李學(xué)麗，王際英，宋志東，譚 青，孫永智，張利民

酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)和主要代謝酶活力的影響

李學(xué)麗1，2，王際英2，宋志東2，譚 青1，2，孫永智2，張利民2

（1.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306；2.山東省海洋資源與環(huán)境研究院，山東省海洋生態(tài)修復(fù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，煙臺(tái) 264006）

用酶解豆粕替代基礎(chǔ)飼料中0、20%、40%、60%和80%的魚(yú)粉，配制5種等氮等能的飼料（HSM0、HSM20、HSM40、HSM60、HSM80，其中 HSM0為對(duì)照組）。研究了酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)（Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂）幼魚(yú)生長(zhǎng)、體組成、消化和代謝的影響。結(jié)果顯示：1）HSM40組幼魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率顯著提高（P＜0.05），HSM80組增重率、特定生長(zhǎng)率和蛋白質(zhì)效率顯著降低（P＜0.05），酶解豆粕替代40%以上時(shí)顯著提高了幼魚(yú)的攝食率。2）HSM40組肌肉粗蛋白含量顯著升高（P＜0.05），HSM40～HSM80組全魚(yú)和肌肉粗脂肪含量顯著低于其余組（P＜0.05），HSM40和HSM60組全魚(yú)粗灰分含量顯著高于其余組（P＜0.05），各試驗(yàn)組肌肉氨基酸含量差異不顯著（P＞0.05）。3）HSM80組胃蛋白酶和胰蛋白酶活力顯著降低（P＜0.05）；脂肪酶活力在替代量大于60%時(shí)顯著降低（P＜0.05），各組淀粉酶活力無(wú)顯著差異（P＞0.05）。4）各試驗(yàn)組谷草轉(zhuǎn)氨酶活力與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P＞0.05），HSM80組谷丙轉(zhuǎn)氨酶、脂肪酸合成酶活力顯著降低（P＜0.05），HSM20和HSM40組葡萄糖-6-磷酸酶活力顯著升高（P＜0.05）。綜合考慮，酶解豆粕可替代60%的魚(yú)粉而不降低珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)，在替代量為40%時(shí)促進(jìn)生長(zhǎng)。

珍珠龍膽石斑魚(yú)；酶解豆粕；魚(yú)粉替代；生長(zhǎng)；體組成；消化酶；代謝酶

魚(yú)粉作為水產(chǎn)飼料中最重要的蛋白源，具有抗?fàn)I養(yǎng)因子少、氨基酸組成平衡及適口性好等諸多優(yōu)點(diǎn)。但近年來(lái)由于漁業(yè)資源衰退以及水產(chǎn)養(yǎng)殖規(guī)模的增長(zhǎng)，魚(yú)粉的供需矛盾導(dǎo)致其價(jià)格不斷上漲。因此尋找可以部分或完全替代魚(yú)粉的蛋白源成為當(dāng)前水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要課題。

豆粕蛋白質(zhì)含量高、來(lái)源穩(wěn)定，是當(dāng)前水產(chǎn)飼料中使用最為廣泛的植物性蛋白源。然而豆粕中含有胰蛋白酶抑制劑等抗?fàn)I養(yǎng)因子，過(guò)量添加會(huì)導(dǎo)致魚(yú)體生長(zhǎng)速度降低、飼料系數(shù)升高［1－2］、蛋白質(zhì)利用率降低［3］、消化酶活性降低［4］、以及肝臟、腸道組織病變［5］等，從而制約了其在飼料中的添加比例。采用發(fā)酵、酶解、熱處理等技術(shù)可在一定程度上去除豆粕中的抗?fàn)I養(yǎng)因子，提高豆粕的使用效率［6］。酶解豆粕是豆粕經(jīng)酶水解后，得到的一種由少量游離氨基酸、小肽和多肽組成的混合物［7］。與豆粕相比，酶解豆粕含有大量分子量較小的肽段，具有更好的理化性質(zhì)和生理活性［8］。宋志東等［9］用酶解大豆蛋白替代魚(yú)粉在對(duì)星斑川鰈（Platichthys stellatus）的研究中發(fā)現(xiàn)，適宜的替代比例能提高幼魚(yú)的生長(zhǎng)性能和飼料利用，并對(duì)體組織脂肪蓄積有一定的改善作用。對(duì)海參（Apostichopus japonicus）的研究表明，酶解豆粕替代適量的藻粉能促進(jìn)海參的生長(zhǎng)，提高飼料利用，促進(jìn)礦物質(zhì)的沉積［10］。

珍珠龍膽石斑魚(yú)（Epinephelus fuscoguttatus♀×Epinephelus lanceolatus♂）是棕點(diǎn)石斑魚(yú)（Epinephelus fuscoguttatus，俗稱老虎斑，母本）與鞍帶石斑魚(yú)（Epinephelus lanceolatus，俗稱龍膽斑，父本）雜交培育的新品種，因其具有肉質(zhì)細(xì)膩、營(yíng)養(yǎng)豐富、生長(zhǎng)速度快、抗病性能強(qiáng)等特點(diǎn)而成為石斑魚(yú)養(yǎng)殖的新寵。本研究以珍珠龍膽石斑魚(yú)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，研究用酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)、體組成、消化和代謝的影響，以期為大豆蛋白源的高效利用提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)飼料

實(shí)驗(yàn)用的酶解豆粕根據(jù)SONG等［7］的方法酶解制成：用包含中性蛋白酶（100 000 U·g－1）、風(fēng)味酶（50 000 U·g－1）和非淀粉多糖酶 （木聚糖酶，8 000 U·g－1；β-葡聚糖酶，2 000 U·g－1；β-甘露聚糖酶，150 U·g－1；纖維素酶，300 U·g－1）的復(fù)合酶（武漢新華揚(yáng)生物科技有限公司）酶解豆粕。反應(yīng)體系中豆粕占15%，加入占豆粕比例為1.5%的復(fù)合酶，50℃酶解6 h，然后凍干粉碎過(guò)80篩，制成酶解豆粕。根據(jù)MAMAUAG等［11］的方法測(cè)定蛋白質(zhì)溶解度為49.0% （pH 7.0，22℃），水溶性氮由中國(guó)廣州分析測(cè)試中心（廣州）分析測(cè)定，分子量分布見(jiàn)表1。

表1 酶解豆粕水溶性氮的分子量分布Tab.1 Information of hydrolyzed soybean meal（HSBM）

設(shè)置魚(yú)粉含量為53%的基礎(chǔ)飼料，用酶解豆粕分別替代0、20%、40%、60%和80%的魚(yú)粉蛋白，配制成5組等氮等能的實(shí)驗(yàn)飼料：HSM0、HSM20、HSM40、HSM60、HSM80，其中 HSM0為對(duì)照組。在各試驗(yàn)組飼料中分別添加晶體蛋氨酸和賴氨酸以滿足幼魚(yú)生長(zhǎng)需要，各組飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表2。所有原料粉碎過(guò)80目篩，依據(jù)飼料配方，稱重并采用逐級(jí)擴(kuò)大法混合均勻，加入魚(yú)油和適量的蒸餾水二次混合均勻，擠壓制成直徑為4 mm和6 mm的顆粒飼料，烘干冷卻后裝袋備用。

1.2 實(shí)驗(yàn)魚(yú)及飼養(yǎng)管理

實(shí)驗(yàn)所用珍珠龍膽石斑魚(yú)購(gòu)自山東萊州明波水產(chǎn)有限公司，養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)在山東省海洋資源與環(huán)境研究院東營(yíng)基地的全封閉循環(huán)水系統(tǒng)中進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前投喂基礎(chǔ)飼料，馴養(yǎng)兩周后進(jìn)行分組。選取大小均勻、健康無(wú)病的珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)［（47.18±0.45）g］，隨機(jī)放養(yǎng)于15個(gè)直徑70 cm、高80 cm的圓柱形養(yǎng)殖桶內(nèi)，每桶30 ind，控制水深在50 cm左右，每組設(shè)3個(gè)平行。實(shí)驗(yàn)期間每天在08∶30和16∶30飽食投喂兩次，投喂30 min后排殘餌并記錄殘餌數(shù)。實(shí)驗(yàn)期間，控制水溫在（26.5±0.5）℃，溶氧 ＞5 mg·L－1，鹽度在23～26，pH 7.8～8.0，亞硝酸氮和氨氮含量均 ＜0.1 mg·L－1，實(shí)驗(yàn)周期為 8周。

1.3 樣品采集

實(shí)驗(yàn)魚(yú)取樣前禁食24 h，記錄每桶魚(yú)的總重及尾數(shù)，然后每桶隨機(jī)取10 ind，測(cè)定體重體長(zhǎng)，其中3 ind作為全魚(yú)樣品用于體成分分析，其余7 ind解剖分離內(nèi)臟和肝臟并稱重，取胃和前腸用于胃腸道消化酶活力測(cè)定；取肝臟用于代謝酶活力測(cè)定；取背肌用于常規(guī)成分及氨基酸測(cè)定。以上取樣操作均在冰盤中進(jìn)行，取樣結(jié)束后將所有樣品保存在－70℃冰箱中冷藏待測(cè)。

1.4 測(cè)定指標(biāo)與方法

1.4.1 生長(zhǎng)性能

增重率（WGR，%）＝（實(shí)驗(yàn)?zāi)┚兀瓕?shí)驗(yàn)初均重）／實(shí)驗(yàn)初均重×100；

特定生長(zhǎng)率（SGR，%·d－1）＝（ln實(shí)驗(yàn)?zāi)┚兀璴n實(shí)驗(yàn)初均重）／養(yǎng)殖天數(shù)×100；

飼料系數(shù)（FCR）＝攝食干飼料質(zhì)量／（實(shí)驗(yàn)?zāi)┛傊兀瓕?shí)驗(yàn)初總重）；

表2 實(shí)驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Tab.2 Composition and nutrient levels of experimental diets（DM basis）

蛋白質(zhì)效率（PER，%）＝（實(shí)驗(yàn)?zāi)┛傊兀瓕?shí)驗(yàn)初總重）／（攝食干飼料質(zhì)量×飼料粗蛋白含量）×100；

攝食率（DFI，%·d－1）＝攝食干飼料質(zhì)量／［（實(shí)驗(yàn)初總重＋實(shí)驗(yàn)?zāi)┛傊兀?×養(yǎng)殖天數(shù)］×100；

肝體比（HSI，%）＝肝臟質(zhì)量／體質(zhì)量 ×100；

臟體比（VSI，%）＝內(nèi)臟質(zhì)量／體質(zhì)量 ×100；

肥滿度（CF，g·cm－3）＝體質(zhì)量／體長(zhǎng)3×100。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)飼料和魚(yú)體營(yíng)養(yǎng)成分測(cè)定

水分測(cè)定采用105℃烘干恒重法（GB／T6435-2006）；粗蛋白質(zhì)測(cè)定采用杜馬斯燃燒法（LECO FP-528，USA）；粗脂肪測(cè)定采用索氏抽提法（GB／T6433-1994）；灰分測(cè)定采用馬弗爐550℃灼燒法（GB／T6438-2007）；能量測(cè)定采用燃燒法（IKA，C6000，GERMANY）；氨基酸測(cè)定參照魏佳麗［12］的方法。

1.4.3 胃、腸道及肝臟組織粗酶液的制備

組織樣品冰上自然解凍，用4℃的生理鹽水沖洗表面后用濾紙吸干表面水分，稱取約1 g干凈無(wú)血的組織，剪碎放入小燒杯中，加入其9倍體積的預(yù)冷的勻漿介質(zhì)或生理鹽水，冰浴勻漿后4℃下4 000 r·min－1離心10 min，取上清4℃保存并于24 h內(nèi)完成測(cè)定。

1.4.4 胃腸道消化酶活力的測(cè)定

胃蛋白酶（Pepsin）、腸道胰蛋白酶（Trypsin）、脂肪酶（Lipase）和淀粉酶（Amylase）活性采用試劑盒測(cè)定，所用試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

1.4.5 肝臟代謝酶活力的測(cè)定

肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（Alanine aminotransferase，ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（Aspertate aminotransferase，AST）活性采用日立自動(dòng)生化分析儀（HITACHI-7020，JAPAN）測(cè)定，所用試劑盒購(gòu)自四川邁克生化技術(shù)有限公司；脂肪酸合成酶（Fatty acid synthase，F(xiàn)AS）和葡萄糖-6-磷酸酶（Glucose-6-phosphatase，G6PC）均采用 Elisa試劑盒進(jìn)行測(cè)定，所用試劑盒購(gòu)自上海酶聯(lián)生物技術(shù)有限公司。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

應(yīng)用軟件SPSS 17.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA），差異顯著時(shí)再進(jìn)行Duncan氏多重比較，P＜0.05為差異顯著。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean±SD）的形式表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)和飼料利用的影響

由表3可知，隨著酶解豆粕替代魚(yú)粉比例的增加，幼魚(yú)的增重率和特定生長(zhǎng)率呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，替代40%時(shí)顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），替代80%時(shí)顯著低于對(duì)照組（P＜0.05）；替代60%以上魚(yú)粉顯著降低了蛋白質(zhì)效率（P＜0.05），替代80%時(shí)顯著提高了飼料系數(shù)（P＜0.05）；幼魚(yú)的攝食率隨酶解豆粕替代比例的增加而升高，替代 40%以上時(shí)顯著升高（P＜0.05）；替代40%和60%魚(yú)粉顯著提高了幼魚(yú)的肝體比（P＜0.05）；各試驗(yàn)組幼魚(yú)的存活率、肥滿度和臟體比不受酶解豆粕替代魚(yú)粉的的影響，各組間無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

2.2 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)體組成的影響

如表4所示，酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)全魚(yú)水分和粗蛋白含量無(wú)顯著影響（P＞0.05）；全魚(yú)的粗脂肪含量隨酶解豆粕替代魚(yú)粉比例的增加而逐漸降低，當(dāng)替代量達(dá)到40%及以上時(shí)顯著降低（P＜0.05）；替代40%和60%時(shí)全魚(yú)粗灰分含量顯著升高（P＜0.05）。隨著替代比例的增加，肌肉的粗蛋白含量先升高后降低，其中替代40%時(shí)顯著升高（P＜0.05），肌肉粗脂肪含量呈下降趨勢(shì)，替代40%以上時(shí)顯著降低（P＜0.05）。各組肌肉的粗灰分含量沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）。

酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)肌肉氨基酸組成的影響見(jiàn)表5。在測(cè)出的17種氨基酸中，各試驗(yàn)組幼魚(yú)肌肉的必需氨基酸和非必需氨基酸的含量與對(duì)照組均沒(méi)有顯著差異（P＞0.05）。

表3 酶解豆粕和豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)和飼料利用的影響Tab.3 Effects of fishmeal replacement by HSM on growth performance and feed utilization of Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂

表4 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)體組成的影響（濕重基礎(chǔ)）Tab.4 Effects of fishmeal replacement by HSM on body composition of Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂（wet weight basis）

表5 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)肌肉氨基酸組成的影響（干物質(zhì)基礎(chǔ)）Tab.5 Effects of fishmeal replacement by HSM on muscular amino acid composition of Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂（DM basis）

2.3 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)胃腸道消化酶活力的影響

由表6可以看出，隨酶解豆粕替代比例的增加，胃蛋白酶和胰蛋白酶活力呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)，胃蛋白酶活力在80%替代組顯著降低（P＜0.05）；胰蛋白酶活力在替代量達(dá)到60%以上時(shí)顯著降低（P＜0.05），其它各組與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P＞0.05）；脂肪酶活力隨替代比例的增加而降低，替代60%以上時(shí)顯著降低（P＜0.05）；各試驗(yàn)組腸道淀粉酶活力與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。

2.4 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)肝臟代謝酶活力的影響

如表7所示，隨著替代比例的增加，谷草轉(zhuǎn)氨酶活力呈先升高后降低的趨勢(shì)，但差異不顯著（P＞0.05），谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力在替代量為80%時(shí)顯著降低（P＜0.05），其它各組與對(duì)照組無(wú)顯著差異（P＞0.05）；隨著替代量的增加，脂肪酸合成酶活力呈降低趨勢(shì)，在替代量為80%時(shí)顯著降低（P＜0.05）；G6PC活力在20%和40%替代組顯著高于對(duì)照組（P＜0.05）。

3 討論

3.1 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)和飼料利用的影響

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，酶解豆粕替代40%的魚(yú)粉時(shí)顯著促進(jìn)了珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)的生長(zhǎng)。關(guān)于酶解植物蛋白對(duì)水生動(dòng)物的促生長(zhǎng)作用已經(jīng)有不少研究，劉文斌等［13］研究發(fā)現(xiàn)，在異育銀鯽（Carassius auratus gibelio）中用酶解餅粕蛋白替代魚(yú)粉可促進(jìn)其生長(zhǎng)和飼料利用率。許合金等［14］研究表明，在飼料中添加適量的酶解小麥蛋白能提高凡納濱對(duì)蝦（Penaeus vannamei）的增重率和特定生長(zhǎng)率。宋志東等［10］在海參中用酶解豆粕替代藻粉，可顯著提高海參的生長(zhǎng)性能和飼料利用。酶解植物蛋白對(duì)水生生物的促生長(zhǎng)作用可能與其富含生物活性小肽有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，小肽在滿足動(dòng)物對(duì)氨基酸的需求中有重要的作用，供給動(dòng)物一定量的小肽可使其達(dá)到更大的生產(chǎn)性能。經(jīng)測(cè)定，本實(shí)驗(yàn)酶解豆粕中小于1 000 Da的小肽含量為21.81%，約占可溶性氮的1／2。小肽在消化道內(nèi)可被直接吸收，從而節(jié)約了分解蛋白質(zhì)所消耗的能量用于生長(zhǎng)［15］。此外與游離氨基酸相比，小肽具有吸收速度快、耗能低、載體不易飽和等優(yōu)勢(shì)，并且能消除游離氨基酸的吸收競(jìng)爭(zhēng)［16］，加快蛋白質(zhì)的合成從而促進(jìn)生長(zhǎng)。其二，有些功能類肽可促進(jìn)細(xì)胞分裂，加快體組織的生長(zhǎng)速度。飼料中過(guò)量的酶解植物蛋白會(huì)對(duì)幼魚(yú)的生長(zhǎng)產(chǎn)生不利影響，在本實(shí)驗(yàn)中80%替代組幼魚(yú)的生長(zhǎng)顯著降低，可能是因?yàn)閿z入了過(guò)量的小肽，ZAMBONINO等［17］研究發(fā)現(xiàn)飼料中高水平的小肽會(huì)顯著影響胰島素的合成和分泌，從而抑制魚(yú)體生長(zhǎng)。

表6 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)胃腸道消化酶活力的影響Tab.6 Effects of fishmeal replacement by HSM on activities of digestive enzymes of Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂

表7 酶解豆粕和豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)肝臟代謝酶活力的影響Tab.7 Effects of fishmeal replacement by HSM on activities of metabolic enzymes of Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂

本實(shí)驗(yàn)中酶解豆粕替代魚(yú)粉可顯著提高幼魚(yú)的攝食率，可能與所選用的風(fēng)味酶有關(guān)，風(fēng)味酶不僅可以降低酶解產(chǎn)物的苦味，還可以釋放具有誘食作用的游離氨基酸［18］，改善飼料的適口性從而提高攝食率。HSM80組幼魚(yú)攝食率顯著提高，可能是因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)得不到滿足。

3.2 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)體組成的影響

在本實(shí)驗(yàn)中用酶解豆粕替代魚(yú)粉沒(méi)有降低全魚(yú)的粗蛋白含量，肌肉的粗蛋白含量在一定范圍內(nèi)有升高趨勢(shì)，替代40%組顯著高于對(duì)照組。豆粕經(jīng)酶解后，各種有害物質(zhì)降低，并且酶解產(chǎn)生的小肽可以被完整吸收，直接參與蛋白質(zhì)的合成，并對(duì)氨基酸的轉(zhuǎn)運(yùn)也有促進(jìn)作用，從而有利于蛋白質(zhì)的高效利用，提高蛋白質(zhì)在魚(yú)體內(nèi)的沉積［19］。隨酶解豆粕替代比例的增加，全魚(yú)和肌肉的粗脂肪含量呈降低趨勢(shì)，這與宋志東等［9］在星斑川鰈中用酶解大豆蛋白替代魚(yú)粉的結(jié)果類似。研究發(fā)現(xiàn)，大豆肽能刺激交感神經(jīng)，阻止脂肪的吸收和促進(jìn)脂質(zhì)的分解代謝，此外大豆肽還能刺激產(chǎn)生熱能的褐色脂肪組織（BAT）的活性，提高甲狀腺素在血液中的濃度，從而提高基礎(chǔ)代謝水平，促進(jìn)體內(nèi)多余脂肪的消耗，以此來(lái)達(dá)到減肥降脂的作用［20］。酶解豆粕替代40%和60%魚(yú)粉組全魚(yú)的粗灰分含量顯著增加，肌肉的粗灰分含量也有上升趨勢(shì)。一般認(rèn)為，魚(yú)體粗灰分含量與礦物質(zhì)的沉積密切相關(guān)，因?yàn)榇蠖闺哪芘c金屬元素結(jié)合生成螯合物，增加了鈣、鐵、銅、鋅等金屬離子的可溶性，促進(jìn)其吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)速度，從而促進(jìn)了魚(yú)體對(duì)礦物質(zhì)的吸收利用和魚(yú)體粗灰分含量上升［21］。INFANTE等［22］研究證明在舌齒鱸（Dicentrarchus labrax）魚(yú)苗的飼料中添加大豆小分子肽后，能增強(qiáng)骨骼的正常發(fā)育并且能有效減少骨骼的畸形發(fā)生，其原因是大豆小分子肽能與金屬離子有效結(jié)合，而促進(jìn)鈣、鐵、銅和鋅的有效轉(zhuǎn)運(yùn)和在體內(nèi)的儲(chǔ)存。

通過(guò)對(duì)魚(yú)體肌肉氨基酸的分析，表明用酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)幼魚(yú)肌肉中各種氨基酸的含量沒(méi)有顯著影響。研究發(fā)現(xiàn)小肽對(duì)氨基酸的吸收有一定的促進(jìn)作用，小肽獨(dú)特的吸收機(jī)制可使氨基酸被迅速吸收，同時(shí)小肽可提高二肽酶和氨基酸載體的數(shù)目，增加機(jī)體對(duì)氨基酸的吸收并沉積在肌肉中［23］；此外，小肽是腸道的吸收底物，而氨基酸的吸收受到腸腔中吸收底物濃度的影響，小肽含量高則氨基酸吸收快［24］。本實(shí)驗(yàn)酶解豆粕中小肽含量約占可溶性氮的1／2，因此對(duì)氨基酸的吸收累積沒(méi)有造成不利影響。

3.3 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)胃腸道消化酶活力的影響

胃腸道消化酶活力的高低反映了魚(yú)類對(duì)進(jìn)入機(jī)體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收能力，進(jìn)而決定魚(yú)類的生長(zhǎng)發(fā)育速度。本實(shí)驗(yàn)中用酶解豆粕替代魚(yú)粉，在促生長(zhǎng)的替代范圍內(nèi)胃蛋白酶和胰蛋白酶的活力也有相應(yīng)的提高，表明酶解豆粕可能通過(guò)提高消化酶活性等功能來(lái)促進(jìn)魚(yú)類生長(zhǎng)［25］。酶解豆粕提高蛋白酶的活力可能是因?yàn)槎蛊山?jīng)酶解后，抗?fàn)I養(yǎng)因子被部分或完全消除，投喂幼魚(yú)后保證了其腸道健康，從而提高了消化酶活力［26］；此外，豆粕酶解后產(chǎn)生了大豆肽，大豆肽能有效刺激和誘導(dǎo)消化酶的合成分泌［31］。高比例的酶解豆粕替代魚(yú)粉造成消化酶活力的降低，這與CAHU等［27］在舌齒鱸的研究結(jié)果一致，這可能是因?yàn)榇罅棵附舛蛊傻臄z入增加了腸道內(nèi)部小肽和游離氨基酸的含量，消化酶所作用的底物減少?gòu)亩档土藘?nèi)源酶的需要量，以此反饋調(diào)節(jié)消化酶的表達(dá)量［25］。

3.4 酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)珍珠龍膽石斑魚(yú)幼魚(yú)肝臟代謝酶活力的影響

肝臟ALT和AST活力的高低一定程度上反映了機(jī)體對(duì)蛋白質(zhì)的合成和分解能力。AST活力升高則蛋白質(zhì)合成代謝加強(qiáng)，分解代謝減弱，這有利于機(jī)體進(jìn)行氮的積累；ALT活力升高則說(shuō)明機(jī)體加快尿素的生成，以減少氨基酸代謝廢物對(duì)機(jī)體的毒害［28］。本實(shí)驗(yàn)中各試驗(yàn)組AST活力與對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，說(shuō)明在一定程度上酶解豆粕替代魚(yú)粉對(duì)幼魚(yú)蛋白質(zhì)的合成沒(méi)有造成不利影響。FAS在機(jī)體脂肪沉積中起關(guān)鍵作用，動(dòng)物的體脂沉積所需要的脂肪酸大多是由FAS催化乙酰CoA和丙二酸單酰CoA合成的。本實(shí)驗(yàn)中，各酶解豆粕替代組全魚(yú)和肌肉的粗脂肪含量呈下降趨勢(shì)，相應(yīng)的FAS的活力也降低，因此推測(cè)粗脂肪含量降低一部分原因可能是由于FAS的活力受到抑制。研究發(fā)現(xiàn)，大豆肽能提高血液中甲狀腺素的濃度，而FAS的表達(dá)調(diào)控受激素的影響，其中甲狀腺素能在轉(zhuǎn)錄水平對(duì)FAS基因的表達(dá)起到調(diào)控作用從而抑制其活性［29］。在本實(shí)驗(yàn)中各替代組幼魚(yú)攝食含有大豆肽的飼料從而降低了FAS的活力。

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Effects of fishmeal replacement by hydrolyzed soybean meal on growth，body composition，digestive and metabolic enzyme activities of juvenile Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂

LI Xue-li1，2，WANG Ji-ying2，SONG Zhi-dong2，TAN Qing1，2，SUN Yong-zhi2，ZHANG Li-min2（1.College of Fisheries and Life，Shanghai Ocean University，Shanghai 201306；2.Key Laboratory for Shandong Marine Ecological Restoration，
Shandong Marine Resource and Environment Research Institute，Yantai 264006）

An 8-week feeding experiment was conducted to evaluate the effects of fishmeal replacement by hydrolyzed soybean meal（HSM）on growth performance，body composition，digestion and metabolism of juvenile hybrid grouper（♀Epinephelus fuscoguttatus×♂Epinephelus lanceolatus）.Five isonitrogenous and isoenergetic diets were formulated by replacing 0，20%，40%，60%，80%of fishmeal protein with hydrolyzed soybean meal（HSM0-80）respectively.A total of 450 juvenile hybrid grouper with an average body weight of（47.18±0.45）g were randomly assigned into 5 groups with 3 replicates per group and 30 fish per replicate.Results showed as follows：1）The weight gain rate（WGR）and specific growth rate（SGR）of the juveniles increased significantly in group HSM40 while the WGR，SGR，protein efficiency ratio（PER）in group HSM80 were significantly lower than that of other groups（P＜0.05）.When dietary hydrolyzed soybean meal content was more than 40%，the DFI of the juveniles significantly increased（P＜0.05）；2）With the increasing of dietary hydrolyzed soybean meal content，the crude lipid content in whole body and muscle decreased and the values of group HSM40 to group HSM80 were significantly lower than that of other groups（P＜0.05），the crude ash content in whole body was significantly higher in group HSM40 and group HSM60（P＜0.05），there was no significant difference in the content of amino acids of muscle among the replacement groups（P＞0.05）；3）With the increasing of dietary hydrolyzed soybean meal content the pepsin and trypsin activities increased and then decreased and were significantly lower in group HSM80（P＜0.05），the activity of lipase was significantly lower when dietary hydrolyzed soybean meal content was more than 60%；4）The activities of alanine transaminase（ALT）decreased significantly in group HSM80（P＜0.05），with the increasing of dietary hydrolyzed soybean meal content，the activity of fatty acid synthase（FAS）decreased and was significantly lower in group HSM80（P＜0.05）.The activity of G6PC was significantly higher in group HSM20 and group HSM40.In conclusion，replacing up to 60%of dietary fishmeal with hydrolyzed soybean meal does not reduce the growth of juvenile hybrid grouper and the optimal replacement level is 40%.

Epinephelus fuscoguttatus♀ ×Epinephelus lanceolatus♂；hydrolyzed soybean meal；fishmeal replacement；growth；body composition；digestive enzymes；metabolic enzymes

S 963

A

1004－2490（2017）05－0529－10

2017－03－17

國(guó)家海洋生物產(chǎn)業(yè)水生動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料研發(fā)創(chuàng)新示范平臺(tái)（201702001）；山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2016GSF005005）；山東省自然科學(xué)基金（ZR2015CQ023）

李學(xué)麗（1991－），女，山東濟(jì)南人，碩士研究生，從事動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料科學(xué)研究。

E-mail：lixueli1226＠126.com

張利民，研究員。E-mail：zhanglimin＠126.com