劉德文 劉秀波 馬 偉**仲偉利湛鑫琳

黑龍江省道地藥材北芪甘草湯劑治療糖尿病療效研究*

劉德文1劉秀波2馬 偉2**仲偉利1湛鑫琳1

（1.大興安嶺農(nóng)林科學(xué)院，加格達奇 165000；2.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱 150040）

采用鏈脲佐菌素（STZ）誘發(fā)形成的糖尿病大鼠為研究對象，觀察低、中、高劑量的北芪湯劑對糖尿病大鼠體重、空腹血糖濃度、糖化血紅蛋白含量的影響。結(jié)果表明，模型組大鼠的血糖及糖化血紅蛋白數(shù)值基本保持穩(wěn)定，同時出現(xiàn)“三多一少”的特征。北芪湯劑各組與模型組對比，高劑量組的北芪湯劑能夠顯著降低大鼠空腹血糖和糖化血紅蛋白水平，表明北芪湯劑對糖尿病大鼠有很好的治療效果。

STZ；北芪；湯劑；糖尿病

中藥材北芪是植物膜莢黃芪（Astragalus membranaceus）的干燥根，為黑龍江省林下野生道地藥材，屬于正品黃芪中的佳品。中藥黃芪性溫、味甘，具有補氣固表、利尿脫毒、斂瘡生肌等功效[1]。甘草性味甘平，具有補脾益氣、清熱解毒、調(diào)和諸藥等功效[2]。糖尿病是胰島素分泌不足，慢性高血糖為主要特征的代謝性異質(zhì)性疾病[3]。本實驗以鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)形成的糖尿病大鼠為研究對象，驗證以北芪及甘草為主要原料的北芪甘草湯劑（簡稱北芪湯劑）對糖尿病的療效。

1 實驗材料與儀器

1.1 實驗動物

取黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)GLP中心的有動物許可證、清潔級雄性大鼠80只，體重在180～220 g之間，鼠齡在6～8周之間。實驗鼠飼養(yǎng)于清潔級實驗室，清潔級實驗室溫度控制在22～24℃，濕度控制在45%～55%，每天光照時間為12 h。實驗鼠按每籠10只分開飼養(yǎng)，不限制實驗鼠的飲水與覓食。

1.2 實驗試劑

鹽酸二甲雙胍片（北京京豐制藥集團有限公司），STZ（美國 Sigma公司），北芪飲片（課題組在大興安嶺地區(qū)采集制片），甘草飲片（哈爾濱世一堂制藥廠）。

1.3 實驗儀器

-80℃超低溫冰箱（Thermo），pH 計（上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司），羅全康血糖儀（德國羅氏診斷有限公司），漩渦混勻器（德國IKA），酶標(biāo)儀（美國伯騰儀器有限公司），電熱恒溫水浴鍋HWS-26（上海一恒科學(xué)儀器有限公司）。

2 實驗方法

2.1 試劑配制及中藥炮制

炮制方法 取北芪飲片600g和甘草飲片100g混合倒入2 L蒸餾水溶液中浸泡2 h，煎煮1 h后用紗布過濾。將藥渣再次倒入2 L蒸餾水中，煎煮0.5 h后用紗布過濾。將2次煎煮液混合在一起，加熱濃縮成生藥濃度為1 g/mL的水煎液。將水煎液盛于棕色瓶中，密封儲存于4℃冰箱中備用。每周炮制1次。

檸檬酸-檸檬酸鈉（pH=4.5）緩沖液的配制將2.1 g檸檬酸和2.94 g檸檬酸鈉分別溶于100 mL蒸餾水中配制成檸檬酸溶液和檸檬酸鈉溶液，分別抽取28 mL檸檬酸溶液和22 mL檸檬酸鈉溶液置于同一容器中，并用蒸餾水定容至100 mL，調(diào)節(jié)pH值至4.5即可。

鏈脲佐菌素溶液的配置 按1 mL檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液溶解30 mg STZ的比例配置STZ溶液，然后用過濾器過濾除雜。

20%烏拉坦的配制 將20 g烏來糖溶解于100 mL蒸餾水中即可。

2.2 糖尿病大鼠模型的構(gòu)建

本實驗采用STZ腹腔注射的方法復(fù)制糖尿病大鼠模型。取雄性大鼠80只，普通飼養(yǎng)1周后，隨機選取10只繼續(xù)進行普通飼養(yǎng)，并做為空白對照組。將余下的70只大鼠用實驗室自配的高糖高脂肪的飼料喂養(yǎng)3周，然后禁食12 h，之后以40 mg/kg劑量腹腔快速注射冰浴后的STZ溶液；空白對照組按相同劑量腹腔注射檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。末次注射給藥72 h后，所有實驗鼠禁食12 h，之后檢測血糖，血糖高于16.7 mmol/L的實驗鼠即為造模成功，共獲得糖尿病模型鼠62只。

2.3 實驗分組及干預(yù)方法

選取造模成功大鼠中的50只，并隨機分成模型對照組、二甲雙胍組、北芪湯劑（高、中、低劑量，即生藥 12.60、6.30、3.15 g/kg）組 5組，每組 10只。空白對照組、模型對照組：造模成功后第7天開始給予生理鹽水10 mL/(kg·d)。二甲雙胍組：每天給藥一次，劑量為0.17 g/kg。北芪湯劑（高、中、低劑量）組：造模成功后第7天，按照鼠-人折算劑量分別以不同藥物灌胃，1次/d；給藥量=人體給藥量×0.018×5作為低劑量，低劑量×2為中劑量，低劑量×4為高劑量。每周對實驗鼠稱重1次，并根據(jù)實驗鼠的體重確定灌胃給藥劑量，給藥4周。

2.4 血液的采集與處理

末次給藥后禁食12 h，用20%烏拉坦溶液對大鼠進行腹腔注射麻醉，麻醉后每只取頸總動脈血2份，1份非抗凝全血，1份抗凝全血。非抗凝全血以3 000 r/min離心15 min，分離得到的血清分裝入冷凍管中，保存于-80℃冰箱中待測。

2.5 體重指標(biāo)檢測

每周定期對實驗大鼠體重進行一次測量。

2.6 空腹血糖（FPG）測定

采用尾靜脈取血法，用羅全康血糖儀對大鼠空腹血糖進行定期檢測。

2.7 糖化血紅蛋白（GHbAl）測定

取抗凝全血4mL，以1000r/min離心5min，棄上清保留紅細(xì)胞，用生理鹽水按上述方法洗滌3次。按試劑盒操作說明測定GHbAl，結(jié)果以10 g血紅蛋白的吸光度（OD值）表示。

2.8 統(tǒng)計分析

采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件，計量資料采用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用方差分析和兩樣本均數(shù)比較的t檢驗。多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析（One-Way ANOVA），組間均數(shù)兩兩比較，結(jié)果以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 實驗結(jié)果與分析

3.1 北芪湯劑對糖尿病大鼠體重的影響

實驗結(jié)果（表1）表明，給藥前各組大鼠的體重?zé)o顯著差異（P＞0.05）。給藥后與給藥前相比，各組大鼠體重均有所增加。與模型對照組相比，二甲雙胍組與北芪湯劑高劑量組有顯著差異，而模型對照組與北芪湯劑中劑量、低劑量組之間無顯著差異。

表1 北芪湯劑對糖尿病大鼠體重的影響（g，x±s）

3.2 北芪湯劑對糖尿病大鼠空腹血糖的影響

實驗結(jié)果（表2）表明，與空白對照組相比，模型對照組大鼠血糖顯著性升高（P＜0.01），表明造模成功。連續(xù)給藥4周后，與模型對照組比較，二甲雙胍組和北芪湯劑（高、中、低劑量）組血糖水平顯著降低（P＜0.01），北芪湯劑降糖效果與劑量呈正相關(guān)。

3.3 北芪湯劑對糖尿病大鼠糖化血紅蛋白的影響

給藥4周后，與空白對照組比較，模型對照組大鼠糖化血紅蛋白含量顯著升高（P＜0.01）。與模型對照組比較，北芪湯劑高劑量組與二甲雙胍組大鼠糖化血紅蛋白明顯降低，具有極顯著性差異（P＜0.01）；北芪湯劑中劑量組大鼠糖化血紅蛋白有顯著性差異（P＜0.05）；北芪湯劑低劑量組大鼠糖化血紅蛋白無顯著性差異（P＞0.05）（表 3）。

表2 北芪湯劑對糖尿病大鼠空腹血糖（FPG）的影響（mmol/L,x± s）

表3 北芪湯劑對糖尿病大鼠糖化血紅蛋白（GHbAl）的影響（x ± s）

4 結(jié)果與討論

4.1 北芪湯劑對糖尿病大鼠有很好的治療效果。在大鼠的體重變化實驗中，高劑量組的北芪湯劑對大鼠的體重具有顯著的增加效果；在大鼠的空腹血糖測定實驗中，北芪湯劑高、中、低劑量組對其血糖濃度降低均具有顯著效果，且降糖效果與北芪湯劑的濃度呈正相關(guān)；在大鼠糖化血紅蛋白測定實驗中，高劑量組與中劑量組對大鼠的糖化血紅蛋白降低具有極顯著與顯著的效果。

4.2 目前，全球糖尿病患病率正急劇增加，已成為影響人類身體健康的主要慢性疾病之一[6]。本實驗中，北芪湯劑由北黃芪與甘草組成，黃芪歸肺、脾經(jīng)，補氣升陽、固表止汗、生津養(yǎng)血為君藥[7]；甘草歸心、肺、脾、胃經(jīng)，補脾益氣、清熱解毒為臣藥[8]；兩藥相須配成藥對，共奏補氣生津、清熱解毒之功效。模型組大鼠出現(xiàn)高血糖和高糖化血紅蛋白的生化指標(biāo)特征，通過觀察發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)多飲、多食、體重減輕的“三多一少”的臨床癥狀，符合糖尿病的特征，說明本實驗?zāi)Ｐ蜆?gòu)建成功。通過實驗證實，與模型對照組相比，北芪湯劑高劑量組有顯著差異，北芪湯劑中劑量、低劑量組無顯著差異。北芪湯劑顯著降低糖尿病大鼠空腹血糖并且降糖效果與劑量呈正相關(guān)性。北芪湯劑高劑量組和中劑量組與模型對照組相比，在影響糖尿病大鼠糖化血紅蛋白濃度指標(biāo)上呈現(xiàn)極顯著性差異和顯著性差異，表明北芪湯劑能降低糖尿病大鼠的糖化血紅蛋白。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(2005版一部)［S］.北京∶化學(xué)工業(yè)出版社,2005.

［2］ 張劍峰,張丹參.甘草酸藥理作用的研究進展［J］.神經(jīng)藥理學(xué)報,2005,22(4)∶81-82.

［3］ 李丙蓉,鄧華聰.Ⅱ型糖尿病的病理生理機制［J］.醫(yī)學(xué)新知雜志,2004,14(2)∶73-75.

［4］ 林斐.糖尿病病人心理障礙及護理［J］.黑龍江中醫(yī)藥,2003(3)∶43-44.

［5］ 陳曉麗,計仁軍.糖尿病病因與發(fā)病機理［J］.中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2008,2(24)∶189-190.

［6］ 王剛.糖尿病并發(fā)癥的藥物治療［J］.社區(qū)醫(yī)學(xué)雜志,2005,3(4)∶35-35.

［7］ 和種翼,姜圓圓.黃芪藥理作用的研究進展［J］.獸藥市場指南,2008(6)∶13-13.

［8］ 李敬孝,趙得良.淺談《金匱要略》中甘草的用法與配伍［J］.當(dāng)代醫(yī)藥論叢,2012,10(6)∶86-86.

Basic Study on Treatment of Diabetes With Heilongjiang Province Geoherba Astragalus membranaceus Decoction

LIUDewen
（Agricultural and Forestry Research Institute of Daxing′anling,Jiagedaqi165000）

The experiment effect of Streptozotocin (STZ)induced the formation of rats with diabetes mellitus study,observation of low,medium,high doses of Astragalus and Licorice decotion therapy on rats with diabetes mellitus body weight,effects of fasting plasma glucose and glycosylated hemoglobin.Result∶the model rats of blood glucose and glycosylated hemoglobin levels remained stable,while"more than more than three one less"feature.Grouped by decoction of Astragalus and Licorice decotion theraoy and model group,high-dose Astragalus and Licorice decotion theraoy in rats can significantly reduce fasting blood glucose and glycosylated hemoglobin levels.Conclusions∶In this experiment successful form of diabetes model induced by STZ.Astragalus and Licorice decotion theraoy for the treatment of diabetic rats have a good effect.

STZ;Astragalus membranaceus;Decotion;diabetes

S567.7+1,S567.5+3

A

1001-9499（2017） 06-0040-04

* 黑龍江省自然科學(xué)基金項目(H201474)；黑龍江省博士后基金項目(BSH201301)；黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)“優(yōu)秀創(chuàng)新人才支持計劃”青年項目(2012001)

第1作者簡介：劉德文（1968-），女，高級工程師，研究方向：植物組織培養(yǎng)、中草藥應(yīng)用。

馬偉（1969-），女，研究員，博士生導(dǎo)師，研究方向：藥用植物生物工程。

2017-09-12

（責(zé)任編輯：王 岳）