超氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素在大鼠壓瘡模型損傷中的表達(dá)及作用

蘭園淞，高 文，廖海濤，楊立會(huì)，韋義萍

（廣西醫(yī)科大學(xué) 護(hù)理學(xué)院，廣西 南寧 530021）

【研究生園地·論著】

超氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素在大鼠壓瘡模型損傷中的表達(dá)及作用

蘭園淞，高 文，廖海濤，楊立會(huì)，韋義萍

（廣西醫(yī)科大學(xué) 護(hù)理學(xué)院，廣西 南寧 530021）

目的通過壓力裝置建立大鼠壓瘡模型，檢測(cè)模型中的超氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素的水平，探討指標(biāo)與壓瘡模型損傷的相關(guān)性，為臨床壓瘡的預(yù)防提供早期預(yù)測(cè)指標(biāo)。方法將40只SD大鼠隨機(jī)分成4組：空白組和2、3、4個(gè)缺血再灌注循環(huán)組，每組10只，通過施加和移除壓力裝置模擬缺血再灌注的方式建立壓瘡模型；用ELISA試劑檢測(cè)血液中超氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素的水平，按照光鏡下皮膚肌肉損傷分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)再將大鼠分成正常、輕度損傷、中度損傷和重度損傷，分析超氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素與壓瘡模型損傷程度的相關(guān)性。結(jié)果壓瘡模型缺血再灌注循環(huán)次數(shù)越多，大鼠皮膚肌肉組織損傷程度越嚴(yán)重，各缺血再灌注循環(huán)組損傷程度均重于空白組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；隨著損傷程度的加重，氧化物歧化酶含量降低，丙二醛、內(nèi)皮素含量增加，輕度、中度、重度損傷大鼠的超氧化物歧化酶水平均低于正常組，而丙二醛和內(nèi)皮素水平均高于空白組，各組組間比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；損傷嚴(yán)重程度與超氧化物歧化酶呈密切負(fù)相關(guān)（r=-0.930，P＜0.01），與丙二醛呈密切正相關(guān)（r=0.924，P＜0.01），與內(nèi)皮素呈密切正相關(guān)（r=0.927，P＜0.01）。結(jié)論超氧化物歧化酶含量的下降，丙二醛和內(nèi)皮素含量增加是組織損傷加重的影響因素，結(jié)合生化指標(biāo)檢測(cè)對(duì)壓瘡發(fā)生早期的評(píng)估會(huì)更加具有預(yù)見性。

缺血再灌注；壓瘡模型；超氧化物歧化酶；丙二醛；內(nèi)皮素

壓瘡(pressure ulcer,PU)是醫(yī)院和養(yǎng)老醫(yī)療護(hù)理機(jī)構(gòu)普遍存在的護(hù)理問題。多年來，它的發(fā)生被認(rèn)為是評(píng)價(jià)護(hù)理質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)之一，在國(guó)內(nèi)，也是護(hù)理領(lǐng)域關(guān)注的課題之一[1-3]。多數(shù)研究觀點(diǎn)認(rèn)為，壓瘡形成是從內(nèi)向外，多方面因素綜合作用的結(jié)果。從查閱的國(guó)內(nèi)文獻(xiàn)看，我國(guó)臨床對(duì)于壓瘡評(píng)估和預(yù)防仍以觀察和經(jīng)驗(yàn)判斷居多，缺乏系統(tǒng)性和科學(xué)性，單純通過肉眼觀察評(píng)判具有很大的主觀性和滯后性，肉眼只能觀察到皮膚表面的損傷，皮下組織的病變?nèi)绾螣o從得知，繼續(xù)發(fā)展是否會(huì)誘發(fā)壓瘡無法預(yù)測(cè)，為了更好認(rèn)識(shí)和評(píng)估壓瘡的發(fā)生和嚴(yán)重性，有必要結(jié)合細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、分子水平等方面去探討壓瘡發(fā)生機(jī)制以便提出更好的預(yù)防策略[4]。本課題通過建立壓瘡動(dòng)物模型，檢測(cè)壓瘡發(fā)生過程中的超氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素，結(jié)合病理切片觀察，研究三者與壓瘡模型損傷的關(guān)系，從分子水平及細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)去探討壓瘡形成機(jī)制，為臨床壓瘡的早期預(yù)防打下實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)并提供借鑒方法和預(yù)測(cè)指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組 健康普通級(jí)成年雄性SD大鼠40只，由廣西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，許可證號(hào)：SCXK 桂 2014-0002，體質(zhì)量 200～230 g，按隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分成4組，每組各10只，分別是空白組、2個(gè)缺血再灌注循環(huán)組、3個(gè)缺血再灌注循環(huán)組、4個(gè)缺血再灌注循環(huán)組，每組體質(zhì)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），大鼠所處的環(huán)境、溫濕度均一致，自由飲水進(jìn)食，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。

1.2 主要試劑和儀器 0.9-1.1毛細(xì)玻璃管（內(nèi)徑0.9～1.1 mm，管長(zhǎng) 100 mm，500 支/筒）由成都市川華達(dá)科學(xué)儀器廠提供；高速冷凍離心機(jī)，由長(zhǎng)沙英泰有限責(zé)任公司提供；光學(xué)顯微鏡，由上海徠卡儀器有限公司提供；美國(guó)熱電Multiskan FC酶標(biāo)儀；麻醉藥20%濃度的烏拉坦；10%中性多聚甲醛；蘇木精-伊紅染色相關(guān)耗材；酶聯(lián)免疫試劑盒：超氧化物歧化酶（生產(chǎn)批號(hào)：E02S0012），丙二醛（生產(chǎn)批號(hào)：E02M0023）由上海BlueGene公司提供，內(nèi)皮素（生產(chǎn)批號(hào)：E069789r）由武漢CUSABIO公司提供。

1.3 方法

1.3.1 壓力裝置制作 參考姜麗萍等壓力裝置制作的方法[5]，自行設(shè)計(jì)壓力裝置，包括施壓裝置和固定器。施壓裝置由空礦泉水瓶，膨脹螺絲釘和瓶子內(nèi)容物（石子）組成，固定器由鐵絲和輸液架組成?？盏V泉水瓶底座剪去，在瓶口蓋中心鉆一個(gè)孔，放置膨脹螺絲釘旋轉(zhuǎn)固定，其中膨脹螺絲釘?shù)闹睆綖?cm，施壓面積 S=π×r2=0.785×10-4m2， 由于要施加 34.7 kPa的壓強(qiáng)，根據(jù) P=F/S，F(xiàn)=G=m×g=（m1+m2）g，g=9.8 N/kg，其中m1是瓶子加上螺絲釘?shù)馁|(zhì)量，大約25 g，m2是瓶子內(nèi)填充物的質(zhì)量，推算出需要填充物入瓶子內(nèi)容物的質(zhì)量大約225 g。瓶子用鐵絲纏繞固定在輸液架上，壓力裝置制作完成。

1.3.2 壓瘡模型的建立 大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食12 h，用20%的烏拉坦按照200 g大鼠0.8mL的劑量腹腔注射麻醉，側(cè)臥位于泡沫床墊上，用備皮刀對(duì)其大腿一側(cè)股薄肌部位進(jìn)行剃毛暴露出施壓部位，并用膠布固定大鼠身體及四肢，然后放上壓力裝置。在大鼠股薄肌上施加壓力裝置（缺血）2 h，再撤去壓力放松0.5 h（再灌注），以2.5 h為1個(gè)缺血再灌注循環(huán)。具體做法：（1）空白組（n=10）：大鼠不做任何處理。（2）實(shí)驗(yàn)組：（n=30，共3組，每組10只）：使用壓力裝置在大鼠股薄肌部位施予34.7 kPa壓強(qiáng)，每組大鼠分別施予2、3、4個(gè)循環(huán)的缺血再灌注，每組分別耗時(shí)5 h、7.5 h、10 h。整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中按需補(bǔ)充麻醉藥，同時(shí)每個(gè)循環(huán)根據(jù)大鼠體質(zhì)量腹腔注射2mL/kg葡萄糖鹽水（2.50%葡萄糖注射液加0.45%氯化鈉注射液）1次以保證麻醉期間正常水合。

1.3.3 標(biāo)本的收集及檢測(cè) （1）血標(biāo)本的采集及檢測(cè)方法：實(shí)驗(yàn)前后均進(jìn)行采血，選擇內(nèi)徑為0.9～1.1 mm規(guī)格的毛細(xì)玻璃管扎入大鼠眼眶后靜脈叢分別取2mL全血，1份加入干燥采血管提取血清，另1份加入肝素抗凝管提取血漿，4℃環(huán)境下4 000 r/min離心8min，收集上清液，血清用于檢測(cè)氧化物歧化酶和丙二醛，血漿用于檢測(cè)內(nèi)皮素，三者均用雙抗體夾心法原理測(cè)定，即用純化的相應(yīng)指標(biāo)的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被單抗的微孔中依次加入對(duì)應(yīng)三大檢測(cè)指標(biāo)，再與辣根過氧化物酶標(biāo)記的三大指標(biāo)抗原結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物溶液顯色。底物溶液在辣根過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的三大指標(biāo)水平均呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中三大指標(biāo)的濃度。具體操作方法按試劑盒提供的說明書進(jìn)行。（2）組織標(biāo)本的采集：實(shí)驗(yàn)結(jié)束，立即切取大鼠股薄肌受壓中心部位皮膚肌肉組織大小約0.5cm×0.5cm×0.5cm，4℃生理鹽水洗凈血液后，10%中性多聚甲醛固定，石蠟包埋，蘇木精-伊紅染色，光學(xué)顯微鏡下觀察。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 肉眼觀察 實(shí)驗(yàn)結(jié)束，觀察表面皮膚形態(tài)學(xué)和顏色變化，包括皮膚有無破損，有無充血，破損面積大小，破損深度等。

1.4.2 血指標(biāo) 檢測(cè)氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素的含量。

1.4.3 光鏡下觀察 參照姜麗萍等[5]光鏡下皮膚肌肉損傷程度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)實(shí)驗(yàn)組大鼠進(jìn)行分級(jí)，分別是輕度損傷、中度損傷、重度損傷，分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)為：輕度損傷，鱗狀上皮細(xì)胞變薄，表皮與真皮連接疏松，真皮輕度膠原變性，毛細(xì)血管擴(kuò)張，少量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)，橫紋肌肌束疏松；中度損傷 鱗狀上皮部分核固縮，表皮與真皮部分分離，真皮膠原纖維變性，炎細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，脂肪細(xì)胞游離，毛細(xì)血管擴(kuò)張充血，橫紋肌水腫、間隙增寬；重度損傷，鱗狀上皮脫屑，表皮與真皮分離，真皮膠原纖維溶解，細(xì)胞核碎裂，脂肪細(xì)胞溶解，毛細(xì)血管淤血，橫紋肌退行性變，橫紋模糊不清。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。4組指標(biāo)表達(dá)量組間差異比較采用單因素方差分析，方差齊性檢驗(yàn)用Levene檢驗(yàn)，方差齊者采用LSD法，方差不齊者采用Games-Howell法。4組皮膚肌肉組織病理切片嚴(yán)重程度比較采用多個(gè)樣本比較的秩和檢驗(yàn)Kruskal-Wallis。皮膚組織損傷級(jí)別與三大指標(biāo)相關(guān)性分析用Spearman秩相關(guān)，以P＜0.05表示統(tǒng)計(jì)學(xué)有差異。

2 結(jié)果

2.1 大鼠受壓皮膚肉眼觀察結(jié)果 空白組大鼠皮膚完整，皮膚顏色與實(shí)驗(yàn)前比較無明顯差別；2個(gè)缺血再灌注循環(huán)組受壓局部開始發(fā)紅，但放松一段時(shí)間后可恢復(fù)，即非持續(xù)性發(fā)紅；3個(gè)缺血再灌注循環(huán)組受壓局部出現(xiàn)持續(xù)非蒼白性發(fā)紅現(xiàn)象；4個(gè)缺血再灌注循環(huán)組受壓局部持續(xù)非蒼白性發(fā)紅現(xiàn)象加重，部分大鼠局部可見到持續(xù)非蒼白性紫紅現(xiàn)象。

2.2 大鼠皮膚和肌肉病理切片光鏡觀察結(jié)果 正常大鼠和實(shí)驗(yàn)組大鼠的皮膚和肌肉光鏡觀察結(jié)果，見圖1-4。

圖2 SD大鼠正常肌肉（10倍鏡）

圖3 SD大鼠重度損傷皮膚（10倍鏡）

圖4 SD大鼠重度損傷肌肉（10倍鏡）

光鏡觀察結(jié)果顯示，正常組大鼠皮膚上皮組織為復(fù)層鱗狀上皮，結(jié)構(gòu)清晰，真皮層內(nèi)附器（如毛囊）較多且清晰可見，鱗狀上皮與表皮連接非常緊密，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)不明顯。肌纖維排列緊密，橫紋肌清晰。而重度損傷組大鼠復(fù)層鱗狀上皮與真皮出現(xiàn)脫屑，上皮結(jié)構(gòu)層次不清晰，皮下組織炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，真皮膠原變性，部分?jǐn)嗔选＜∪饨M織蠟樣變性明顯，橫紋肌模糊，間隙更寬，部分?jǐn)嗔讶芙?。血管瘀滯，血管壁變厚，腫大，肌細(xì)胞核固縮，血管周圍纖維增生明顯。

2.3 4組大鼠不同缺血再灌注循環(huán)次數(shù)下皮膚肌肉損傷程度情況比較見表1

表1 不同循環(huán)次數(shù)大鼠皮膚肌肉損傷程度比較

表1結(jié)果顯示：空白組和2、3、4個(gè)缺血再灌注循環(huán)次數(shù)下的大鼠出現(xiàn)正常、輕度損傷、中度損傷、重度損傷的例數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而且隨著循環(huán)次數(shù)增加，出現(xiàn)中度、重度損傷的大鼠逐漸增多。

2.4 4組大鼠實(shí)驗(yàn)前后超氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素含量比較情況見表2

表2 不同循環(huán)次數(shù)下大鼠超氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素水平變化比較

表2結(jié)果顯示：各組實(shí)驗(yàn)前氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素指標(biāo)的組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；實(shí)驗(yàn)后4組3大指標(biāo)比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；兩兩比較，除了超氧化物歧化酶和丙二醛指標(biāo)中3個(gè)缺血再灌注循環(huán)組與4個(gè)缺血再灌注循環(huán)組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），其余各組實(shí)驗(yàn)前兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

2.5 不同損傷程度大鼠血清超氧化物歧化酶、丙二醛、內(nèi)皮素指標(biāo)水平比較見表3

表3 不同損傷程度大鼠超氧化物歧化酶、丙二醛、內(nèi)皮素指標(biāo)水平比較

表3結(jié)果顯示：不同損傷程度大鼠對(duì)應(yīng)的氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素指標(biāo)含量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），隨著損傷程度加重，超氧化物歧化酶的含量逐漸減少，而丙二醛和內(nèi)皮素的含量逐漸增加。

2.6 不同損傷程度大鼠血清超氧化物歧化酶、丙二醛、內(nèi)皮素指標(biāo)水平的相關(guān)性見表4

表4 氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素的含量變化與大鼠損傷分級(jí)的秩相關(guān)系數(shù)

表4結(jié)果顯示：大鼠皮膚肌肉組織損傷程度與三大指標(biāo)變化采用Spearman秩相關(guān)分析，大鼠皮膚肌肉組織損傷程度與超氧化物歧化酶存在密切負(fù)相關(guān)（r=-0.930，P＜0.01），與丙二醛存在密切正相關(guān)（r=0.924，P＜0.01），與內(nèi)皮素存在密切正相關(guān)（r=0.927，P＜0.01）。

3 討論

3.1 大鼠皮膚肌肉組織損傷與氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素的釋放密切相關(guān)

3.1.1 與超氧化物歧化酶呈負(fù)相關(guān) 超氧化物歧化酶廣泛存在于生物體內(nèi)，是機(jī)體重要的天然抗氧化酶，與細(xì)胞氧化代謝密切相關(guān)，是一種內(nèi)源性氧自由基清除劑，它可以清除超氧陰離子，歧化超氧陰離子生成H2O2，后者則可進(jìn)一步生成H2O，具有防止細(xì)胞和組織受到氧化性損傷的作用。表4結(jié)果顯示，模型損傷嚴(yán)重程度與超氧化物歧化酶呈密切負(fù)相關(guān)（r=-0.930，P＜0.01）， 表明超氧化物歧化酶的含量越低，皮膚肌肉組織損傷越重。經(jīng)研究分析，它含量的改變與組織損傷引起的氧化應(yīng)激有關(guān)，超氧化物歧化酶是機(jī)體的天然保護(hù)酶，氧化應(yīng)激的過程會(huì)大量消耗這種保護(hù)酶，組織一旦缺少保護(hù)酶的作用會(huì)導(dǎo)致?lián)p傷加重。

3.1.2 與丙二醛、內(nèi)皮素呈密切正相關(guān) 丙二醛是氧自由基作用于機(jī)體生物膜多聚不飽和脂肪酸時(shí)發(fā)生脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，它的毒性達(dá)到最大且最具代表性，其產(chǎn)量與氧自由基的量相平衡，氧自由基不僅可以通過生物膜多聚不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化引起細(xì)胞的損傷，而且它還可通過脂質(zhì)過氧化物分解產(chǎn)生的物質(zhì)引起細(xì)胞的損傷。表4結(jié)果顯示，模型損傷程度與丙二醛呈密切正相關(guān)（r=0.924，P＜0.01），表明皮膚肌肉組織損傷程度越重，丙二醛的含量越高，經(jīng)研究推測(cè)它的含量增高與受壓組織細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)過氧化有關(guān)，組織缺血缺氧越嚴(yán)重，脂質(zhì)過氧化分解得越嚴(yán)重，釋放出的丙二醛也越多，丙二醛的含量變化可以從側(cè)面反應(yīng)組織的損傷程度，本實(shí)驗(yàn)恰好印證了這一點(diǎn)。內(nèi)皮素是日本學(xué)者1988年從豬的主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中分離純化的一種由21種氨基酸組成的血管活性多膚，它是現(xiàn)知最強(qiáng)的縮血管物質(zhì)，由血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌和釋放的縮血管物質(zhì)，并常在應(yīng)激情況下升高[6]。組織缺血、缺氧和多種細(xì)胞因子可刺激內(nèi)皮素的表達(dá)和釋放，收縮微小動(dòng)靜脈使微循環(huán)缺血，引起組織臟器功能障礙[7]，在研究中發(fā)生血清中的內(nèi)皮素不斷增高，模型損傷與內(nèi)皮素呈密切正相關(guān)（r=0.927，P＜0.01），光鏡觀察也發(fā)現(xiàn)，隨著循環(huán)次數(shù)的增加，皮下血管出現(xiàn)充血、淤血的情況，經(jīng)研究推測(cè)，這種情況與內(nèi)皮素釋放引起血管收縮痙攣有關(guān)，血管痙攣加重了組織的缺血缺氧，內(nèi)皮素的釋放越多，組織損傷越嚴(yán)重。

3.2 缺血再灌注循環(huán)次數(shù)增加，超氧化物歧化酶含量逐漸遞減，丙二醛和內(nèi)皮素含量逐漸遞增，組織損傷越重 缺血再灌注損傷是組織器官缺血一段時(shí)間后，血液重新灌注沖擊血管，導(dǎo)致組織器官損傷進(jìn)一步加重的現(xiàn)象。表1結(jié)果顯示，隨著循環(huán)次數(shù)增加，2、3、4個(gè)缺血再灌注循環(huán)組出現(xiàn)皮膚損傷大鼠的例數(shù)逐漸增多，且中度、重度大鼠所占的比例逐漸增大，與空白組比較（P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)合病理切片圖1-4結(jié)果的觀察，圖1、2為正常大鼠的皮膚和肌肉病理切片，皮膚上皮組織為復(fù)層鱗狀上皮，結(jié)構(gòu)清晰，真皮層內(nèi)附器（如毛囊）較多且清晰可見，鱗狀上皮與表皮連接非常緊密，肌纖維排列緊密，橫紋肌清晰。而隨著時(shí)間和循環(huán)次數(shù)的增加，損傷逐漸波及到肌肉組織，圖3、4結(jié)果顯示，重度損傷組受壓后皮下組織出現(xiàn)變薄，皮下血管充血、淤血，真皮膠原變性、溶解，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，脂肪細(xì)胞變性，肌肉組織橫紋肌水腫，蠟樣變性甚至溶解等病理改變，結(jié)果表明壓瘡的發(fā)生以及皮膚肌肉的損傷程度與缺血再灌注的循環(huán)次數(shù)有關(guān)，次數(shù)越多，組織病理改變?cè)街亍Ｑh(huán)次數(shù)越多，皮膚肌肉組織受壓時(shí)間越長(zhǎng)，引起組織缺血缺氧誘發(fā)組織氧化應(yīng)激反應(yīng)的時(shí)間越久，超氧化物歧化酶由于要不斷歧化氧化應(yīng)激反應(yīng)釋放的超氧陰離子而被大量消耗，表2結(jié)果也印證了這一點(diǎn)，空白組、2、3、4個(gè)缺血再灌注循環(huán)組超氧化物歧化酶的含量呈現(xiàn)遞減的趨勢(shì)，空白組超氧化物歧化酶含量高于后面幾組，組間比較（F=9.241，P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；丙二醛是脂質(zhì)過氧化分解的產(chǎn)物之一，缺血再灌注損傷導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化分解加重，釋放出的丙二醛增多，后3組丙二醛的含量均高于空白組，組間比較（F=13.102，P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此丙二醛在缺血再灌注循環(huán)的過程中呈現(xiàn)逐漸遞增的趨勢(shì)；由于缺血再灌注引起組織缺血缺氧，組織受刺激引起的內(nèi)皮素釋放增加，2、3、4個(gè)缺血再灌注循環(huán)的內(nèi)皮素含量均高于空白組，組間比較（F=34.291，P＜0.01），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此內(nèi)皮素在缺血再灌注循環(huán)中同樣呈現(xiàn)了逐漸遞增的趨勢(shì)。結(jié)果表明，缺血再灌注循環(huán)次數(shù)與組織損傷關(guān)系密切，它通過反復(fù)循環(huán)誘發(fā)組織發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng)，大量消耗超氧化物歧化酶，增加有害物質(zhì)丙二醛和內(nèi)皮素的含量而加重組織損傷。

3.3 大鼠壓瘡模型對(duì)臨床的指導(dǎo)意義 國(guó)內(nèi)的壓瘡研究仍以臨床研究居多，絕大多數(shù)護(hù)士習(xí)慣采用經(jīng)驗(yàn)法以及傳統(tǒng)觀念去指導(dǎo)實(shí)踐，對(duì)壓瘡機(jī)制的認(rèn)識(shí)存在諸多不足。目前壓瘡的評(píng)估多采用肉眼及量表去評(píng)估判斷，肉眼的主觀性和量表的局限性會(huì)讓部分皮膚因?yàn)闊o法準(zhǔn)確評(píng)估和預(yù)測(cè)最終導(dǎo)致壓瘡發(fā)生，因此如何能更科學(xué)準(zhǔn)確的評(píng)估和預(yù)防壓瘡是護(hù)理研究的重點(diǎn)。本研究從基礎(chǔ)研究出發(fā)，參照文獻(xiàn)動(dòng)物壓瘡模型的制作方法使用壓力裝置在大鼠身上建立壓瘡模型，研究壓瘡發(fā)生的原因，組織的病理改變，以及壓瘡發(fā)生過程中生化指標(biāo)的變化，從細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)、分子水平等方面探討皮膚損傷機(jī)制。本研究通過病理切片觀察發(fā)現(xiàn)，肉眼觀察到的皮膚損傷遠(yuǎn)遠(yuǎn)不及光鏡下觀察到皮下組織的損傷程度重，在壓瘡的早期雖然皮膚表面雖觀察不到明顯的變化，但皮下組織已經(jīng)發(fā)生了一系列病理改變，如鱗狀上皮結(jié)構(gòu)變薄、表皮和真皮剝離、真皮膠原纖維變性、橫紋肌充血水腫、間隙增寬等，任其繼續(xù)發(fā)展將會(huì)導(dǎo)致壓瘡發(fā)生，這里反映了肉眼觀察判斷的主觀性和滯后性。臨床往往間隔2 h給患者翻身1次，在本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠即便是在同一時(shí)間、同一缺血再灌注循環(huán)次數(shù)下也會(huì)出現(xiàn)不同的損傷結(jié)果，說明每只大鼠的皮膚耐受性是存在差異的，臨床患者亦是如此，皮下脂肪薄、營(yíng)養(yǎng)不良的長(zhǎng)期臥床患者亦應(yīng)該勤觀察、多翻身，而且應(yīng)根據(jù)患者自身的身體條件制定相應(yīng)的翻身時(shí)間和次數(shù)，切忌千篇一律。本研究探討了超氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素在大鼠壓瘡模型中的變化及作用機(jī)制，通過秩相關(guān)分析了3個(gè)指標(biāo)與皮膚損程度的相關(guān)性，證實(shí)了它們與皮膚損傷存在密切關(guān)系，給臨床的啟示是，對(duì)于壓瘡評(píng)估，不應(yīng)局限于用肉眼和量表評(píng)估，可以從生化指標(biāo)的檢測(cè)入手，尋找出與壓瘡發(fā)生相關(guān)性高的指標(biāo)，根據(jù)指標(biāo)的變化綜合評(píng)估預(yù)測(cè)壓瘡發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)，從而使壓瘡的評(píng)估和預(yù)防更加科學(xué)客觀。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)使用壓力裝置建立壓瘡動(dòng)物模型，通過病理切片去觀察了解受壓皮膚肌肉組織損傷發(fā)生的嚴(yán)重程度，結(jié)合試劑檢測(cè)從微觀分子水平去比對(duì)超氧化物歧化酶、丙二醛和內(nèi)皮素含量變化與組織損傷的關(guān)系，證實(shí)了超氧化物歧化酶含量的下降，丙二醛和內(nèi)皮素含量增加是組織損傷加重的影響因素之一，它們的變化趨勢(shì)在一定程度上對(duì)壓瘡的發(fā)生起到提示作用。由于實(shí)驗(yàn)檢測(cè)指標(biāo)的限制，無法了解其他生化指標(biāo)是否也與壓瘡發(fā)生密切相關(guān)，本課題在日后的研究中會(huì)增添臨床常用的檢測(cè)指標(biāo)，分析它們與壓瘡的相關(guān)性，使其更具有臨床借鑒性。此外，實(shí)驗(yàn)大鼠仍與臨床患者體質(zhì)存在一定差異，三大指標(biāo)是否同樣能夠反映臨床患者壓瘡發(fā)生趨勢(shì)仍需進(jìn)一步研究。

[1]徐 玲,蔣琪霞.我國(guó)12所醫(yī)院壓瘡現(xiàn)患率和醫(yī)院內(nèi)獲得性壓瘡發(fā)生率調(diào)研[J].護(hù)理學(xué)報(bào),2012,19(9):9-13.DOI：10.16460/j.issn1008-9969.2012.09.009.

[2]陳 萍,徐 軍,馮 春.頭面部醫(yī)療器械相關(guān)性壓瘡預(yù)防的目標(biāo)管理[J].護(hù)理學(xué)報(bào),2016,23(23):21-23.DOI：10.16460/j.issn1008-9969.2016.23.021.

[3]陳明慧,陳秋蓮,宋丹丹,等.集束化護(hù)理在降低難免壓瘡患者壓瘡發(fā)生率中的應(yīng)用[J].護(hù)理學(xué)報(bào),2014,21(10):43-44.DOI：10.16460/j.issn1008-9969.2014.10.013.

[4]蔣琪霞.壓瘡護(hù)理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2015：5-26.

[5]姜麗萍,蔡福滿,楊曄琴,等.局部皮膚持續(xù)受壓致壓瘡的實(shí)驗(yàn)研究[J].解放軍護(hù)理雜志,2007,24(12):4-5.DOI：10.3969/j.issn.1008-9993.2007.12.002.

[6]林 杰,曾 仲.缺血后處理對(duì)肝臟缺血再灌注的保護(hù)機(jī)制研究進(jìn)展[J].世界華人消化雜志,2010,18(17):1799-1803.DOI：10.3969/j.issn.1009-3079.2010.17.010.

[7]張?jiān)谄?梁 仁,黃 韜,等.急性有機(jī)磷農(nóng)藥中毒血管活性物質(zhì)及炎性介質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化及其臨床意義[J].中國(guó)危重病急救醫(yī)學(xué),2003,15(12):762-763.DOI：10.3760/j.issn:1003-0603.2003.12.016.

[本文編輯:方玉桂]

Expression and Role of Superoxide Dismutase,Malondialdehyde and Endothelin in Rat Model of Pressure Ulcer Injury

LAN Yuan-song,GAO Wen,LIAO Hai-tao,YANG Li-hui,WEI Yi-ping
(School of Nursing,Guangxi Medical University,Nanning,530021,China)

ObjectiveTo detect the levels of superoxide dismutase,malondialdehyde and endothelin in the blood of rats,and study the correlation between them and the injury of pressure ulcer model,to provide early prediction index for the occurrence of clinical pressure sores.MethodsForty SD rats were randomly divided into four groups:blank group,ischemia reperfusion group 2,3,4,with 10 rats in each group.The model of pressure ulcer was established by applying and removing the pressure device;ELISA reagent was used to detect superoxide dismutase,malondialdehyde and endothelium in the blood;in accordance with the light microscope of skin and muscle injury grade,then rats were divided into normal ones,with mild injury,moderate injury and severe injury respectively.The relationship of superoxide dismutase,malondialdehyde and endothelin with the degree of the pressure ulcer damage model was analyzed.ResultsAs pressure ulcer model ischemia reperfusion cycles increased,rat skin and muscle tissue damage were more serious and the injury degree in ischemia reperfusion groups was more serious than that in blank group.The difference was statistically significant(P＜0.01).When the damage degree increased,the content of superoxide dismutase decreased but that of malondialdehyde and endothelium increased.The content of superoxide dismutase in mild,moderate and severe injury group was lower than that in blank group,but the content of malondialdehyde and endothelium was higher than that in blank group and intergroup comparison indicated statistical significance (P＜0.01);The severity of injury was negatively correlated with superoxide dismutase(r=-0.930,P＜0.01),positively with malondialdehyde(r=0.924,P＜0.01),and endothelium(r=0.927,P＜0.01).ConclusionThe decrease of superoxide dismutase content and the increase of malondialdehyde and endothelium content are the influencing factor of tissue injury.The evaluation of early stage of pressure ulcer with biochemical indexes detection will be more predictable.

ischemia reperfusion;pressure ulcer model;superoxide dismutase;malondialdehyde;endothelia

R47

A

10.16460/j.issn1008-9969.2017.09.001

2016-11-15

廣西教育廳廣西高?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（KY2015 YB072）；廣西教育廳研究生創(chuàng)新項(xiàng)目（YCSZ2015123）

蘭園淞（1987-），男，廣西來賓人，本科學(xué)歷，碩士研究生在讀。

廖海濤（1959-），男，廣西南寧人，本科學(xué)歷，碩士研究生導(dǎo)師。