劉曉鳳， 蔣天宇， 徐滕達(dá)， 寇 強(qiáng)， 劉 濤

(1.四川天一學(xué)院, 四川 綿竹 618200； 2.成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院, 四川 成都 610106)

基于化學(xué)成分臨床利用量的郁金質(zhì)量評(píng)價(jià)研究

劉曉鳳1， 蔣天宇2， 徐滕達(dá)2， 寇 強(qiáng)2， 劉 濤2

(1.四川天一學(xué)院, 四川 綿竹 618200； 2.成都大學(xué) 藥學(xué)與生物工程學(xué)院, 四川 成都 610106)

目的:通過(guò)姜黃素的臨床利用量對(duì)郁金的品質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)研究.方法:采用單因素實(shí)驗(yàn)法考察郁金藥材中姜黃素含量的測(cè)定方法，設(shè)計(jì)正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選郁金中姜黃素的最佳提取工藝,根據(jù)最佳提取工藝采用HPLC法測(cè)定多批不同產(chǎn)地郁金中姜黃素的含量,從而計(jì)算其臨床利用量對(duì)藥材進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià).結(jié)果:姜黃素含量測(cè)定供試品制備方法為取細(xì)粉2 g，加入20 mL甲醇，超聲提取30 min；郁金姜黃素最佳提取工藝為藥材加10倍量的60%乙醇提取3次，每次2 h.姜黃素的臨床利用量與藥材的真實(shí)含量呈正相關(guān).結(jié)論:本研究建立的方法重視臨床效果，體現(xiàn)了中醫(yī)藥特色，為郁金及其他中藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)研究提供了一種新的思路.

郁金;臨床利用量;質(zhì)量評(píng)價(jià)

0 引 言

郁金為姜科植物溫郁金、姜黃、廣西莪術(shù)或蓬羲術(shù)的干燥塊根，前兩者分別稱為“溫郁金”和“黃絲郁金”，后兩者按性狀不同稱為“桂郁金”或“綠絲郁金”[1].據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，郁金的主要成分為姜黃素、揮發(fā)油等，其中姜黃素具有抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗氧化等多種藥理作用,且毒性較低,具有良好的臨床應(yīng)用潛力[2-6].

目前，業(yè)內(nèi)主要采用以化學(xué)有效成分的量為指標(biāo)的評(píng)價(jià)模式對(duì)中藥材的品質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)，但有研究表明，以化學(xué)成分含量高低對(duì)藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)的方法,與其是否在臨床中被應(yīng)用相關(guān)性不強(qiáng)，且存在一些缺陷，如藥材中某些成分含量雖然較高，但提取轉(zhuǎn)移率不高或不穩(wěn)定，導(dǎo)致“質(zhì)優(yōu)用劣”的現(xiàn)象發(fā)生[7].化學(xué)成分臨床利用量，是指在臨床應(yīng)用時(shí)，藥材中的主要成分可被臨床使用的量.對(duì)此，本研究以姜黃素的臨床利用量對(duì)不同產(chǎn)地的郁金藥材進(jìn)行品質(zhì)評(píng)價(jià)，希望對(duì)郁金藥材質(zhì)量控制及臨床應(yīng)用提供一定的參考.

1 儀器與試藥

1)實(shí)驗(yàn)所用儀器.iChrom P5100型高效液相色譜儀(大連依利特分析儀器有限公司),FA2004型電子分析天平(上海良平儀器儀表有限公司),KQ-100E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司),HH-S6型電熱恒溫水浴鍋(北京科偉永興儀器有限公司).

2)實(shí)驗(yàn)所用試藥.郁金，來(lái)自四川省中醫(yī)藥科學(xué)院，經(jīng)成都大學(xué)劉濤研究員鑒定為姜科植物姜黃的干燥塊根，即黃絲郁金；姜黃素對(duì)照品(批號(hào)，150824，HPLC>98%)，購(gòu)自成都植標(biāo)化純生物科技有限公司；甲醇與乙腈為色譜純,水為怡寶純凈水，其余試劑均為分析純.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

實(shí)驗(yàn)的色譜條件為：色譜柱為Global Chromatography C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相為乙腈—4%冰乙酸溶液(48∶52)；流速為1.0 mL/min；柱溫為35 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為430 nm；理論板數(shù)按姜黃素峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000[8-9].

2.2 對(duì)照品溶液的制備

稱取姜黃素對(duì)照品適量,精密稱定，置25 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，配置成濃度為0.137 mg/mL對(duì)照品溶液.精密吸取上述溶液5 mL置25 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，并稀釋至刻度，搖勻，制得濃度為0.0137 mg/mL姜黃素對(duì)照品溶液.

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 提取方法考察.

稱取黃絲郁金細(xì)粉(批號(hào)，20160409)4份， 每份約2 g，精密稱定，分別置錐形瓶中，各精密加入甲醇20 mL，稱定重量，分別加熱回流60 min、超聲提取60 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液1 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，作為供試品并測(cè)定含量，結(jié)果見表1.

表1 提取方法考察結(jié)果

表1數(shù)據(jù)表明，利用回流法與超聲法姜黃素含量相近，但超聲法更便捷，故本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選超聲法提取.

2.3.2 提取時(shí)間考察.

稱取黃絲郁金細(xì)粉(批號(hào)，20160409)6份， 每份約2 g，精密稱定， 分別置錐形瓶中，各精密加入甲醇20 mL， 稱定重量，分別超聲提取30、60、90 min，放冷， 再稱定重量， 用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻， 過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液1 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻， 作為供試品并測(cè)定含量， 結(jié)果見表2.

表2 提取時(shí)間考察結(jié)果

表2數(shù)據(jù)表明，在上述條件下超聲提取30、60、90 min姜黃素含量相近，故本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選超聲提取30 min.

2.3.3 提取溶媒考察.

稱取黃絲郁金細(xì)粉(批號(hào)，20160409)8份，每份約2 g，精密稱定，分別置錐形瓶中，各精密加入甲醇、70%甲醇、無(wú)水乙醇、乙醇各20 mL，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用溶媒補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液1 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，作為供試品并測(cè)定含量，結(jié)果見表3.

表3數(shù)據(jù)表明，提取溶媒為甲醇時(shí)，姜黃素含量較高，故本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選甲醇為溶媒.

2.3.4 結(jié) 論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，郁金供試品溶液制備方法為，取黃絲郁金細(xì)粉約2 g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇20 mL，稱定重量，超聲提取30 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過(guò)濾，精密移取續(xù)濾液1 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液.

3 方法學(xué)考察

3.1 線性考察

按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別精密吸取對(duì)照品溶液2、4、6、8、10 μL進(jìn)樣，測(cè)定峰面積.以姜黃素對(duì)照品峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得到回歸方程為，Y=7789.5X+11.738，相關(guān)系數(shù)r=0.9999.結(jié)果表明，姜黃素對(duì)照品進(jìn)樣量在0.0274～0.1370 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系.

3.2 精密度實(shí)驗(yàn)

按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，每次精密吸取對(duì)照品溶液10 μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定5次.結(jié)果顯示，姜黃素對(duì)照品峰面積RSD為0.58%，表明儀器精密度良好.

3.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

取同一批黃絲郁金細(xì)粉(批號(hào)，20160409)5份，每份約2 g，精密稱定，分別按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理后，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定.結(jié)果顯示，姜黃素供試品峰面積RSD為0.52%，表明本方法重復(fù)性良好.

3.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取黃絲郁金細(xì)粉(批號(hào)，20160409)約2 g，精密稱定，按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理后，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行，精密吸取郁金供試品溶液10 μL，注入液相色譜儀，每隔1 h測(cè)定1次，考察8 h.結(jié)果顯示，姜黃素供試品峰面積RSD為1.94%，表明，郁金供試品在8 h穩(wěn)定.

3.5 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

稱取已測(cè)含量的黃絲郁金藥材細(xì)粉(批號(hào)，20160409)5份，每份約1 g，精密稱定，各精密加入姜黃素對(duì)照品適量，分別按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理，進(jìn)行測(cè)定并計(jì)算回收率，結(jié)果見表4.結(jié)果顯示，平均回收率為97.83%,RSD為3.85%.

表4 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

4 多批樣品含量測(cè)定

取不同批次黃絲郁金藥材制按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法處理后，分別進(jìn)樣測(cè)定姜黃素的含量，結(jié)果見表5.

表5 多批樣品含量測(cè)定

表5數(shù)據(jù)表明，不同產(chǎn)地或同一產(chǎn)地不同批次黃絲郁金中姜黃素含量存在明顯差異，說(shuō)明黃絲郁金品種品質(zhì)良莠不齊，種質(zhì)資源不穩(wěn)定.據(jù)此，規(guī)定黃絲郁金中姜黃素含量應(yīng)不低于0.10%.

5 最佳提取工藝考察

5.1 提取溶劑濃度考察

取黃絲郁金藥材(批號(hào)：20160409)3份，每份約100 g，分別置于圓底燒瓶中，并加入10倍量的60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇，然后在微沸狀態(tài)下回流提取90 min，相同條件提取2次[10].合并2次樣液并測(cè)定姜黃素含量，結(jié)果見表6.

表6數(shù)據(jù)表明，用60%乙醇作為提取溶劑提取效果最佳.

表6 提取溶劑濃度與結(jié)果

5.2 正交實(shí)驗(yàn)

5.2.1 因素水平表.

取每份50 g黃絲郁金藥材(批號(hào)，20160409)，以姜黃素含量為指標(biāo)做L9(34)正交實(shí)驗(yàn)，選取溶劑倍量(A)、提取次數(shù)(B)和提取時(shí)間(C)作為影響提取效果的主要因素，每個(gè)因素各選3個(gè)水平，制定因素水平表如表7所示.

表7 實(shí)驗(yàn)因素水平表

5.2.2 提取工藝正交安排及結(jié)果分析.

根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，以姜黃素含量為指標(biāo)進(jìn)行分析，正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果見表8，方差分析見表9.

表8 正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

表9 方差分析表

由表8可知，溶劑倍量、提取次數(shù)與提取時(shí)間3個(gè)因素對(duì)姜黃素的提取影響程度不同,R值大小依次為RB>RA>RC,即提取次數(shù)對(duì)于含量的影響最大，且AK2>AK3>AK1、BK3>BK2>BK1、CK3>CK2>CK1.由表9可知，溶濟(jì)倍量(A)、提取次數(shù)(B)與提取時(shí)間(C)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果都無(wú)顯著性差異.根據(jù)此分析結(jié)果,本實(shí)驗(yàn)的郁金姜黃素的最佳提取工藝為，A2B3C3，即采用10倍量60%乙醇提取3次,每次2 h.

5.3 提取工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

取黃絲郁金藥材(批號(hào)，20160409)3份，每份約50 g，分別置圓底燒瓶中，加入500 mL的60%乙醇，每次提取2 h，每份提取3次，合并提取液并測(cè)定提取液體積與姜黃素的量，結(jié)果見表10.

表10 姜黃素提取工藝驗(yàn)證

表10結(jié)果表明，所選擇的提取工藝穩(wěn)定、可行.

6 姜黃素“真實(shí)”含量及臨床利用量測(cè)定

6.1 不同產(chǎn)地郁金中姜黃素“真實(shí)”含量測(cè)定

取一定量郁金藥材，精密稱定，粉碎，過(guò)六號(hào)篩，收集過(guò)篩后的全部藥材細(xì)粉與未過(guò)篩的全部粉末，分別精密稱定其重量，再按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法和按“2.1”項(xiàng)下色譜條件分別測(cè)定其姜黃素含量，然后計(jì)算出郁金整體藥材姜黃素含量，即為藥材真實(shí)含量，結(jié)果如表11所示.

表11 姜黃素“真實(shí)”含量測(cè)定結(jié)果

注：用過(guò)篩的含量與未過(guò)篩的含量根據(jù)其所占的比例計(jì)算的含量，即為藥材的真實(shí)含量.

6.2 不同產(chǎn)地郁金中姜黃素臨床利用量測(cè)定

按照實(shí)驗(yàn)優(yōu)選的提取工藝，對(duì)不同產(chǎn)地郁金藥材進(jìn)行提取，測(cè)定其姜黃素含量，計(jì)算提取轉(zhuǎn)移率，并根據(jù)表11中藥材真實(shí)含量計(jì)算姜黃素的臨床利用量，結(jié)果見表12.

表12 臨床利用量測(cè)定結(jié)果

注：姜黃素臨床利用量=100 g×郁金藥材真實(shí)含量×姜黃素提取轉(zhuǎn)移率

由表12可知，采自犍為縣的黃絲郁金真實(shí)含量最高，分別為0.9350、1.0823 mg/g，而采自樂(lè)山與雙流的黃絲郁金真實(shí)含量最低，分別為0.5403、0.5802 mg/g，藥材的真實(shí)含量均低于過(guò)篩粉末的含量.同時(shí)，由表12數(shù)據(jù)可知，除雙流舟渡村外，其他產(chǎn)地的黃絲郁金真實(shí)轉(zhuǎn)移率相近，但臨床利用量不同.相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，藥材真實(shí)含量越高其臨床利用量越高，本實(shí)驗(yàn)也證明，姜黃素的臨床利用量與郁金藥材的姜黃素真實(shí)含量在一定程度上正相關(guān).

7 結(jié)論與討論

郁金藥材在《中國(guó)藥典》2015版中有4個(gè)品種,相關(guān)研究表明，黃絲郁金姜黃素含量遠(yuǎn)高于其他品種[11].本實(shí)驗(yàn)為便于研究?jī)H選擇了黃絲郁金為主要藥材，研究結(jié)果對(duì)于另外3種郁金的相關(guān)性有待于進(jìn)一步研究.

本實(shí)驗(yàn)在測(cè)定不同產(chǎn)地郁金中姜黃素臨床利用量時(shí)僅選用了5種不同產(chǎn)地黃絲郁金藥材，樣品量較少，且雙流舟渡村黃絲郁金數(shù)據(jù)異常，是否是藥材本身問(wèn)題所導(dǎo)致的數(shù)據(jù)異常，有待進(jìn)一步研究.

以化學(xué)成分臨床利用量的方式對(duì)郁金進(jìn)行品質(zhì)評(píng)價(jià)，重視臨床效果，體現(xiàn)了中醫(yī)藥特色，本方法可為郁金及其他中藥材品質(zhì)評(píng)價(jià)研究提供一種新的思路.

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Abstract:The paper evaluates the quality of curcuma aromatica through the clinical utilization quantity of curcumin.It also studies the content of curcumin in curcuma aromatica medicine by single factor experiment.Orthogonal experiment is used to optimize the extraction process of curcumin in curcuma aromatica.According to the best extraction process,the content of curcumin in curcuma aromatica of different batches is determined by HPLC.The quality of curcumin is evaluated by the quantity of its clinical use.The results show that the test preparation method for the curcumin content is as the following:fine powder 2 g,adding 20 mL of methanol,ultrasonic extraction 30 minutes.The best extraction process of curcumin in curcuma aromatica is the extraction of 60% ethanol with 10 times the amount of medicine,each time for 2 hours.The clinical use quantity of curcumin is positively correlated with the true content of herbs.The conclusion drawn from the study is that the method established in this paper attaches importance on clinical effects,which demonstrate the characteristics of Chinese medicine and provides a new idea for the quality evaluation of curcuma aromatica and some other Chinese herbal medicine.

Keywords:curcuma aromatica;clinical use;quality evaluation

StudyonQualityEvaluationofCurcumaAromaticaQualityBasedonAmountofClinicalUtilizationofChemicalComponents

LIUXiaofeng1,JIANGTianyu2，XUTengda2,KOUQiang2,LIUTao2

(1.Sichuan Tianyi University, Mianzhu 618200, China;2.School of Pharmacy and Bioengineering, Chengdu University, Chengdu 610106, China)

R286.0

A

1004-5422(2017)03-0225-05

2017-06-30.

劉曉鳳(1987 — )， 女， 從事中成藥質(zhì)量評(píng)價(jià)研究.

劉 濤(1976 — )， 男， 博士， 研究員， 從事中成藥新藥開發(fā)與再評(píng)價(jià)研究.