西伯利亞鱘Sox17基因cDNA全長(zhǎng)的克隆及其表達(dá)分析

宋 煒，陳芬芳，2，張鳳英，馬春艷，趙 明，馬凌波

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部東海與遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200090；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306）

西伯利亞鱘Sox17基因cDNA全長(zhǎng)的克隆及其表達(dá)分析

宋 煒1，陳芬芳1，2，張鳳英1，馬春艷1，趙 明1，馬凌波1

（1.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院東海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部東海與遠(yuǎn)洋漁業(yè)資源開發(fā)利用重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 200090；2.上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院，上海 201306）

采用RACE技術(shù)獲得西伯利亞鱘（Acipenser baerii）Sox17基因cDNA全長(zhǎng)，序列分析表明，西伯利亞鱘Sox17基因cDNA全長(zhǎng)2 671 bp，包括588 bp的5’端非翻譯區(qū)，901 bp的3’端非翻譯區(qū)和編碼393個(gè)氨基酸殘基的1 183 bp開放閱讀框。氨基酸序列比對(duì)顯示，該基因具較高的保守性，與塞內(nèi)加爾多鰭魚（Polypterus senegalus）的相似度最高為72%。系統(tǒng)進(jìn)化分析表明，西伯利亞鱘與塞內(nèi)加爾多鰭魚聚為一支，且支持率為95%。以延伸因子efla（elongation factor 1-alpha）作為內(nèi)參基因，對(duì)Sox17基因在西伯利亞鱘各組織的相對(duì)表達(dá)量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)Sox17基因在不同組織中均有表達(dá)，但表達(dá)具有明顯的組織差異性。在腦中表達(dá)量最高，而在腎、血液、眼、腸和胸鰭5個(gè)組織中表達(dá)量均較低。同時(shí)，Sox17基因在西伯利亞鱘不同發(fā)育時(shí)期均有表達(dá)，但表達(dá)具有一定的時(shí)間差異性。在寬神經(jīng)板期的表達(dá)量高，相當(dāng)于表達(dá)量最低點(diǎn)11日齡仔魚的167倍。本研究為量化西伯利亞鱘胚胎發(fā)育分化過程中相關(guān)基因提供了參照工具，同時(shí)可為今后深入研究西伯利亞鱘Sox17在胚胎發(fā)育過程中的作用提供基礎(chǔ)參考資料。

西伯利亞鱘；Sox17；cDNA全長(zhǎng)；表達(dá)分析

鱘形目魚類是軟骨硬鱗下綱中現(xiàn)存的唯一一目，素有“活化石”之稱［1］。作為鱘形目魚類中重要的一種，西伯利亞鱘（Acipenser baerii）隸屬于輻鰭亞綱（Actinopterygii），軟骨硬鱗下綱（Chondrostei），鱘形目（Acipenseriformes），鱘科（Acipenseridae），鱘屬，主要分布于俄羅斯西部的鄂畢河至東部的科雷馬河之間的西伯利亞各河流中，是目前世界上最古老的也是起源最早的脊椎動(dòng)物類群之一，因而具有極高的進(jìn)化研究?jī)r(jià)值。隨著生物技術(shù)的迅速發(fā)展，人們對(duì)西伯利亞鱘的研究已向縱深方向展開，主要集中在分子進(jìn)化［2］，胚胎和仔魚［3－4］及側(cè)線神經(jīng)發(fā)育等方面［5－6］。

Sox基因家族（Sry-related HMG-box）是一類由哺乳動(dòng)物性別決定基因Sry（sex determin-ing region of Y chromosome）相關(guān)基因構(gòu)成。該家族成員都含有一個(gè)保守的 HMG（high mobility group）盒，其編碼產(chǎn)物能特異性地識(shí)別和結(jié)合DNA序列，使DNA發(fā)生彎曲，是一類重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子［7］。Sox基因編碼一系列轉(zhuǎn)錄因子，參與了胚胎發(fā)育和細(xì)胞命運(yùn)決定的調(diào)控。通過與其它蛋白形成復(fù)合體后作為轉(zhuǎn)錄調(diào)控子，廣泛參與早期胚胎發(fā)育、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、軟骨及多種組織器官的形成、性別決定和分化等重要的生物學(xué)過程［8－9］。在胚胎發(fā)育過程中可在多種組織中表達(dá)，其表達(dá)具有時(shí)空特異性。同一種Sox基因在不同的組織中具有不同的功能，同時(shí)，不同的Sox基因在不同的組織中可以具有相似的功能，甚至可以相互替代［10－11］。根據(jù) HMG盒序列的系統(tǒng)發(fā)生分析、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)特征及功能不同，將Sox基因分成A-J 10個(gè)亞族。Sox17屬于Sox家族的F亞族，作為Sox轉(zhuǎn)錄因子超家族的一員，在進(jìn)化過程中高度保守［12］。Sox17能夠調(diào)控內(nèi)胚層發(fā)育、精子發(fā)生和血管生成過程；在控制少突膠質(zhì)細(xì)胞的分化過程中具有重要作用，同時(shí)也是心臟中胚層發(fā)育的關(guān)鍵作用因子［13－18］。

目前關(guān)于鱘形目Sox17基因的研究尚未見報(bào)道，本研究采用 RACE法克隆出西伯利亞鱘Sox17基因cDNA全長(zhǎng)，并對(duì)其進(jìn)行序列分析，同時(shí)利用RT-PCR技術(shù)，對(duì)該基因在西伯利亞鱘不同組織以及胚胎發(fā)育不同時(shí)期的表達(dá)量進(jìn)行研究，以期進(jìn)一步探究該基因的功能及其在西伯利亞鱘胚胎發(fā)育與分化調(diào)控信號(hào)通路中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：西伯利亞鱘成魚和胚胎均采自浙江千島湖鱘龍科技有限公司養(yǎng)殖場(chǎng)，其中成魚100 ind（2齡，體長(zhǎng)為 27.4～34.5 cm），胚胎1 000 ind，暫養(yǎng)于實(shí)驗(yàn)室循環(huán)水系統(tǒng)中。

實(shí)驗(yàn)試劑：總RNA抽提試劑RNApure total RNA Kit（艾德萊，北京），pMD19-T Vector試劑盒（TaKaRa，clontech，Japan），SMARTer?RACE 5’／3’Kit試劑盒 （TaKaRa，clontech，Japan）、SMARTerTMRACE cDNA Amplification Kit（TaKaRa，clontech，Japan），ReverTra Ace qPCR RT Kit，SYBR Premix Ex TaqTMⅡ（Tli RNaseH Plus）（TaKaRa， Dalian， China） （TOYOBO，Japan）。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品采集與RNA提取

西伯利亞鱘活體解剖，取腸、腹鰭、肝臟、肌肉、腦、腎、鰓、胸鰭、血液、心臟、眼各組織于研磨器（RNAase free）中，同時(shí)參考西伯利亞鱘不同發(fā)育階段的分期方法［4］，取西伯利亞鱘胚胎大卵黃栓期、寬神經(jīng)板期、尾芽分離期，以及11日齡仔魚、64日齡魚電感受器神經(jīng)節(jié)于研磨器（RNAase free）中，加液氮研磨，使用RNApure total RNA Kit試劑盒提取RNA，具體步驟參照試劑盒說(shuō)明書。提取的RNA通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，符合后續(xù)RACE擴(kuò)增以及RT-PCR的要求。

1.2.2 Sox17基因 3’RACE擴(kuò)增

利用轉(zhuǎn)錄組建庫(kù)獲得的Sox17部分cDNA片段，設(shè)計(jì)引物進(jìn)行 3’RACE。按照 SMARTer?RACE 5’／3’Kit（TaKaRa，clontech，Japan）試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行。將3’端RACE擴(kuò)增獲得的目的條帶連接至pMD-19T載體后送至上海杰李生物技術(shù)有限公司測(cè)序。測(cè)序所得序列先進(jìn)行拼接、比對(duì)和分析，確定屬于Sox17基因的cDNA片段，然后把兩端序列和經(jīng)驗(yàn)證后序列進(jìn)行拼接，拼接完成的序列即為Sox17基因cDNA的全長(zhǎng)，最后設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證全長(zhǎng)序列。

表1 實(shí)驗(yàn)中所使用的引物Tab.1 Primers used for sequencing Sox17

1.2.3 生物信息學(xué)分析

應(yīng)用NCBI中blastn和blastp程序?qū)Λ@得的序列進(jìn)行了同源性查找及比較（http：／／blast.ncbi.nlm.nih.gov／Blast.cgi），以確定是否為目的基因片段；應(yīng)用ORFfinder程序進(jìn)行開放閱讀框（ORF）（http：／／www.ncbi.nlm.nih.gov／gorf／gorf.html）分析并將其推導(dǎo)為相應(yīng)的氨基酸序列，分析CDS起始區(qū)域及氨基酸數(shù)量。應(yīng)用MEGA 6.0軟件，采用鄰接法（Neighbour-joining）對(duì)同源蛋白質(zhì)進(jìn)行系統(tǒng)進(jìn)化樹構(gòu)建，其中自展（Bootstrap）進(jìn)行1 000次重復(fù)，其余參數(shù)為默認(rèn)。蛋白質(zhì)的分子質(zhì)量、等電點(diǎn)及基本性質(zhì)分析用Prot Param （http／／www. expasy. ch／tools／protparam.html）進(jìn)行預(yù)測(cè)。

表2 序列分析所用的Sox17蛋白質(zhì)序列來(lái)源和登錄號(hào)Tab.2 Origins and accession numbers of Sox17 gene sequence in this study

1.2.4 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR

以西伯利亞鱘各個(gè)組織和不同發(fā)育時(shí)期的RNA轉(zhuǎn)錄得到的cDNA為模板，以efla作為內(nèi)參基因進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。RT-PCR反應(yīng)體系為20μL，其中包括：SYBR Premix Ex TaqTMⅡ10μL，Primer F／R（10 mM）1μL，ddH2O 6μL，cDNA2μL。反應(yīng)條件如下：94℃預(yù)變性10 min，94℃變性15 s，引物退火溫度1 min，總共進(jìn)行45個(gè)循環(huán)，72℃下10 min，最后采用溶解曲線法檢測(cè)引物是否特異。

2 結(jié)果與分析

2.1 西伯利亞鱘Sox17基因的cDNA序列分析

通過建庫(kù)克隆和RACE擴(kuò)增拼接獲得了西伯利亞鱘Sox17基因的cDNA序列，比對(duì)結(jié)果顯示，西伯利亞鱘Sox17基因與其它物種的Sox17具有較高的相似性，綜合分析后命名為AbSox17（圖1）。AbSox17基因cDNA全長(zhǎng)序列2 671 bp，已將該序列提交至 GenBank（登錄號(hào)：KY353513）。AbSox17序列包括588 bp的5’端非翻譯區(qū)（untranslated region，UTR）、可編碼393個(gè)氨基酸的1 182 bp的開放閱讀框（open reading frame，ORF）及包括大小為901 bp的3’端非翻譯區(qū)（UTR）。利用ProtParam tool平臺(tái)，對(duì)AbSox17的編碼區(qū)推導(dǎo)的蛋白質(zhì)的基本理化特征進(jìn)行分析，推測(cè)該蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量約為4.41×104Da，等電點(diǎn)為 6.39，分子式為 C1896H2933N567O605S25。AbSox17蛋白包含兩個(gè)結(jié)構(gòu)域，在蛋白質(zhì)序列63～133位置有一個(gè)HMG盒包含A、B兩個(gè)DNA作用結(jié)構(gòu)域。而在蛋白質(zhì)序列276～392位置處有一個(gè)Sox羧基端結(jié)構(gòu)域。

2.2 AbSox17蛋白的結(jié)構(gòu)特征以及相似性

與其它物種蛋白質(zhì)氨基酸序列進(jìn)行比對(duì)分析，結(jié)果表明，AbSox17與塞內(nèi)加爾多鰭魚（Polypterus senegalus）Sox17氨基酸序列相似性為72%，與香魚（Plecoglossus altivelis）、歐洲舌齒鱸（Dicentrarchus labrax）、南極巖斑鱈（Notothenia coriiceps）Sox17氨基酸序列的相似性為67%，與小家鼠Sox17氨基酸序列相似性為50%。從13種魚氨基酸序列與西伯利亞鱘的比對(duì)結(jié)果可以得出，Sox17基因在魚類中相似度比較高，且存在保守區(qū)域，70～150 bp相似度最高，為HMG盒作用結(jié)構(gòu)域。同樣，在序列的羧基端與氨基末端也非常保守（圖2）。

2.3 AbSox17蛋白質(zhì)的系統(tǒng)進(jìn)化分析

從NCBI蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)下載了23條其它物種Sox17蛋白的氨基酸序列，利用MEGA 6.0軟件對(duì)AbSox17蛋白及多個(gè)物種Sox17蛋白的氨基酸序列進(jìn)行了比對(duì)。另外，根據(jù)多重比對(duì)結(jié)果構(gòu)建了 NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹，Bootstrap重復(fù)次數(shù)設(shè)為1 000次。從系統(tǒng)進(jìn)化樹可以明顯看到2個(gè)完好的分支，西伯利亞鱘首先與塞內(nèi)加爾多鰭魚聚為一支，且支持率為95%。緊接著與其它魚類聚為一支。然后與其它哺乳類（如人類、黑猩猩、牛、小家鼠、猴等）聚為一支（圖3）。從圖3可以看出，西伯利亞鱘與塞內(nèi)加爾多鰭魚的Sox17基因相似度最高，且與已報(bào)道的其它魚類以及哺乳類在進(jìn)化過程中發(fā)生了一定程度的分化。

圖1 西伯利亞鱘Sox17 cDNA核苷酸序列和氨基酸序列Fig.1 The cDNA and deduced am ino acid sequence of Sox17 gene of Siberian sturgeon注：圖中陰影大寫英文字母上面為核苷酸序列，下面為氨基酸序列，其中63～133 bp位置有一個(gè)Sox基因家族特有的HMG盒，276～392 bp位置處有一個(gè)Sox羧基端結(jié)構(gòu)域都已用陰影標(biāo)出，起始密碼子和終止密碼子用黑線框標(biāo)出Note：Above the capital letters in the shaded part of the picture，is the nucleotide sequence，and below is the amino acid sequence.The shadow on the position of 63－133 bp is Sox gene family special HMG box，276－392 bp location has a Sox carboxyl end structure domain.The start codon and termination codon aremarked by black line box

圖2 西伯利亞鱘與其它物種Sox17氨基酸序列比對(duì)Fig.2 M ultiple alignments of the am ino acid sequence of Sox17 from other organisms注：“·”代表最大相似下的間隙，白底黑字表示非保守的氨基酸殘基；淺灰底黑字表示大塊兒的相似序列；灰底黑字表示保守區(qū)氨基酸；黑底白字表示完全相同的殘基。用來(lái)比對(duì)的魚為表2中的13種魚Note：Gaps（·）were introduced to maximize the alignment.The relationships between residues are indicated as follows：nonsimilar residues，black letters on awhite background；block of similarity，black letters on a lightgrey background；conserved residues，black letters on a dark gray background；identical residues，white letters on a black background.The fish used to sequence blasted is from Tab.2

圖3 MEGA 6.0構(gòu)建的NJ系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.3 Construction system tree by MEGA 6.0注：進(jìn)化樹采用鄰接法，且所用序列的GenBank登錄號(hào)與表2中的相同Note：The tree is constructed by the neighbor-joining（NJ）algorithm.The GenBank number of the used sequences is the same as that in Tab.2

2.4 實(shí)時(shí)熒光定量PCR分析

運(yùn)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，以efla作為內(nèi)參基因，分析AbSox17基因在西伯利亞鱘成體各組織中的相對(duì)表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)AbSox17基因雖在不同組織中均有表達(dá)，但表達(dá)具有明顯的組織差異性。其中，在腎臟、血液、眼3個(gè)組織中表達(dá)量均處于極低的水平，其次是在腸和胸鰭中表達(dá)也很低，在腹鰭的表達(dá)量為腸和胸鰭表達(dá)量的2.3倍，而在肝和心臟的表達(dá)量為腹鰭的2倍，在肌肉和鰓中的表達(dá)量大約為腸和胸鰭的10倍，在腦中的表達(dá)量最高，為肌肉的6倍（圖4）。在不同發(fā)育階段，在大卵黃栓期、寬神經(jīng)板期及尾芽分離期、11日齡仔魚和64日齡魚電感受器神經(jīng)節(jié)，AbSox17基因也均有表達(dá)（圖5），AbSox17基因的mRNA在寬神經(jīng)板期相對(duì)表達(dá)量最高，為表達(dá)量最低（11日齡仔魚）的167倍。

3 討論

本研究成功地采用RACE法從西伯利亞鱘中克隆出Sox17基因cDNA全長(zhǎng)，該cDNA全長(zhǎng)為2 671 bp，編碼393個(gè)氨基酸。序列分析及同源性分析表明，該基因與其它動(dòng)物有較高相似度，特別是與其它大多數(shù)魚類的相似性均在60%以上，且存在保守區(qū)域。另外，在脊椎動(dòng)物中，同一亞族中的同一Sox基因不僅在HMG基序區(qū)存在同源性，而且在其它區(qū)域也存在較大相似性。并且在某些亞族中，HMG基序的兩側(cè)序列也是十分保守的，例如，B亞族中保守區(qū)位于HMG基序的羧基端，而C、E亞族中的保守區(qū)則位于HMG基序的氨基端。AbSox17基因核苷酸序列中70～150 bp相似度最高，可預(yù)測(cè)為Sox基因特有的HMG盒作用結(jié)構(gòu)域。同樣，在序列的羧基端與氨基末端也非常保守［19］，說(shuō)明該基因具有較強(qiáng)的保守性，同時(shí)也預(yù)示該基因在脊椎動(dòng)物生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要作用。

圖4 不同組織中西伯利亞鱘Sox17的相對(duì)表達(dá)量（以efla為內(nèi)參基因）Fig.4 Relative expression levels of Sox17 gene in various tissues detected by quantitative real-time PCR andnormalized to the efla transcript level

圖5 不同發(fā)育時(shí)期西伯利亞鱘Sox17的相對(duì)表達(dá)量Fig.5 Relative expression levels of Sox17 during different development stages of A.baerii注：從左到右依次為：T1，大卵黃栓期；T2，寬神經(jīng)板期；T5，尾芽分離期；T17，11日齡仔魚；T22，64日齡魚電感受器神經(jīng)節(jié)Note：From left to right in turn is：T1，big yolk plug stage；T2，wide neural plate formation；T5，separation of tail bud stage；T17，11 days old larvae；T22：64 days old sturgeon with electric sensors ganglion

多個(gè)物種的Sox17氨基酸蛋白序列分析表明其多樣性分化與分類學(xué)上的分化一致。系統(tǒng)進(jìn)化樹可以明顯看到2個(gè)完好的分支，其中哺乳動(dòng)物聚為一支，魚類聚為一支。Ab Sox17基因與塞內(nèi)加爾多鰭魚的親緣關(guān)系最近，其次與其它魚類如香魚、歐洲舌齒鱸、青鳉（Oryzias latipes）、尼羅羅非魚（Oreochromis niloticus）、黃鱔（Monopterus albus）的親緣關(guān)系也不遠(yuǎn)，但與哺乳動(dòng)物如人類、黑猩猩、小家鼠等可以從系統(tǒng)進(jìn)化樹上看到明顯的分支。

在對(duì)人類Sox17基因的研究中發(fā)現(xiàn)，Sox17基因廣泛表達(dá)，包括在成人的心臟、肺、脾、睪丸、卵巢、胎盤、胃腸道、胎兒的肺以及肝臟中［20］。而西伯利亞鱘Sox17基因表達(dá)也很廣泛，在腸、肝臟、心臟、眼、腎、鰓和肌肉等組織中均有表達(dá)。在對(duì)黃鱔Sox17基因的研究中表明，Sox17基因主要在在睪丸與卵巢中表達(dá)，在腦和脾中也有表達(dá)，但在心臟與肝臟中的表達(dá)比較微弱［21］，在本實(shí)驗(yàn)對(duì)西伯利亞鱘研究中發(fā)現(xiàn)，Sox17基因在腦中表達(dá)量最高，在肝臟與心臟中也有表達(dá)但表達(dá)量不高。

另外，Sox17基因的表達(dá)不局限于某一特定時(shí)期或某種特定的組織。有研究者通過Northern Blots檢測(cè)出Sox17基因存在兩種不同的mRNA亞型，并在小鼠的精子發(fā)生時(shí)有不同表達(dá)，一種在精原細(xì)胞中表達(dá)，且隨著早期粗線型細(xì)胞的發(fā)育而表達(dá)下降，另一種亞型在粗線型精原細(xì)胞時(shí)開始表達(dá)，并隨著精子發(fā)育過程其表達(dá)量不斷積累而上升［13］。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)Sox17基因在西伯利亞鱘發(fā)育的不同時(shí)期的表達(dá)量也不同，在寬神經(jīng)板時(shí)表達(dá)量最高，可推測(cè)Sox17基因可能與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育相關(guān)，而神經(jīng)系統(tǒng)主要是由外胚層發(fā)育形成的，可間接得到Sox17基因與外胚層發(fā)育之間可能存在關(guān)系。而之前的研究主要集中在Sox17基因與內(nèi)胚層的發(fā)育中的的調(diào)控作用。如通過對(duì)爪蛙（Xenopus laevis）、斑馬魚（Brachydanio rerio）和小鼠等的研究，Sox17作為必不可少的下游調(diào)控因子與其它基因一起調(diào)控內(nèi)胚層的發(fā)育［22］；在爪蟾（Xenopus tropicalis）中，Sox17和 B-catenin協(xié)同作用調(diào)節(jié)內(nèi)胚層基因的表達(dá)［23］。在對(duì)文昌魚（Branchiastoma）的研究同樣發(fā)現(xiàn)，Sox17基因?qū)?nèi)胚層的發(fā)育調(diào)控起作用［24］。本實(shí)驗(yàn)中得到Sox17基因可能與神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育相關(guān)，這一發(fā)現(xiàn)將為Sox17基因參與外胚層的發(fā)育研究提供新的線索。

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Cloning，analysis and expression detection of full-length cDNA of Sox17 from Acipenser baerii

SONGWei1，CHEN Fen-fang1，2，ZHANG Feng-ying1，MA Chun-yan1，ZHAO Ming1，MA Ling-bo1
（1.Key Laboratory of East China Sea and Oceanic Fishery Resources Exploitation，Ministry of Agriculture，East China Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Shanghai 200090，China；2.College of Fisheries and Life Sciences，ShanghaiOcean University，Shanghai 201306，China）

In this study，the full-length cDNA of Sox17 gene from Siberian sturgeon（Acipense baerii）was obtained using RACE techniques.The full-length of Sox17 gene cDNA was 2 671 bp in length，including a 1 183 bp open reading frame（ORF）encoded 393 amino acids，a 588 bp 5 untranslated region（5’UTR）and a 901 bp 3 untranslated region（3’UTR）.Multiple alignment analyses showed Siberian sturgeon was highly conservative to other fishes.It had high similarity with Ploypterus senegalus of 72%support rating.Phylogenetic analysis showd that Siberian sturgeon first clustered together with Ploypterus senegalus with the approval rating of95%.And then efla（elongation factor1-alpha，efla）genewas used as a internal reference on detecting the expression of Sox17 gene in various tissues of Siberian sturgeon by real-time fluorescence quantitative PCR.The results showed Sox17 gene expressed in diferent tissues and the expression level of Sox17 was relatively low in kidney，blood，eye，intestine and pelvic fin.However，in brain，the expression level of Sox17 was the highest in all of these tissues.At the same time，Sox17 gene also expressed in different development periods，but expressed with a certain amount of time difference.In wide neural plate，the expression level of Sox17 was the highest，reached 167 times thatof the quantity of11 days old larvae period.This study provides a reference to quantify the Siberian sturgeon differentiation genes involved in the process of embryonic development.At the same time，it provides the basic reference for the future study of the Siberian sturgeon Sox17 role in the process of embryonic development.

Acipenser baerii；Sox17 gene；full length of cDNA cloning；expression analysis

Q 959.468

A

1004－2490（2017）06－0629－11

2017－05－22

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目（31302161）

宋 煒（1983－），男，副研究員，主要從事魚類發(fā)育生物學(xué)研究。E-mail：swift83＠sina.com

馬凌波，研究員。E-mail：malingbo＠vip.sina.com