海南黑毛和牛發(fā)情周期中生殖激素分泌規(guī)律研究

謝有志 ，華蕊 ，劉仙喜 ，楊慧 ，吳科榜

（1.海南省畜牧技術(shù)推廣總站，海南 ?？?570203；2.海南大學(xué)，海南 海口 570228）

海南黑毛和牛發(fā)情周期中生殖激素分泌規(guī)律研究

謝有志1，華蕊2，劉仙喜1，楊慧2，吳科榜2

（1.海南省畜牧技術(shù)推廣總站，海南 海口 570203；2.海南大學(xué)，海南 ?？?570228）

本試驗(yàn)以發(fā)情期、妊娠期、休情期的海南黑毛和牛母牛為試驗(yàn)動(dòng)物，采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA 法）測(cè)定其血清中促卵泡素（FSH）、促黃體素（LH）、雌二醇（E2）、催乳素（PRL）和孕酮（P4）的含量，對(duì)這些生殖激素的分泌規(guī)律進(jìn)行研究。結(jié)果表明：FSH與LH分泌趨勢(shì)基本一致，從發(fā)情期到妊娠期再到休情期呈現(xiàn)逐漸下降趨勢(shì)；E2在進(jìn)入妊娠期后分泌量顯著減少，休情期時(shí)變化不大；PRL在妊娠期的分泌水平顯著高于非妊娠期（P＜0.05）；P4的分泌水平從發(fā)情期到妊娠期顯著上升（P＜0.05），進(jìn)入休情期逐漸下降。

海南黑毛和牛；生殖激素；分泌規(guī)律

海南和牛又稱海南黑毛和牛，是海南省引進(jìn)日本純種和牛胚胎以海南本地黃牛（雷瓊牛）為母體進(jìn)行胚胎移植得到的和牛品種，是優(yōu)良的地方肉牛品種[1]。生殖激素對(duì)海南黑毛和牛的繁殖育種起著重要作用。促卵泡素（FSH）、促黃體生成素（LH）、雌二醇（E2）、催乳素（PRL）、孕酮（P4）等激素之間互相協(xié)調(diào)，影響著生殖細(xì)胞的發(fā)生、發(fā)育、釋放和發(fā)情的周期性變化[2]。本試驗(yàn)以發(fā)情期、妊娠期、休情期的海南黑毛和牛母牛為試驗(yàn)對(duì)象，采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA法）對(duì)其血清中的生殖激素水平進(jìn)行測(cè)定與分析，研究整個(gè)發(fā)情周期中5種生殖激素的分泌規(guī)律。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑 FSH、LH、PRL、E2、P4 5種激素的ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自蘇州卡爾文生物科技有限公司。

1.1.2 主要儀器 離心機(jī)，恒溫培養(yǎng)箱，酶標(biāo)儀。

1.1.3 試驗(yàn)?zāi)概?由海南畜牧技術(shù)推廣總站海南肉牛品種改良示范基地提供，選取體態(tài)健康、發(fā)育良好的海南黑毛和牛30頭，其中處于發(fā)情期、妊娠期、休情期的各10頭。

1.2 方法

1.2.1 血清制備 對(duì)試驗(yàn)?zāi)概＿M(jìn)行頸靜脈采血，將全血樣品靜置2h，期間防止劇烈震動(dòng)以防溶血。待全血凝固并析出血清后，用離心機(jī)5000r/min離心10min，取上清液，標(biāo)記并分裝，置于-20℃冰箱保存待用。

1.2.2 血清中FSH、LH、PRL、E2、P4的測(cè)定 采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）進(jìn)行測(cè)定，具體操作詳見試劑盒說(shuō)明書。根據(jù)酶標(biāo)儀得到休情期、發(fā)情期、妊娠期的 PRL、FSH、LH、E2、P4 所對(duì)應(yīng)的OD450值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。

1.3 數(shù)據(jù)分析 采用SPSS 16.0軟件ANOVA法對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）”表示，組間差異顯著性檢驗(yàn)用Duncan法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

海南黑毛和牛發(fā)情周期中5種不同生殖激素的分泌水平列于表1。

2.1 血清中FSH分泌水平的變化 根據(jù)圖1可知，試驗(yàn)?zāi)概Ｑ逯蠪SH分泌水平在發(fā)情期最高，達(dá)到5.19IU/L；配種成功后進(jìn)入妊娠期，F(xiàn)SH的分泌水平逐漸下降至4.12IU/L，休情期血清中FSH的含量為3.74IU/L。發(fā)情期母牛血清中的FSH分泌水平顯著高于休情期（P＜0.05），妊娠期母牛血清中的FSH含量與休情期、發(fā)情期比較無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

表1 海南黑毛和牛血清中不同生殖激素分泌水平

圖1 血清中FSH分泌水平的變化

2.2 血清中LH分泌水平的變化 由圖2可知，試驗(yàn)?zāi)概Ｕ麄€(gè)發(fā)情周期中LH的分泌水平呈下降趨勢(shì)，發(fā)情期血清中的LH分泌水平最高，為4.71mIU/mL；妊娠期和休情期血清中的LH含量分別為4.53、4.17mIU/mL；三個(gè)時(shí)期兩兩比較，LH分泌水平無(wú)顯著差異（P＞0.05）。

圖2 血清中LH分泌水平的變化

圖3 血清中E2分泌水平的變化

2.3 血清中E2分泌水平的變化 如圖3所示，發(fā)情期血清中E2的分泌水平顯著高于休情期和妊娠期（P＜0.05），達(dá)到 50.21 pg/mL；進(jìn)入妊娠期后 E2含量顯著下降至 41.99 pg/mL（P＜0.05）；休情期母牛血清中E2的含量變化不大，為41.29pg/mL。

圖4 血清中PRL分泌水平的變化

2.4 血清中PRL分泌水平的變化 由圖4可以看出，試驗(yàn)?zāi)概０l(fā)情期血清中的PRL含量為415.70ng/mL；配種成功進(jìn)入妊娠期后，血清中的PRL分泌水平急劇上升至538.30ng/mL，顯著高于休情期和發(fā)情期（P＜0.05）；休情期 PRL含量下降至459.70ng/mL。

2.5 血清中P4分泌水平的變化 根據(jù)圖5可知，發(fā)情期母牛血清中的P4含量最低，進(jìn)入妊娠期后母牛血清中的P4含量從0.28ng/mL顯著升高至9.49ng/mL（P＜0.05）；休情期P4分泌水平下降為5.51ng/mL。

圖5 血清中P4分泌水平的變化

3 討論

3.1 發(fā)情周期中血清FSH和LH分泌水平的變化 促卵泡素（FSH）又叫卵泡刺激素，促黃體素（LH）又叫黃體生成素，二者都是由垂體的嗜堿性細(xì)胞合成并分泌的糖蛋白激素。FSH主要促進(jìn)卵巢發(fā)育、提升卵巢質(zhì)量，促使卵泡顆粒細(xì)胞的增加和卵泡液的產(chǎn)生。LH的主要作用是誘導(dǎo)排卵，促進(jìn)黃體生成。由表1可以看出，母牛血清中的FSH含量從發(fā)情期到妊娠期下降，進(jìn)入休情期后持續(xù)下降。這一趨勢(shì)與李成嬌等[3]的研究結(jié)果一致。但本試驗(yàn)中發(fā)情期母牛血清中的LH含量與休情期、妊娠期的差異不顯著，可能是因?yàn)轱曫B(yǎng)水平和營(yíng)養(yǎng)狀況影響了激素的分泌水平，還有可能是由于卵巢分泌E2和P4對(duì)FSH和LH進(jìn)行負(fù)反饋調(diào)節(jié)造成的。

3.2 發(fā)情周期中血清E2分泌水平的變化 雌激素主要成分為雌二醇，由卵巢的卵泡細(xì)胞分泌。主要功能是促進(jìn)雌性動(dòng)物附性器官成熟及第二性征出現(xiàn)，維持發(fā)情周期的變化和生殖活動(dòng)[4]。本研究中，試驗(yàn)?zāi)概陌l(fā)情期到妊娠期血清中的E2含量顯著下降，進(jìn)入休情期后E2含量變化不大。進(jìn)入妊娠期后，卵巢生理活動(dòng)減少引起雌二醇分泌水平下降。

3.3 發(fā)情周期中血清PRL分泌水平的變化 催乳素是由垂體前葉的催乳細(xì)胞合成分泌的蛋白質(zhì)激素，除此之外，胎盤、淋巴細(xì)胞、皮膚也可分泌少量[5]。主要作用是促進(jìn)乳腺發(fā)育生長(zhǎng)，刺激并維持泌乳，還有刺激卵泡LH受體生成等作用。由表1可看出，海南黑毛和牛妊娠期的PRL濃度顯著高于非妊娠期，與文獻(xiàn)報(bào)道的相符[6]。

3.4 發(fā)情周期中血清P4分泌水平的變化 孕酮主要由黃體、胎盤及腎上腺皮質(zhì)合成并分泌。它有利于受精卵著床還可以協(xié)同催乳素作用于乳腺導(dǎo)管系統(tǒng)，刺激乳腺發(fā)育。本試驗(yàn)中，發(fā)情期母牛血清中的P4含量最低，進(jìn)入妊娠期后母牛血清中的P4含量顯著升高，休情期的P4分泌水平又下降。

4 小結(jié)

本試驗(yàn)探明了海南黑毛和牛發(fā)情周期中生殖激素的分泌規(guī)律：FSH與LH分泌趨勢(shì)基本一致，從發(fā)情期到妊娠期再到休情期呈現(xiàn)持續(xù)下降趨勢(shì)；E2在妊娠期的分泌量顯著減少，休情期時(shí)變化不大；PRL在妊娠期的分泌水平顯著高于非妊娠期；P4的分泌水平從發(fā)情期到妊娠期顯著上升，進(jìn)入休情期逐漸下降。

[1] 劉圈煒，孫瑞萍，魏立民，等.維生素A對(duì)海南和牛抗氧化指標(biāo)及血液生化指標(biāo)的影響[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2012，39（9）：110-113.

[2] 宋先忱，張興會(huì)，趙艷嬌.生殖激素在絨山羊繁殖方面的應(yīng)用[J].黑龍江動(dòng)物繁殖，2011，19（4）：37-39.

[3] 李成嬌，王宏娟，朱曉玲.吉林地方特色肉牛發(fā)情周期內(nèi)生殖激素變化規(guī)律研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010（17）：9018-9020.

[4] 謝炳坤.廣西黃牛和水牛發(fā)情周期血清生殖激素變化規(guī)律的研究[D].南寧：廣西大學(xué)，2005.

[5] 徐文軍.河西絨山羊血清中PRL和T3濃度季節(jié)變化與絨生長(zhǎng)的相關(guān)分析[D].蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[6] 唐金鳳，朱鋐達(dá)，郁忠勤，等.妊娠期雌二醇和催乳素與瘦素的關(guān)系[J].上海第二醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，21（1）：44-46.

Study the Secretion Law of Reproductive Hormones on Hainan Black Wagyu

Xie Youzhi1，Hua Rui2，liu Xianxi2，et al.
（1.Livestock Technology Extension Station of Hainan Province Hainan Haikou 570203；2.Hainan University，Hainan Haikou 570228，China）

In this study，Hainan black wagyu were used as experimental animals which during the estrus，pregnancy and leisure period，and the secretions of follicle-stimulating hormone（FSH），luteinizing hormone（LH），estradiol（E2），prolactin（PRL） and progesterone（P4） were measured by enzyme linked im munosorbent assay（ELISA）.The results showed that the secretions of FSH and LH from estrus to pregnancy and then to the leisure period had a gradual downward trend，their secretion trends were the same basically.E2 decreased significantly after entering the pregnancy period and had a little change during the leisure period（P＜0.05）.The secretion level of PRL during pregnancy was significantly higher than that of nonpregnancy（P＜0.05）.The secretion level of P4 increased significantly from estrus to pregnancy，and gradually decreased during the leisure period（P＜0.05）.

Hainan black wagyu；Reproductive hormones；Secretion law

S814.1

B

1001-8964（2017）12-0032-03

2017-08-10

謝有志（1968-），男，碩士，高級(jí)畜牧師，主要研究海南黑毛和牛的生長(zhǎng)與繁殖。