熊巍林，包李林，鄒燕娣，金 瑚，李敏利，張謙益，萬(wàn) 聰(道道全糧油股份有限公司 國(guó)家油菜籽加工技術(shù)研發(fā)分中心，湖南 岳陽(yáng) 414000)

固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定植物油中的TBHQ含量

熊巍林，包李林，鄒燕娣，金 瑚，李敏利，張謙益，萬(wàn) 聰
(道道全糧油股份有限公司 國(guó)家油菜籽加工技術(shù)研發(fā)分中心，湖南 岳陽(yáng) 414000)

建立了植物油中TBHQ的中性氧化鋁固相萃取-高效液相色譜分析法。分別用TBHQ標(biāo)準(zhǔn)溶液10、25 μg/mL和50 μg/mL進(jìn)行加標(biāo)回收率和精密度試驗(yàn)。結(jié)果表明：加標(biāo)回收率在100.0%～103.0%之間，RSD為2.0%～6.0%，說(shuō)明該方法具有良好的可靠性和重現(xiàn)性。研究表明，該方法操作簡(jiǎn)便，油脂凈化完全，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

植物油；TBHQ；中性氧化鋁；HPLC

油脂的氧化和酸敗直接影響油脂的質(zhì)量，尤其是含不飽和脂肪酸較多的植物油更容易發(fā)生氧化變質(zhì)，危害人體健康[1-5]。為了防止油脂氧化變質(zhì)，一般會(huì)向其加入抗氧化劑。目前常用的抗氧化劑主要有丁基羥基茴香醚(BHA)、二丁基羥基甲苯(BHT)、特丁基對(duì)苯二酚(TBHQ)、沒(méi)食子酸(PG)等，其中TBHQ的抗氧化性能是BHA、BHT、PG的2～5 倍，且因其熱穩(wěn)定性好、低毒、具有抑制細(xì)菌和霉菌作用、遇金屬離子不著色等諸多優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用在食用植物油中[6-7]。但是攝入過(guò)多TBHQ會(huì)危害人體健康。我國(guó)《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》(GB 2760—2007)規(guī)定TBHQ使用最大量為200 mg/kg[8]，因而植物油中的TBHQ含量成為了食品安全檢測(cè)的重要指標(biāo)之一。目前高效液相色譜因靈敏度高、重現(xiàn)性好、結(jié)果準(zhǔn)確可靠等優(yōu)點(diǎn)成為測(cè)定TBHQ含量的首選方法[9-15]。

高效液相色譜的前處理主要采用溶劑萃取法，但是溶劑會(huì)將油脂帶入萃取的樣品中，污染色譜柱，縮短色譜柱的使用壽命，甚至?xí)廴緝x器的流路系統(tǒng)。本文采用中性氧化鋁固相萃取法，將油脂凈化完全，再通過(guò)高效液相色譜測(cè)定植物油中的TBHQ含量，旨在建立一種更為科學(xué)和準(zhǔn)確地測(cè)定植物油中TBHQ含量的方法。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 原料與試劑

中性氧化鋁(100～200目)；TBHQ標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥99%)；甲醇，色譜純；無(wú)水硫酸鈉、乙酸、正己烷，分析純；超純水；一級(jí)葵花籽油(TBHQ含量120 mg/kg)；不含TBHQ的四級(jí)菜籽油。

1.1.2 儀器與設(shè)備

安捷倫1260型高效液相色譜儀(配紫外檢測(cè)器)；RE-201型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；HGC-12A型氮吹儀；玻璃層析柱(d=1.2 cm，l=47 cm，帶砂芯配旋塞)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 HPLC分析條件

Nova-pakC18柱(3.9 mm×150 mm，5 μm)；流動(dòng)相甲醇-水(體積比98∶2)；流速0.8 mL/min；柱溫30℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm；進(jìn)樣量10 μL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制和儀器檢出限

稱取100 mg TBHQ標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至100 mL，配制1 mg/mL標(biāo)樣儲(chǔ)備液。取一定量的標(biāo)樣儲(chǔ)備液用甲醇分別稀釋配制10、50、100、150、200、250 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)使用液，進(jìn)行高效液相色譜分析。以標(biāo)準(zhǔn)使用液的質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積(Y)為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。其線性關(guān)系為Y=20.214 5C+13.96，R2=0.997 9。以儀器的S/N=3計(jì)算，測(cè)得儀器最低檢出限為1 mg/kg。

1.2.3 樣品的處理

V級(jí)氧化鋁的制備：90 g中性氧化鋁置于馬弗爐中450℃煅燒12 h，冷卻至室溫，加入15 mL超純水，充分搖勻，黑暗處放置12 h以上備用。

樣品處理：向?qū)游鲋醒b入適量的正己烷，快速裝入1.0 g V級(jí)氧化鋁，加入適量無(wú)水硫酸鈉，裝填過(guò)程中避免產(chǎn)生氣泡。當(dāng)正己烷流出至無(wú)水硫酸鈉頂端1 mm處時(shí)，關(guān)閉旋塞。稱取0.5 g(精確至0.000 1 g)的油樣，上樣，用兩次共20 mL正己烷清洗燒杯使轉(zhuǎn)移徹底，加入20～30 mL甲醇將油脂完全洗脫下來(lái)，再加入10 mL甲醇-冰醋酸-水混合液(體積比5∶3∶2)，流速10滴/10 s，開(kāi)始收集洗脫液，旋蒸濃縮至剩余0.5～1.0 mL，弱氮?dú)饬鞔蹈?，加甲醇定容? mL，過(guò)0.45 μm有機(jī)濾膜，待HPLC測(cè)定。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理

試驗(yàn)表明：氧化鋁的用量和級(jí)別直接影響目標(biāo)物的吸附和洗脫。當(dāng)采用吸附性能最弱的V級(jí)氧化鋁1 g作為吸附劑時(shí)，甲醇淋洗油脂更容易更完全；使用甲醇-冰醋酸-水混合液洗脫目標(biāo)物時(shí)，當(dāng)固定混合液10 mL，冰醋酸3 mL時(shí)，加水量直接影響目標(biāo)物能否洗脫下來(lái)。試驗(yàn)證明，當(dāng)加入大于等于2 mL水時(shí)，目標(biāo)物能被完全洗脫出來(lái)，但加水量較大，不但影響滴速，更多雜質(zhì)也被洗脫下來(lái)。因此，加入2 mL水為宜。

2.2 樣品分離(見(jiàn)圖1)

圖1 樣品中TBHQ的HPLC譜圖

從圖1可以看出，樣品中的TBHQ與雜質(zhì)能較好地分開(kāi)，雜質(zhì)峰不干擾測(cè)定。TBHQ的保留時(shí)間為8.054 min。將同一樣品在同一天內(nèi)重復(fù)測(cè)定6次并取平均值計(jì)算儀器的精密度，測(cè)得變異系數(shù)為3.2%，說(shuō)明儀器精密度良好。

2.3 方法的回收率和精密度

以不含TBHQ的四級(jí)菜籽油為本底，分別加入低(10 μg/mL)、中(25 μg/mL)、高(50 μg/mL)3個(gè)水平的TBHQ標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0 mL，每個(gè)加標(biāo)樣水平進(jìn)行3次平行測(cè)定，計(jì)算3個(gè)水平的回收率和RSD。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 方法的回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果

由表1可知，方法的回收率在100.0%～103.0%之間，RSD為2.0%～6.0%，說(shuō)明該方法具有良好的可靠性和重現(xiàn)性。

3 結(jié) 論

采用固相萃取-高效液相色譜法測(cè)定植物油中TBHQ含量，方法的回收率在100.0%～103.0%之間，RSD為2.0%～6.0%。該方法操作簡(jiǎn)便，靈敏度高，耗時(shí)短，準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性好，對(duì)油脂凈化完全，避免了油脂污染儀器系統(tǒng)，是測(cè)定植物油中TBHQ含量的有效方法，適用于實(shí)驗(yàn)室的日常檢測(cè)。

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DeterminationofTBHQcontentinvegetableoilbysolidphaseextraction-highperformanceliquidchromatography

XIONG Weilin，BAO Lilin，ZOU Yandi，JIN Hu，LI Minli，ZHANG Qianyi，WAN Cong
(National R amp; D Center for Rapeseed Processing, Daodaoquan Grain amp; Oil Shares Co., Ltd., Yueyang 414000，Hunan，China)

A neutral alumina solid phase extraction-high performance liquid chromatography method was established for the analysis of TBHQ in vegetable oil. The standard recovery experiment and precision experiment were conducted using 10, 25 μg/mL and 50 μg/mL TBHQ standard solutions. The results showed that the recovery rate of standard andRSDwere 100.0%-103.0% and 2.0%-6.0%，respectively, which showed that the method had good reliability and repeatability. The study indicated that the method had the items of simpleness, complete oil purification, and accurate and reliable result.

vegetable oil； TBHQ； neutral alumina； HPLC

2017-02-09

“十三五”國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2016YFD0401401)

熊巍林(1968)，男，高級(jí)工程師，主要從事植物油脂工藝研究和質(zhì)量管理方面的工作(E-mail)2621127917@qq.com。

鄒燕娣，助理工程師，碩士(E-mail)527488691@qq.com。

檢測(cè)分析

TS227;O657.7+2

A

1003-7969(2017)10-0143-03