李青松，嚴志強

江蘇省昆山市中醫(yī)醫(yī)院(昆山 215300)

正交實驗法優(yōu)選胃炎片一號的水提工藝*

李青松，嚴志強

江蘇省昆山市中醫(yī)醫(yī)院(昆山 215300)

目的：優(yōu)選胃炎片一號的水提取工藝。方法：以浸膏得率和芍藥苷含量進行綜合加權(quán)所得評分為指標(biāo)，采用 L18(37)正交設(shè)計試驗，考察浸泡時間、加水量、提取時間、提取次數(shù)、浸泡溫度等因素的影響，優(yōu)選胃炎片一號的水提取工藝。結(jié)果：最佳水提工藝為飲片浸泡 0.5 h，加 12倍量水回流提取2次，每次1.5 h。結(jié)論： 優(yōu)選的水提取工藝穩(wěn)定可行，為胃炎片一號的工業(yè)生產(chǎn)提供了依據(jù)。

胃炎片一號方為我院經(jīng)驗方，其組成是由白芍，香附，延胡索，青皮，土木香，柴胡等10余味中藥。臨床用于肝胃不和所致功能性消化不良引起的胃脘痛療效顯著。由于其制劑工藝開發(fā)較早，可能未最大程度提取制劑中有效成分，對于療效有所影響。現(xiàn)結(jié)合藥味性質(zhì)和臨床需要，對其提取方式進行科學(xué)優(yōu)化，采用水蒸汽蒸餾法提取方中揮發(fā)油成分后[1]，將藥渣并入余藥進行共水提。由于方中以白芍為君，且其緩中止痛效果明顯[2-4]，故本實驗以其主要有效成分芍藥苷的提取率及浸膏得率，采用正交實驗法進行優(yōu)選。

材料與方法

1 儀 器 Agilent 1100型高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；SARTORIUS BP-210S十萬分之一電子分析天平(德國賽多利斯公司)；RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申勝生物技術(shù)有限公司)；SHB-ⅢS循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長城科工貿(mào)有限公司)；HHS型恒溫水浴鍋；DZF-6050真空干燥箱；KQ-100型超聲波清洗器等。

2 試藥與試劑 白芍、柴胡等飲片(南京海源中藥飲片有限公司)，經(jīng)鑒定符合2015版《中華人民共和國藥典》標(biāo)準(zhǔn)。芍藥苷(中國食品藥品檢定研究院，批號110736-201136，含量以96.4%計)。

3 干浸膏的制備及測定 依次稱取制劑投料飲片，對香附、柴胡、青皮、枳殼和土木香，采取水蒸氣回流提取、收集揮發(fā)油。按L18(37)正交表的試驗設(shè)計，將其余藥味加入提取揮發(fā)油后的藥渣中，進行水提工藝，所得樣品液靜置、過濾，并以水浴蒸干轉(zhuǎn)移至恒重蒸發(fā)皿中的濾液，于105℃烘箱中干燥3 h，冷卻至常溫后稱定重量，計算浸膏得率[5]。

4 芍藥苷含量測定

4.1 色譜條件[6]:Diamonsil C18(L)色譜柱(4.6 mm×250 mm，5μm)；流動相:乙腈-0.1%磷酸水(14:86)，檢測波長230nm，流速1.0 ml·min-1，柱溫25℃。

4.2 溶液制備:對照品溶液的制備：精密稱取芍藥苷對照品0.0054 g，加乙腈-0.1%磷酸水(14∶86)50 ml制成每1 ml含芍藥苷0.104 mg的溶液，即得。陰性對照品溶液的制備:除白芍外，稱取其余處方藥材，制備干浸膏樣品，按供試品溶液項方法進行處理，制得陰性對照溶液。

4.3 專屬性試驗按“4.1”項下色譜條件，依次對照品、供試品溶液和陰性對照溶液進行分析，各精密吸取10 μl進樣，記錄相應(yīng)色譜圖，結(jié)果顯示陰性無干擾，表明該方法專屬性良好。

4.4 線性關(guān)系考察:制備對照品溶液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 ml于5ml容量瓶中，加上述流動相定容，制得不同濃度的對照品溶液。按“4.1”項下色譜條件，以峰面積Y對進樣量X(μg)進行線性回歸，方程為Y=2000000X-27164，r=0.9996。表明在0.3123～0.8329μg范圍內(nèi)，芍藥苷呈顯著的線性相關(guān)。

4.5 精密度考察:于“4.1”項下色譜條件，采用同一芍藥苷對照品溶液(0.521mg·ml-1),每次10 μl，重復(fù)6次，顯示儀器精密度的RSD為0.9%。

4.6 穩(wěn)定性試驗:于“4.1”項下色譜條件，精密吸取供試品溶液10 μl，分別于0、1、2、4、6、8 h進樣，測定峰面積，求得8 h內(nèi)穩(wěn)定性的RSD為1.3%。

4.7 重復(fù)性試驗:于“4.1”項下色譜條件，取同一樣品6份，按“4.2”項下方法制備供試品溶液，測定峰面積，求得重復(fù)性的RSD為1.2%。飲片中芍藥苷含量(mg)=白芍飲片重量(g)×1.8%×1000。

5 正交試驗 在單因素試驗基礎(chǔ)上，本實驗選取了浸泡時間、加水量、提取時間、提取次數(shù)及浸泡溫度5個影響因素，按表1中L18(37)正交表的設(shè)計，分取上述工藝條件下制備的干浸膏，按“4.2”項下方法制備，并按上述含量測定條件測定，計算浸膏得率及各組芍藥苷的提取率。

根據(jù)處方藥物成分及療效所需，對上述浸膏得率(W1)、芍藥苷提取率(W2)進行綜合加權(quán)評分[7]。芍藥苷為君藥白芍中起主要作用的藥效成分，是本制劑的主要指標(biāo)，故權(quán)重系數(shù)定為0.7；浸膏得率高低也相應(yīng)影響后續(xù)片劑質(zhì)量，作為輔助指標(biāo)，其權(quán)重系數(shù)定為0.3[8]。按綜合評分(W)=(0.3×W1/W1max+0.7×W2/W2max)×100%得出試驗結(jié)果。正交試驗方案見表2，試驗結(jié)果見表3，方差分析見表4。

表1 正交試驗因素水平表

表2 正交試驗方案

表3 正交試驗結(jié)果

表4 方差分析結(jié)果

注：F0.10(2,10)=2.92，*P<0.1;F0.05(2,10)=4.10，?P<0.05

通過綜合評分進行直觀分析，可知5個影響因素的大小順序為B>D>A>C>E，最優(yōu)化方案為A3B2C2D2E3。而方差分析結(jié)果表明加水量及提取次數(shù)具有顯著差異，因此B2、D2水平優(yōu)先確定，即提取2次，加12倍量水；其余因素基本無差異。綜合以上數(shù)據(jù)分析并結(jié)合生產(chǎn)成本考慮，浸泡時間選擇0.5 h，提取時間選擇3 h，浸泡溫度選擇35 ℃，因此得出優(yōu)選方案為A1B2C2D2E3。

6 驗證 采取平行3組進行驗證試驗，結(jié)果浸膏平均得率為24.51%，RSD為2.58%；芍藥苷平均提取率85.94%，RSD為1.09%。表明該方法較穩(wěn)定，切實可行。

討 論

胃炎片一號原以水提醇沉法制得，本實驗根據(jù)藥味性質(zhì)，通過前期試驗對方中揮發(fā)油成分提取后，采用將藥渣并入余藥進行共水提，既符合中藥湯劑的特點，又能將藥材的有效成分提取得比較完全，符合醫(yī)院制劑實際配制情況[9]；由于方中藥味眾多，單一指標(biāo)難以客觀評價方案的優(yōu)劣，故采用方中君藥白芍所含有效成分芍藥苷[10]，作為主要評價指標(biāo)，結(jié)合浸膏得率進行綜合評價，采用正交實驗對提取工藝進行了優(yōu)選，方法可行性、重現(xiàn)性俱佳，為實際生產(chǎn)以及后續(xù)制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供了一定的依據(jù)[11-12]。

原先根據(jù)藥典[13]方法進行含量測定時，發(fā)現(xiàn)用稀乙醇制備的供試品溶液峰形波動較大；經(jīng)多次調(diào)整后，發(fā)現(xiàn)以流動相溶解干浸膏后高效液相平穩(wěn)，峰形對稱性佳，分離度良好。此外，采取回流和超聲提取制備供試品溶液，溶解性差別不明顯，有效成分含量檢測基本無差異，故確定采用較為簡便的超聲30 min的方法提取。

中藥提取作為一個復(fù)雜的混合反應(yīng)過程[14]，為保證全面、合理，本次試驗采用 L18(37)正交設(shè)計，將浸泡時間與浸泡溫度列入考察范圍，以優(yōu)化提取工藝參數(shù)。根據(jù)實驗結(jié)果，除加水量和提取次數(shù)外，其余因素均無顯著影響。由此可以看出，浸泡時間會影響飲片的溶出度，但浸泡0.5 h已可浸出大部分的有效物質(zhì)，溶出物濃度已接近平衡，從節(jié)約能源和提高效率出發(fā)，因此最終采取浸泡0.5 h；浸泡溫度結(jié)合實際生產(chǎn)車間廠房夏冬季節(jié)常溫設(shè)置的因素水平，顯示控制在35℃左右效率較高；從提取時間的影響來看，提取時間的延長無助于有效物質(zhì)的溶出提升，造成中藥中的淀粉類物質(zhì)的糊化粘壁，變相降低了提取物質(zhì)量以及相應(yīng)有效成分的含量。

復(fù)方水提取的效率可以由浸膏量評價，但結(jié)合劑型考量，浸膏量過大并不利于后期精制除雜，因此，醇沉步驟需進行下一步考察，可借鑒本實驗所建立芍藥苷測定方法。

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OptimizationofwaterextractionprocedureforWeiyantabletsⅠwithorthogonalexperimentaldesign

Li Qingsong，Yan Zhiqiang.

Traditional Chinese Medicine Hospital Pharmacy of Kunshan( Kunshan 215300)

Objective: To optimize the water decocting extraction procedure for Weiyan tablets Ⅰ.Methods: With the comprehensive score of the yield of dry extract and peaoniflorin as index，L1837orthogonal experimental design was carried out to optimize the extraction process by taking the soak time，volume of wate，extraction time，extraction times and soaking temperature as factors.Results: The optimal wate extraction process was as follows：TCM decoction pieces were soaked for 0.5 h，and the ratio of liquid‐solid was 12 ，the extraction times were 2，the extraction time was 1.5 h．Conclusion: This optimal water decocting extraction procedure is stable and feasible．It can provide the basis industrial production for Weiyan tablets Ⅰ.

@Weiyan tablets Ⅰ Technology, pharmaceutical Paeoniflorin Orthogonal test

*江蘇省蘇州市科學(xué)技術(shù)局項目(SYSD2014152)

@胃炎片一號 工藝學(xué), 制藥 芍藥苷 正交試驗

R283

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2017.11.056

(收稿：2017-06-11)