王立東+聶彥彥

摘 要：目的：本文主要使用了隨機(jī)交叉給藥方法針對(duì)12名男性進(jìn)行調(diào)查。方法：實(shí)驗(yàn)人員選擇試驗(yàn)藥阿莫西林及其克拉維酸鉀干混懸劑的比例為4：1，以及對(duì)照藥阿莫西林和相關(guān)克拉維酸鉀干混懸劑比例也同樣為4：1，精準(zhǔn)量取50Omg的阿莫西林，125mg的克拉維酸鉀，這個(gè)時(shí)候?qū)嶒?yàn)人員通過(guò)人體生物利用度及其藥代動(dòng)力學(xué)進(jìn)行了詳細(xì)的比較。實(shí)驗(yàn)人員使用了HPLC熒光對(duì)這兩種藥品存在的含量進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果：無(wú)論是試驗(yàn)藥還是對(duì)照藥里面阿莫西林的Tmax1.58±0.36和1.56±0.34h；而Cmax13.94±2.20和13.38±2.67mg·L-1；T121.57±0.19和1.53±0.23h；AUC52.28±8.22和50.24±9.44mg·L-1，對(duì)于生物利用度來(lái)說(shuō)，為104.89%±7.73%?？死S酸鉀的Tmax0.96±0.37和1.06±0.50h；Cmax2.13±0.44和2.69±0.99mg·L-1，T121.27±0.19和1.28±0.32h；AUC5.38±0.83和5.66±1.04·h·L-1；相對(duì)生物利用度95.91%±11.21%。結(jié)論：實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)對(duì)AUC及其Cmax通過(guò)方差的形式進(jìn)行分析，就Tmax而言，實(shí)驗(yàn)人員主要使用非參數(shù)法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)的，在這兩種制劑里面，無(wú)論是阿莫西林還是克拉維酸鉀這兩個(gè)小組呈現(xiàn)出的都是生物等效。

關(guān)鍵詞：阿莫西林；克拉維酸；生物等效性

阿莫西林以及相關(guān)的克拉維酸鉀干混懸劑是在比例為4：1的成分下得到的復(fù)方制劑，并且每一包都含有125mg的阿莫西林，31.25mg的克拉維酸鉀。本實(shí)驗(yàn)的主要目標(biāo)是實(shí)驗(yàn)人員將試驗(yàn)藥阿莫西林及其相關(guān)的克拉維酸鉀干混懸劑在4：1的比例下能夠和對(duì)照藥阿莫西林及其相關(guān)的克拉維酸鉀干混懸劑在4：1的比例存在的生物利用度進(jìn)行詳細(xì)的對(duì)比。在以往發(fā)展的過(guò)程中，實(shí)驗(yàn)人員大部分是對(duì)阿莫西林及其相關(guān)的克拉維酸鉀存在的血藥進(jìn)行檢測(cè)的，并利用生物法來(lái)對(duì)阿莫西林及其相關(guān)的克拉維酸鉀分別檢測(cè)的，這樣做會(huì)致使檢測(cè)流程較為復(fù)雜，并且有著較多的工作量，尤其是對(duì)克拉維酸鉀檢測(cè)增加了一定的難度。而依據(jù)國(guó)內(nèi)國(guó)外文獻(xiàn)可以得知，采取HPLC-熒光檢測(cè)法來(lái)對(duì)這兩種物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，然而由于克拉維酸鉀僅僅是在末端紫外吸收，這個(gè)時(shí)候?qū)嶒?yàn)人員需要通過(guò)咪唑生化以后哦再進(jìn)行檢測(cè)，該方法往往會(huì)受到相關(guān)因素帶來(lái)的影響。在本文中第一次嘗試使用HPLC-熒光法對(duì)這兩種藥品的濃度進(jìn)行檢測(cè)，有著顯著的效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑

試驗(yàn)藥品：阿莫西林一克拉維酸鉀（：41）干混懸劑（每包125：31.251119/包），批號(hào)981130。

對(duì)照藥品：阿莫西林一克拉維酸鉀（：41）干混懸劑（每包阿莫西林125mg-克拉維酸31.25mg），批號(hào)981111，（95）衛(wèi)藥準(zhǔn)字X-318號(hào)。

標(biāo)準(zhǔn)品：阿莫西林含量86.2%，批號(hào)0409-9706，由中央衛(wèi)生部藥品檢定所生產(chǎn)?？死S酸鉀含量82.7%。

試劑：甲醇（HPLC純），KH2PO4，K2HPO4，苯甲醛，無(wú)水乙醇均為分析純?cè)噭?。苯甲醛用無(wú)水乙醇配制成2%濃度，混勻后避光保存。

1.2 色譜條件

島津LC-10AHPLC儀，RF-10AxL熒光檢測(cè)器（ex386nm，em460nm），C-R6A積分儀和95色譜工作站。分析柱HypersilBDSC18200×4.6mm，5um，流動(dòng)相為甲醇：水（580：520v/v），流速1ml·min-1。

1.3 受試者給藥方法

12名受試者隨機(jī)分為兩組，每組6人，首次每組隨機(jī)服用試驗(yàn)藥品或?qū)φ账幤?，單劑量一次口服阿莫西?00mg，克拉維酸鉀125mg，一周后各組自身交叉服用。受試者在試驗(yàn)前一周及試驗(yàn)期間禁忌用其它任何藥物。在試驗(yàn)前一天晚飯后禁食至第二天早上8：00服藥。用250mg溫開(kāi)水沖服干混懸劑，服藥后4h允許進(jìn)統(tǒng)一中餐。取血時(shí)間為服藥0.17、0.33、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8h，取靜脈血3ml，肝素抗凝，立即分離血漿后放置-70℃冰箱待測(cè)定。

1.4 血漿樣品處理

取血漿0.2ml，加入0.2ml1ol·L-1磷酸緩沖溶液（pH=7.02），用密理博微孔膜在10000轉(zhuǎn)離心15min，取濾液100μl，加入150μlpH3.80lmol·L-1磷酸緩沖溶液，再加人20μl2%苯甲醛乙醇溶液，混勻，密封于安靚放入100土0.3℃烘箱20min。取出后立即在-18℃冰箱10min冷卻至室溫進(jìn)樣50ul。以外標(biāo)法峰高定量。阿莫西林和克拉維酸鉀在本色譜條件下的出峰時(shí)間為11.3min和8.7min，空白血漿中無(wú)雜質(zhì)峰干擾。見(jiàn)圖1。

2 結(jié)果

2.1 血藥濃度測(cè)定方法的評(píng)價(jià)

2.1.1 方法的專屬性

實(shí)驗(yàn)人員主要通過(guò)熒光檢測(cè)的方式，對(duì)這兩種制劑進(jìn)行了詳細(xì)的檢測(cè)，血漿里面沒(méi)有含有加多的雜志峰，這樣也較好的說(shuō)明不會(huì)對(duì)這兩種制劑的檢測(cè)帶來(lái)干擾，而且這兩種制劑呈現(xiàn)出來(lái)的峰已經(jīng)處于完全分離的狀態(tài)，具體內(nèi)容請(qǐng)看圖1。本法的專屬性從某種意義上來(lái)說(shuō)要比HPLC-UV法要好一些，沒(méi)有較多的雜峰。

2.1.2 回收率和精密度試驗(yàn)結(jié)果

阿莫西林0.20，1.64，1，3.15m.gL-1三個(gè)濃度的絕對(duì)回收率為80%，克拉維酸鉀的回收率為84%，結(jié)果見(jiàn)表1。日內(nèi)、日間精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)和相對(duì)生物利用度結(jié)果

依據(jù)相關(guān)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果：對(duì)照藥和試驗(yàn)藥中AUC、Cmax用對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后作多因素方差分析和雙單側(cè)t檢驗(yàn)，凡Tmax用非參數(shù)法統(tǒng)計(jì)。結(jié)果：兩種制劑中阿莫西林經(jīng)統(tǒng)計(jì)，t1，t2均大于t（0.05）=1.812；Cmaxt1=0.580.05，無(wú)顯著性差異。阿莫西林和克拉維酸鉀的AUC經(jīng)（1-2α）90%置信區(qū)間計(jì)算，結(jié)果分別為41.86～62.69和4.70～6.39，試驗(yàn)藥阿莫西林和克拉維酸鉀分別為52.28和5.38，均落在上述區(qū)間。

3 討論

通過(guò)以上內(nèi)容的論述，可以得知：實(shí)驗(yàn)人員通過(guò)利用克拉維酸鉀能夠在酸性環(huán)境下和適量的苯甲醛乙醇溶液進(jìn)行充分的反應(yīng)，進(jìn)而得到相應(yīng)的熒光產(chǎn)物，并且能夠在以下兩個(gè)波長(zhǎng)中進(jìn)行檢測(cè)：一種是ex386nm；另一種是em460nm有著顯著的效果。例如，較好的特異性能、較高的靈敏度等。不僅僅如此，阿莫西林能夠在色譜條件下可以和克拉維酸鉀處于分離的狀態(tài)并且一起被檢測(cè)。

顯而易見(jiàn)的是，實(shí)驗(yàn)人員在對(duì)血漿樣品進(jìn)行處理的過(guò)程中，一般是提前使用濾膜將其完全過(guò)濾以后，然后進(jìn)行衍生化反應(yīng)，這樣做的目的是有著較高的回收率。在進(jìn)行試驗(yàn)的過(guò)程中，主要使用了甲醇、乙睛等相關(guān)物質(zhì)，但是得到的回收率不大于50%。出現(xiàn)這種情況的重要因素可能會(huì)和蛋白沉淀劑會(huì)隨著相關(guān)被測(cè)物的變化而將蛋白一起帶走，從而出現(xiàn)流失的情況。

依據(jù)相關(guān)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以得知：無(wú)論是對(duì)照藥還是試驗(yàn)要中，實(shí)驗(yàn)人員都會(huì)阿莫西林的AUC、Cmax、Tmax及其克拉維酸鉀的AUC和Tmax采取恰當(dāng)?shù)姆绞竭M(jìn)行了分析，得到的結(jié)果可以看出兩種制劑沒(méi)有明顯的區(qū)別。對(duì)于Cmax實(shí)測(cè)值來(lái)說(shuō)，可能會(huì)受到采樣的時(shí)間、吸收水平等因素的影響存在一定的區(qū)別。然而這兩種制劑中，不管是對(duì)于吸收量（AUC）來(lái)說(shuō)，還是就吸收速度（Tmax）而言都會(huì)當(dāng)作相應(yīng)的指標(biāo)，并且認(rèn)為這兩種制劑都可以當(dāng)作生物等效制劑。

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