)成口服液體制劑。

相關(guān)文獻(xiàn)研究表明，含綠原酸的藥味在單煎及合煎時(shí)，綠原酸提取率均達(dá)到80%以上[2-3]。本課題組在前期試驗(yàn)中，將川銀花與其他藥味合煎，結(jié)果測(cè)得合煎液中綠原酸提取率不到60%，這與綠原酸的強(qiáng)水溶性特性不符[4]。為了充分利用處方中各藥材的有效成分進(jìn)而更好地發(fā)揮該方的藥效，本試驗(yàn)首先對(duì)綠原酸在本方中的煎出情況進(jìn)行考察，進(jìn)而確定將川銀花先煎，再以野菊花藥效成分蒙花苷、玄參藥效成分哈巴俄苷、板藍(lán)根藥效成分（R，S）-告依春、補(bǔ)骨脂藥效成分補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的含量和干膏率為指標(biāo)，通過正交試驗(yàn)優(yōu)化川銀花藥渣與其余藥味合煎的提取工藝，進(jìn)而確定銀菊解毒口服液的水提工藝，為其后續(xù)的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

1260高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；BP211D電子分析天平（德國(guó)Satorius公司，精度：十萬分之一）。

1.2 藥材、對(duì)照品與試劑

川銀花、野菊花、玄參、板藍(lán)根、補(bǔ)骨脂[購自四川省新荷花中藥飲片有限公司，批號(hào)分別為：1411028、1410028、1409036、1404087、1407119，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥劑科副主任藥師盛蓉鑒定，均符合2015年版《中國(guó)藥典》（一部）及相關(guān)地方標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定]；綠原酸、蒙花苷、（R，S）-告依春、哈巴俄苷、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)分別為：110753-201314、111528-201308、111753-201304、111730-201307、110739-201115、110738-201313，純度分別為：96.6%、95.1%、99.9%、97.1%、99.3%、100.0%）；甲醇、乙腈為色譜純，水為自制超純水，甲醇、磷酸等其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Inert Sustain C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；乙腈為流動(dòng)相A，0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相B，梯度洗脫（0～18 min，95%B；18～24 min，90%B；24～42 min，78%B；42～57 min，76%B；57～63 min，70%B；63～70 min，45%B）；檢測(cè)波長(zhǎng)分別為240 nm[0～20 min，檢測(cè)（R，S）-告依春]、327 nm（20～43 min，檢測(cè)綠原酸）、334 nm（43～51 min，檢測(cè)蒙花苷）、280 nm（51～67 min，檢測(cè)哈巴俄苷、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素）；柱溫為30℃；流速為1.0 mL/min；進(jìn)樣量為5 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品7.66 mg 、蒙花苷對(duì)照品2.56 mg、（R，S）-告依春對(duì)照品4.10 mg、哈巴俄苷對(duì)照品2.00 mg、補(bǔ)骨脂素對(duì)照品2.00 mg、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品2.10 mg，分別置于10 mL量瓶中，用50%甲醇溶解定容至刻度，搖勻；再分別精密吸取6種對(duì)照品溶液各1 mL置于同一10 mL量瓶，用50%甲醇定容至刻度，搖勻，作為初始的混合對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備 按處方比例稱取藥味（共90 g），其中川銀花加160 mL水煎煮2次，每次45 min，藥液留存；藥渣與其余藥味加560 mL水煎煮2次，每次45 min；所有藥液合并，減壓濃縮至1 000 mL。精密吸取濃縮液2 mL，置于25 mL量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，即得。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液的制備方法分別制備缺川銀花陰性對(duì)照濃縮液、缺野菊花陰性對(duì)照濃縮液、缺川銀花和野菊花陰性對(duì)照濃縮液、缺玄參陰性對(duì)照濃縮液、缺板藍(lán)根陰性對(duì)照濃縮液、缺補(bǔ)骨脂陰性對(duì)照濃縮液。精密吸取上述濃縮液各2 mL，置于25 mL量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專屬性試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液、供試品溶液、溶劑（50%甲醇）及各陰性對(duì)照溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過后進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。結(jié)果，6種活性成分與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，且各組分互不干擾，理論板數(shù)均符合要求；缺川銀花和野菊花陰性對(duì)照溶液、缺玄參陰性對(duì)照溶液、缺板藍(lán)根陰性對(duì)照溶液、缺補(bǔ)骨脂陰性對(duì)照溶液在相應(yīng)位置上未見相應(yīng)色譜峰。這表明采用本方法，蒙花苷、（R，S）-告依春、哈巴俄苷、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素專屬性良好。色譜圖見圖1。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取“2.2.1”項(xiàng)下初始的混合對(duì)照品溶液為原液，用甲醇定量稀釋成含綠原酸7.18、14.36、28.73、57.45、114.9、229.8 μg/mL，含蒙花苷 2.4、4.8、9.6、19.2、38.4、76.8 μg/mL，含哈巴俄苷 1.88、3.75、7.5、15、30、60 μg/mL，含（R，S）-告依春3.84、7.69、15.37、30.75、61.5、123 μg/mL，含補(bǔ)骨脂素1.88、3.75、7.5、15、30、60 μg/mL，異補(bǔ)骨脂素1.97、3.94、7.88、15.75、31.5、63 μg/mL的系列混合對(duì)照品溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過。精密吸取續(xù)濾液5 μL，注入色譜儀，以峰面積為縱坐標(biāo)（y）、對(duì)照品質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)線性回歸，得各成分標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為：y＝9.092 6x－12.53（r＝0.999 9）、y＝5.167 3x－1.037 7（r＝0.999 8）、y＝2.012 9x+10.044（r＝0.999 8），y＝19.533x－13.672（r＝0.999 9）、y＝18.289x+2.897 1（r＝0.999 9）、y＝18.796x－8.128（r＝0.999 9）。檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為 7.18～229.8、2.4～76.8、1.88～60、3.84～123、1.88～60、1.97～63 μg/mL，檢測(cè)限分別為7.18、2.4、1.88、3.84、1.88、1.97 μg/mL。

2.3.3 精密度試驗(yàn) 精密吸取“2.2.1”項(xiàng)下各對(duì)照品原液連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，測(cè)定每次進(jìn)樣的峰面積。結(jié)果，綠原酸、蒙花苷、哈巴俄苷、（R，S）-告依春、補(bǔ)骨脂素、異補(bǔ)骨脂素峰面積的RSD分別為0.45%、1.9%、0.64%、0.75%、1.14%、1.27%（n＝6），表明該方法精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備6份供試品溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過后注入色譜儀，測(cè)定峰面積，計(jì)算含量及RSD。結(jié)果，綠原酸、蒙花苷、哈巴俄苷、（R，S）-告依春、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素含量的RSD分別為0.75%、0.89%、1.46%、0.87%、1.09%、0.71%（n＝6），表明該方法重復(fù)性良好。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

2.3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液，于室溫放置0、3、6、12、18、24 h，用0.45 μm微孔濾膜濾過后進(jìn)樣分析，考察溶液穩(wěn)定性。結(jié)果，綠原酸、蒙花苷、哈巴俄苷、（R，S）-告依春、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素24 h內(nèi)峰面積RSD分別為1.06%、0.65%、0.23%、1.14%、0.46%、1.27%（n＝6），表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.3.6 加樣回收試驗(yàn) 精密稱取已知含量的供試品藥液6份，置于100 mL量瓶中，分別加入綠原酸（0.076 6 mg/mL）、蒙花苷（0.025 6 mg/mL）、哈巴俄苷（0.02 mg/mL）、（R，S）-告依春（0.041 mg/mL）、補(bǔ)骨脂素（0.02 mg/mL）、異補(bǔ)骨脂素（0.021 mg/mL）的對(duì)照品溶液各5 mL，加50%甲醇定容至刻度，搖勻，用0.45 μm微孔濾膜濾過。精密吸取續(xù)濾液5 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果，綠原酸、蒙花苷、哈巴俄苷、（R，S）-告依春、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素的平均加樣回收率分別為100.81%、98.06%、99.45%、98.55%、99.13%、99.34%，RSD分別為1.73%、1.6%、1.38%、0.93%、1.11%、2.03%（n＝6）。

2.4 綠原酸的提取時(shí)間-提取率曲線考察

2.4.1 復(fù)方中綠原酸的提取時(shí)間-提取率曲線考察 按處方比例稱取藥味（川銀花、野菊花各40 g，共180 g），加8倍量水（1 440 mL），浸泡透心，回流提?。倳r(shí)長(zhǎng)120 min）。沸騰后開始取樣，間隔時(shí)間為10 min，每次10 mL，同時(shí)加同溫介質(zhì)10 mL。取出藥液過濾，放冷，分別精密取樣2 mL置于25 mL量瓶中，用50%甲醇定容至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過。取續(xù)濾液作為供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定綠原酸含量，并繪制提取時(shí)間（min）-提取率（%）曲線[提取率＝藥液中綠原酸的含量（mg/g）/川銀花、野菊花藥材中綠原酸的總含量（mg/g）×100%]，詳見圖2。

圖2 川銀花單煎與復(fù)方中的綠原酸提取率比較Fig 2 Comparison of the extraction rate of chlorogenic acid in L.japonica alone and mixed formula

2.4.2 川銀花中綠原酸的提取時(shí)間-提取率曲線考察 稱取川銀花40 g，加8倍量水（320 mL），其他同“2.4.1”項(xiàng)下復(fù)方中綠原酸的提取時(shí)間-提取率曲線考察方法，繪制單煎提取時(shí)間（min）-提取率（%）曲線，詳見圖2。

2.4.3 測(cè)定結(jié)果 由圖2可知，在沸騰后的20 min內(nèi)，復(fù)方溶液和單煎溶液中的綠原酸提取率均隨煎煮時(shí)間呈上升趨勢(shì)，而在20～30 min時(shí)趨于穩(wěn)定；此后，隨著煎煮時(shí)間的延長(zhǎng)，提取率呈下降趨勢(shì)，與文獻(xiàn)報(bào)道[5-6]一致。各時(shí)間點(diǎn)復(fù)方溶液中綠原酸提取率較單煎溶液提取率均低30%左右。由此確定川銀花不宜與方中藥味共煎，且其煎煮時(shí)長(zhǎng)以30 min為宜。

2.5 方中綠原酸相關(guān)藥材與其他藥材配伍合煎考察

2.5.1 川銀花與其他藥材配伍合煎考察 配伍合煎方案設(shè)計(jì)見表1。

方案A，稱取2倍處方量的藥味，加720 mL的水煎煮3次（120 mL×3），第1次煎煮30 min，第2次、第3次煎煮45 min，濾液分裝，放冷；精密吸取第1次的水煎液2 mL、第2次和第3次的水煎液各5 mL，分別置于同一25 mL量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，搖勻。經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定計(jì)算各組合中綠原酸提取率，繪制綠原酸提取率柱狀圖，詳見圖3。

表1 配伍合煎方案設(shè)計(jì)Tab 1 Design of compatibility decoction

圖3 綠原酸相關(guān)藥材與其他藥材配伍合煎后提取率柱狀圖Fig 3 Histogram of the extraction rate of chlorogenic acid-related medicinal materials and other medicinal materials after compatibility decoction

2.5.2 川銀花、野菊花與其他藥材配伍合煎考察 按表1方案B稱取藥味，其他操作同“2.5.1”項(xiàng)，柱狀圖見圖3。2.5.3 測(cè)定結(jié)果 由圖3可知，川銀花與方中其他藥味配伍合煎后，每味藥對(duì)綠原酸的提取率均有一定程度的影響。川銀花、野菊花與其他藥物組合中綠原酸提取率大多低于川銀花與其他藥味組合，其中含補(bǔ)骨脂的藥味組合受到的影響最為明顯?；诒敬卧囼?yàn)結(jié)果，為保證綠原酸的提取率，川銀花應(yīng)單獨(dú)先煎，煎液留存，藥渣再與其他藥味進(jìn)行合煎。

2.6 干膏率的測(cè)定

精密吸取各樣品溶液50 mL，置于已干燥至恒質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，于105℃干燥3 h，取出；置于干燥器中冷卻30 min，迅速稱量，即為干膏質(zhì)量。計(jì)算干膏率，干膏率（%）＝干膏質(zhì)量（g）/藥材質(zhì)量（g）×100%。

2.7 水提工藝正交試驗(yàn)

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，按處方比例稱取藥味9份（每份藥材量90 g），其中川銀花加8倍量水先煎30 min，藥液留存，藥渣再與其他藥味合煎。選擇加水量、煎煮時(shí)間、煎煮次數(shù)為考察因素，以蒙花苷、哈巴俄苷、（R，S）-告依春、補(bǔ)骨脂素+異補(bǔ)骨脂素含量等各藥效評(píng)價(jià)的法定指標(biāo)以及評(píng)價(jià)中藥提取效果的參考指標(biāo)干膏率的綜合評(píng)分為指標(biāo)，進(jìn)行綜合加權(quán)評(píng)分，考察各因素對(duì)川銀花藥渣與其他藥味合煎工藝的影響。本研究采用經(jīng)驗(yàn)性權(quán)重法，根據(jù)評(píng)價(jià)指標(biāo)的重要性確定權(quán)重系數(shù)，因此選擇權(quán)重系數(shù)：蒙花苷含量為22、哈巴俄苷含量為22、（R，S）-告依春含量為22、補(bǔ)骨脂素+異補(bǔ)骨脂素含量為11、干膏率為23。綜合評(píng)分＝（提取液中蒙花苷含量/原藥材中蒙花苷含量）×22+（提取液中哈巴俄苷含量/原藥材中哈巴俄苷含量）×22+[提取液中（R，S）-告依春含量/原藥材中（R，S）-告依春含量]×22+（提取液中補(bǔ)骨脂素+異補(bǔ)骨脂素含量/原藥材中補(bǔ)骨脂素+異補(bǔ)骨脂素含量）×11+（干膏率/干膏率最大值）×23。正交試驗(yàn)因素與水平見表2，試驗(yàn)安排與結(jié)果見表3，方差分析結(jié)果見表4。

表2 因素與水平Tab 2 Factors and levels

表3 試驗(yàn)安排與結(jié)果Tab 3 Arrangement and results of orthogonal test

表4 方差分析結(jié)果Tab 4 Results of variance analysis

由直觀分析可知，影響提取效果的因素順序?yàn)镃＞A＞B，最優(yōu)提取工藝為A3B3C3；方差分析結(jié)果顯示，因素C對(duì)提取工藝的影響顯著，因素A、B則無顯著影響。在保證提取效果的前提下，綜合考慮，最終確定最優(yōu)工藝組合為A1B1C3，即加8倍量水煎煮3次，每次1 h。銀菊解毒方的完整水提工藝確定為：川銀花加8倍量水先煎30 min，藥液留存；藥渣再與其他藥味加8倍量水煎煮3次，每次1 h；所有藥液合并。

2.8 驗(yàn)證試驗(yàn)

按處方比例稱取3份藥材（每份540 g），以最優(yōu)工藝提取，結(jié)果見表5。

由表5計(jì)算可知，3次驗(yàn)證試驗(yàn)中綠原酸、蒙花苷、哈巴俄苷、（R，S）-告依春、補(bǔ)骨脂素和異補(bǔ)骨脂素平均含量依次為34.51、10.31、1.79、0.21、9.79 mg/g，干膏率平均值為25.4%，綠原酸平均提取率為78.95%（RSD均小于2%，n＝3），表明該工藝穩(wěn)定、可行。

表5 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果（n＝3）Tab 5Results of verification test（n＝3）

3 討論

3.1 本方的安全性

綠原酸為本方抗炎、抗菌的主要藥效成分，其可抑制炎癥因子的表達(dá)，產(chǎn)生的一系列氮化合物和活性氧等物質(zhì)可抑制口腔細(xì)菌的滋生，預(yù)防牙周炎、牙槽膿腫等口腔疾病，維護(hù)口腔環(huán)境的健康[7]。目前綠原酸的不良反應(yīng)僅在注射液中有報(bào)道[8-9]，口服類制劑尚未見不良反應(yīng)報(bào)道，而本工藝中其含量在已知的安全范圍內(nèi)。為提高藥效，應(yīng)保證有效成分最大程度地被提取出來，本試驗(yàn)優(yōu)化了提取工藝。結(jié)果表明，與本課題組在前期試驗(yàn)中采用的傳統(tǒng)合煎提取工藝相比，此工藝綠原酸的提取率提高了20%左右（60%vs.80%），而其他藥效成分含量的改變相差不大，皆在安全有效范圍內(nèi)。

3.2 綠原酸提取率低的原因探討

單味中藥的化學(xué)成分繁多且復(fù)雜，中藥復(fù)方的化學(xué)成分更為復(fù)雜，復(fù)方中成分并不是各單味組成藥成分的簡(jiǎn)單加和，在煎煮過程中可能會(huì)發(fā)生酸堿中和、取代、水解、聚合、縮合、氧化、變性等化學(xué)反應(yīng)，群藥合煎是一個(gè)極其復(fù)雜的過程，方藥單煎合并使用不完全等效于方藥的合煎使用[10]。本試驗(yàn)通過提取時(shí)間-提取率曲線動(dòng)態(tài)地觀察煎煮過程中綠原酸含量的變化規(guī)律[5]，通過復(fù)方與單味藥藥液中綠原酸提取率的對(duì)比和川銀花與方中其他藥味配伍合煎后的綠原酸提取率的測(cè)定確認(rèn)對(duì)綠原酸產(chǎn)生影響的具體藥味，并初步探討產(chǎn)生影響的原因。綠原酸結(jié)構(gòu)中因含有酯鍵、不飽和雙鍵及酚羥基等結(jié)構(gòu)，因而在高溫、強(qiáng)光及長(zhǎng)時(shí)間加熱的提取條件下，其易被氧化、異構(gòu)化，表現(xiàn)出不穩(wěn)定性；同時(shí)，在堿性條件下，綠原酸可水解為綠色醌類[11]。在前期試驗(yàn)中，川銀花與其他藥味合煎時(shí)綠原酸提取率均低于60%，其可能原因如下：（1）煎煮時(shí)間過長(zhǎng)致綠原酸發(fā)生分解；（2）綠原酸與其他藥材中成分配伍后發(fā)生化學(xué)反應(yīng)[12]；（3）復(fù)方水提液的pH值為5.14，在此條件下綠原酸水解加速。而本試驗(yàn)優(yōu)化的工藝，既避免了以上問題的發(fā)生，同時(shí)也保證了其他成分的有效提取。此種提取方法可為綠原酸類不穩(wěn)定、易分解成分的提取提供參考，對(duì)生產(chǎn)亦有重要參考意義。

3.3 色譜條件選擇

筆者在前期摸索條件時(shí)參考了2015年版《中國(guó)藥典》[13]及相關(guān)文獻(xiàn)[14-16]，對(duì)流動(dòng)相、波長(zhǎng)進(jìn)行了選擇，最終確定流動(dòng)相系統(tǒng)采用乙腈-0.2%磷酸水溶液；檢測(cè)波長(zhǎng)采用多波長(zhǎng)（即240、327、334、280 nm）對(duì)6個(gè)待測(cè)成分進(jìn)行測(cè)定。另外對(duì)不同的梯度洗脫條件下待測(cè)成分色譜峰的分離度、對(duì)稱性、拖尾因子、出峰時(shí)間以及色譜峰純度等多方面進(jìn)行了綜合比較，最終選出本試驗(yàn)中所用的梯度洗脫程序。

綜上，優(yōu)化的水提工藝中綠原酸的提取率及其他藥效成分的含量均較高，且工藝穩(wěn)定、可行。

[1] 左渝陵，李必澤，趙娟.玄菊解毒凝膠治療妊娠期齦炎的臨床觀察[J].中國(guó)計(jì)劃生育和婦產(chǎn)科，2015，7（4）：57-60.

[2] 崔景朝，趙自明.中藥配方顆粒研究進(jìn)展：Ⅱ：中藥單煎與合煎對(duì)比研究概況[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（4）：240-245.

[3] 章運(yùn)典，陳玉海.金銀花中綠原酸提取工藝研究[J].中成藥，2013，35（7）：1564-1566.

[4] 吳衛(wèi)華，康楨，歐陽冬生，等.綠原酸的藥理學(xué)研究進(jìn)展[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2006，18（4）：691-694.

[5] 方文忠，葛爾寧，盛振華.茵陳蒿湯中主要有效成分綠原酸的溶出規(guī)律研究[J].云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，36（2）：24-26.

[6] 尹智慧.不同產(chǎn)地藥用菊花有效成分溶出規(guī)律研究[D].杭州：浙江中醫(yī)藥大學(xué)，2015.

[7] 王麗萍，郭棟，王果，等.中藥綠原酸的研究進(jìn)展[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22（4）：961-963.

[8] 李欽，張信岳，陳國(guó)神.含綠原酸的清熱解毒類中藥注射劑不良反應(yīng)及其機(jī)理探討[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2009，26（7）：555-558.

[9] 林明寶.中藥引發(fā)過敏反應(yīng)的危險(xiǎn)因素及中成藥致敏成分研究[D].杭州：浙江大學(xué)，2013.

[10] 陶麗華，王亞微.中藥的“群藥合煎”與“單味分煎”[J].通化師范學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，25（8）：30-32.

[11] 劉穎，郭明曄，白根本.綠原酸的研究進(jìn)展[J].中藥材，2012，35（7）：1180-1185.

[12] 李晶晶，馮芳.梔子大黃湯不同配伍對(duì)綠原酸溶出的影響[J].廣州化工，2015，43（6）：51-53.

[13] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[S].2015年版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2015：117-118、187-189、205-206、221-222、313-315．

[14] 張宗林.HPLC法測(cè)定銀菊散結(jié)口服液中綠原酸含量[J].齊魯藥事，2006，25（9）：532-533.

[15] 張建偉，趙倩，何希榮，等.UPLC測(cè)定銀黃顆粒中綠原酸、咖啡酸、黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素6種成分[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2014，20（18）：50-53.

[16] 陳國(guó)寶，鄭艷萍，嚴(yán)國(guó)俊，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定小兒感冒顆粒中4種成分的含量[J].中國(guó)藥房，2016，27（27）：3836-3838.

Study on Water Extraction Technology of Yinju Jiedu Oral Liquid

YANG Xiuqing1，GU Jianghua1，SHI Zhengrong1，YUAN Qianghua2，SONG Ying2，HE Chengshi2
（1.School of Pharmacy，Chengdu University of TCM，Chengdu 610075，China；2.Dept.of Pharmacy，Affiliated Hospital of Chengdu University of TCM，Chengdu 610072，China）

R284.2

A

1001-0408（2017）25-3557-05

2016-12-10

2017-02-14）

（編輯：劉 萍）

DOI10.6039/j.issn.1001-0408.2017.25.27

四川省科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.2014SZ0140）

＊碩士研究生。研究方向：中藥新制劑。E-mail：471331315@qq.com

#通信作者：主任中藥師，碩士生導(dǎo)師。研究方向：中藥新制劑、新工藝和新技術(shù)。E-mail：806380106@qq.com