胡仁莉 顧津僮 俞小紅 陳玲 （江蘇省蘇州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 215128）

湖羊小反芻獸疫活疫苗臨床免疫跟蹤試驗(yàn)

胡仁莉 顧津僮 俞小紅 陳玲 （江蘇省蘇州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 215128）

通過對羔羊母源抗體及接種免疫后不同時(shí)期羊群免疫抗體的跟蹤監(jiān)測，并選用法國ID-VET和青島立見兩種品牌比較能代表進(jìn)口和國產(chǎn)小反芻獸疫抗體檢測的試劑盒進(jìn)行比對檢測，同時(shí)對監(jiān)測數(shù)據(jù)進(jìn)行整理分析，最終掌握小反芻獸疫抗體的消長規(guī)律及影響因素，進(jìn)一步了解該疫苗在蘇州市湖羊羊群中的免疫效果。結(jié)果顯示：湖羊的母源抗體水平在出生1月齡左右降低到50%左右，此時(shí)應(yīng)進(jìn)行疫苗免疫，該疫苗免疫后7d左右，免疫抗體迅速轉(zhuǎn)陽，高陽性率僅能維持1個(gè)月左右，之后一直維持在較低水平。兩種試劑盒比較結(jié)果都為陽性的18份，陽性符合率為40%，都為陰性的99份，陰性符合率為86%，陰陽性符合率為73%。

湖羊；小反芻獸疫；疫苗；抗體；效果試驗(yàn)

小反芻獸疫 （Peste Des Petits Ruminants，PPR）是由小反芻獸疫病毒 （PPRV）引起的小反芻獸一種急性高度接觸性傳染病，山羊、綿羊等是主要易感動(dòng)物，我國將該病列為一類動(dòng)物傳染病[1]。近年來，小反芻獸疫在全國的流行形勢比較嚴(yán)峻，目前對于該病的防制措施仍是以疫苗免疫為主。湖羊是世界著名多胎綿羊品種之一，原產(chǎn)于太湖流域，蘇州市是湖羊產(chǎn)地之一。蘇州市政府亦將湖羊納入蘇州地方優(yōu)質(zhì)品種保護(hù)名錄，為更好地做好湖羊保護(hù)，本試驗(yàn)旨在了解該疫苗對湖羊群體的抗體動(dòng)態(tài)變化情況，分析抗體消長規(guī)律，為該疫苗對湖羊的防制提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

（1）蘇州市湖羊保種場隨機(jī)選取出生日期一致的30頭羔羊 （試驗(yàn)中死亡5只），以及日齡相近的40頭為免疫小羊。

（2）羔羊分別于0、7、14和26日齡采血進(jìn)行母源抗體跟蹤監(jiān)測；40頭小羊分2組進(jìn)行試驗(yàn)，一組為小反芻獸疫、口蹄疫及三聯(lián)四防同時(shí)免疫組，一組為口蹄疫和三聯(lián)四防先免，免后半個(gè)月再進(jìn)行小反芻獸疫免疫。

（3）試驗(yàn)疫苗：本試驗(yàn)所用小反芻獸疫疫苗為政府招標(biāo)采購苗，新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的小反芻獸疫活疫苗，批號為2015015-1。

（4）檢測試劑：小反芻獸疫抗體檢測試劑盒分別購自法國ID-VET和青島所立見診斷技術(shù)中心。

（5）檢測方法和結(jié)果判定：依據(jù)試劑盒說明書。

2 結(jié)果與分析

2.1 羔羊小反芻獸疫母源抗體消長

羔羊小反芻獸疫母源抗體消長結(jié)果見圖1、表1。

表1 羔羊小反芻獸疫母源抗體消長結(jié)果

圖1

圖2

從本圖表的法國ID-VET試劑盒檢測結(jié)果可以看出，新生羔羊在出生當(dāng)天，母源抗體陽性率已達(dá)73%，7日齡時(shí)母源抗體水平最高，抗體陽性率達(dá)74%，14日齡時(shí)母源抗體水平稍有下降，到26日齡時(shí)，母源抗體陽性率迅速下降到52%，已到達(dá)群體抗體保護(hù)臨界水平，此時(shí)應(yīng)進(jìn)行疫苗免疫。小反芻獸疫活疫苗的推薦免疫程序?yàn)楦嵫驖M1月齡免疫，該試驗(yàn)結(jié)果與疫苗推薦免疫時(shí)間基本吻合。對比青島立見試劑盒檢測結(jié)果，雖然陽性率總體比ID-VET低4～20%，但二者檢測出的母源抗體消長變化曲線基本一致，而且在羔羊26日齡時(shí)，母源抗體陽性率也迅速下降到48%，同樣提示此時(shí)應(yīng)該進(jìn)行疫苗免疫。

2.2 免疫后小羊抗體消長

免疫后小羊抗體消長結(jié)果見圖2、表2和表3。

表2 同時(shí)免疫組小羊小反芻獸疫抗體消長結(jié)果

表3 先后免疫組小羊小反芻獸疫抗體消長結(jié)果

從本圖表的法國ID-VET試劑盒檢測結(jié)果可以看出，免疫后7d，該組羊群小反芻獸疫免疫抗體轉(zhuǎn)陽率達(dá)80%；免后14d左右抗體轉(zhuǎn)陽率也為80%；因該組免后21d正值春節(jié)放假，所以漏采一次；免后1個(gè)月抗體陽性率迅速下降，之后抗體陽性率一直維持在較低水平。對比青島立見試劑盒檢測結(jié)果，同樣陽性率總體比ID-VET低，但二者檢測出的小羊免疫抗體消長變化曲線基本一致。

從本圖表的法國ID-VET試劑盒檢測結(jié)果可以看出，免疫后6d，該組羊群小反芻獸疫免疫抗體轉(zhuǎn)陽率達(dá)75%；免后10d抗體轉(zhuǎn)陽率最高，為90%；免后20d，抗體轉(zhuǎn)陽率有所下降，為80%；該組免后1個(gè)月因正值春節(jié)放假，所以漏采一次；免后2個(gè)月抗體陽性率迅速下降到20%，之后抗體陽性率一直維持在較低水平。對比青島立見試劑盒檢測結(jié)果，同樣陽性率總體比ID-VET低，但二者檢測出的小羊免疫抗體消長變化曲線基本一致。

表4 法國ID-VET和青島立見檢測符合率分析結(jié)果

圖3

2.3 不同試劑盒結(jié)果符合率比較

分別應(yīng)用法國ID-VET和青島立見兩種目前使用較廣泛，具有代表性的進(jìn)口和國產(chǎn)品牌試劑盒對160份羊血清樣品進(jìn)行檢測，檢測結(jié)果見表4。

表4可見兩種試劑盒對所檢測血清樣品結(jié)果都為陽性的18份，陽性符合率為40%，都為陰性的99份，陰性符合率為86%，陰陽性符合率為73%。不完全符合的有43份，其中ID-VET檢測為陽性、立見檢測為陰性的26份；ID-VET檢測為可疑，立見檢測為陰性的16份；ID-VET檢測為可疑，立見檢測為陽性的1份。兩種試劑盒對抗體陰性樣品的檢出率均較高，在陽性樣品的檢出情況差異較大，ID-VET試劑盒陽性樣品檢出率明顯高于立見試劑盒，而本次試驗(yàn)中抗體陰性樣品占有很大比例，所以在一定程度上也影響了陰陽性符合率結(jié)果。

我們在對40份羔羊樣本進(jìn)行跟蹤檢測發(fā)現(xiàn)，同一樣品的結(jié)果不全是按照抗體消長規(guī)律，其中有部分樣品出現(xiàn)了轉(zhuǎn)陰轉(zhuǎn)陽交替出現(xiàn)的現(xiàn)象，ID試劑盒檢出7份，立見試劑盒檢出5份。查閱相關(guān)資料發(fā)現(xiàn)與何利昆、段亞良等人研究的“其余21%的羊在免疫后7～28d體內(nèi)抗體水平變化情況并不規(guī)律，在不同時(shí)間內(nèi)分別出現(xiàn)陽轉(zhuǎn)陰或陰轉(zhuǎn)陽情況。樣品回溯確認(rèn)這21%的樣品全部來源于綿羊個(gè)體”[2]基本吻合。

3 討論

（1）因該試驗(yàn)為2016年1月11日正式開始，恰逢2月初春節(jié)放假一周，所以羔羊母源抗體跟蹤采樣和小羊免疫后跟蹤采樣并沒有完全按照我們方案制定的每隔7天采一次樣，每組均少采了一次，但這并不影響總體的抗體消長走勢。

（2）湖羊?qū)倬d羊是蘇州的地方保護(hù)品種，在蘇州地區(qū)開展本試驗(yàn)還是比較有意義的。從本試驗(yàn)中可以得出，新出生湖羊羔羊免疫日齡為1月齡，這與疫苗說明書推薦免疫日期一致，但說明書中推薦小反芻獸疫活疫苗免疫1針的有效期為3年，從本試驗(yàn)的免疫抗體維持時(shí)間來看，小羊免后1～2個(gè)月后，免疫抗體迅速下降，之后一直維持在較低水平，單純從本試驗(yàn)的免疫抗體結(jié)果來看，并不能說明免疫1針能維持3年的免疫抗體。同時(shí)本試驗(yàn)中出現(xiàn)抗體水平動(dòng)態(tài)變化不規(guī)律，部分樣品出現(xiàn)了轉(zhuǎn)陰轉(zhuǎn)陽交替出現(xiàn)體的現(xiàn)象，說明該疫苗的免疫效果可能也跟羊的品種有關(guān)。中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所的尹春生博士在《小反芻獸疫活疫苗臨床試驗(yàn)研究》中寫道 “競爭ELISA法和中和試驗(yàn)法都是OIE推薦的抗體檢測方法，但根據(jù)我們實(shí)驗(yàn)室多次試驗(yàn)結(jié)果，OIE參考實(shí)驗(yàn)室提供的競爭ELISA試劑盒的敏感性低于中和試驗(yàn)法，其中原因有待于進(jìn)一步研究”[3]。也就是說我們現(xiàn)在用間接ELISA檢測出的陽性率可能低于中和試驗(yàn)，中和試驗(yàn)結(jié)果更能準(zhǔn)確反映血清抗體水平和個(gè)體抗病毒能力。

（3）關(guān)于兩種檢測試劑盒比較。由于待檢樣本是未知的，因此只能說兩種檢測結(jié)果不同，而試驗(yàn)結(jié)果只能反映兩種試劑盒的一致性程度，數(shù)據(jù)僅供相關(guān)人員選用進(jìn)口或國產(chǎn)檢測試劑盒時(shí)參考。若要深入分析二者孰優(yōu)孰劣，敏感性特異性如何，則需設(shè)置一定數(shù)量的小反芻獸疫陰陽性血清開展比較試驗(yàn)，通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析以獲得更多的數(shù)據(jù)。

[1]王軍.小反芻獸疫的科學(xué)防控[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2014(6)：51-55.

[2]何利昆,段亞良,谷志大,等.遼寧省小反芻獸疫疫苗臨床免疫效果跟蹤試驗(yàn)及抗體水平動(dòng)態(tài)觀察[J].現(xiàn)代畜牧獸醫(yī),2014(8)：14-18.

[3]印春生,支海兵,王樂元,等.小反芻獸疫活疫苗臨床試驗(yàn)研究[J].中國獸藥雜志,2010,44(7)：1-5.