葉樺秀 李麗麗 江莉莉 福建省老年醫(yī)院檢驗(yàn)科 （福建 福州 350003）

利用VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)菌的鑒定，相比于傳統(tǒng)的細(xì)菌鑒定方法，具有操作簡(jiǎn)單、耗時(shí)短的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)也能克服人為判斷的準(zhǔn)確性較差的弊端?，F(xiàn)階段，VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系質(zhì)控菌株統(tǒng)已被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和食品安全領(lǐng)域?；诖?，為探究VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)對(duì)微生物鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性，本次研究對(duì)3株ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株，28株質(zhì)控菌株和64株本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)臨床分離純化菌株進(jìn)行檢測(cè)，并于常規(guī)鑒定方法的結(jié)果相比較，實(shí)現(xiàn)驗(yàn)證VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)總體符合率的目的[1]。

1.材料與方法

1.1 鑒定樣本來(lái)源

ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株是本次試驗(yàn)主要的鑒定樣本來(lái)源，主要包括ATCC25922大腸埃希菌、ATCC25923金黃色葡萄球菌和ATCC27853銅綠假單胞菌。2014年～2017上半年福建省臨床檢驗(yàn)中心提供的28株質(zhì)控菌株是本次研究的主要菌株樣本，以回報(bào)結(jié)果為準(zhǔn)。盲樣考核菌株為本實(shí)驗(yàn)室內(nèi)臨床分離菌株，來(lái)自肺部、尿路、腸道感染及血液、膽汁、膿汁分離的致病菌及條件致病菌。包括不動(dòng)桿菌、假單胞菌、克雷伯氏菌、沙雷菌、枸櫞酸菌、黃桿菌、埃希菌、沙門菌、志賀菌、變形桿菌、普羅威登斯菌、產(chǎn)堿桿菌、李斯特菌、葡糖球菌、腸球菌、產(chǎn)堿桿菌、弧菌屬、氣單胞菌、鄰單胞菌、假絲酵母菌20個(gè)屬共95株菌株，經(jīng)血平板分離純化。

1.2 鑒定儀器和鑒定卡

本次鑒定儀器所選用的是VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)法國(guó)梅里埃公司生產(chǎn)的鑒定卡以及鑒定卡的配套試劑。其中，鑒定卡的種類包括革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定卡GN、革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌鑒定卡GP和酵母菌鑒定卡YST。

本次鑒定器材選用手工鑒定生化反應(yīng)培養(yǎng)基和念珠顯色培養(yǎng)基，鑒定血清選用的是沙門菌診斷血清和志賀菌診斷血清，在試驗(yàn)過(guò)程中，注重對(duì)鑒定血清的有效期進(jìn)行控制。

1.3 鑒定方法

依據(jù)VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)及配套GN、GP、YST鑒定卡的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，對(duì)95株菌株，運(yùn)用VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)和常規(guī)手工鑒定的方法分別驗(yàn)證。VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)鑒定分辨率＞85%的為可信鑒定結(jié)果，鑒定分辨率在50%至84%之間的菌株，再送至外院運(yùn)用梅里埃VITEK MS質(zhì)譜儀加以佐證，確定總體符合率，并依據(jù)第四版《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》進(jìn)行常規(guī)的手工鑒定，此外，應(yīng)用念珠顯色培養(yǎng)基鑒定酵母菌。

表1 VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)鑒定結(jié)果符合率

2.結(jié)果

2.1 鑒定時(shí)間

所有參與鑒定的菌株忽略在培養(yǎng)階段的時(shí)間。應(yīng)用VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)，革蘭陰性菌鑒定卡在10h內(nèi)獲得鑒定結(jié)果，革蘭陽(yáng)性菌鑒定卡在8h內(nèi)獲得鑒定結(jié)果，酵母菌鑒定卡在18h內(nèi)獲得鑒定結(jié)果。常規(guī)鑒定方法于24h后觀察鑒定結(jié)果。

2.2 符合程度

將通過(guò)VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)鑒定的結(jié)果與常規(guī)鑒定結(jié)果進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)對(duì)95株菌株的鑒定符合率為96.9%，標(biāo)準(zhǔn)菌株鑒定結(jié)果的符合率為100%，盲樣考核菌株鑒定結(jié)果的符合率達(dá)到了95.3%，質(zhì)控菌株鑒定結(jié)果的符合率達(dá)到了97.5%，依據(jù)菌株的性質(zhì)來(lái)看，革蘭陽(yáng)性菌鑒定結(jié)果的符合率為97.9%，革蘭陰性菌的符合率為95.2%，酵母菌的符合率100%。

2.3 鑒定結(jié)果分析

本次研究利用VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)對(duì)所選取的95株菌株共測(cè)試了128次，鑒定結(jié)果總體符合率為96.9%，其中，標(biāo)準(zhǔn)菌株的生化特性顯著且穩(wěn)定，符合率為100%，體現(xiàn)了VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)的重復(fù)性和穩(wěn)定性較高。革蘭陰性菌中的3例菌株不符合鑒定結(jié)果，經(jīng)梅里埃VITEK MS質(zhì)譜儀加以鑒定確認(rèn)，為質(zhì)控菌株中的多殺巴斯德菌和盲樣考核菌株中的副溶血性弧菌及無(wú)丙二酸檸檬酸桿菌，系統(tǒng)鑒定的分辨率均低于85%，本次研究所鑒定的95株菌株除了沙門菌和志賀菌需要另外進(jìn)行血清學(xué)的試驗(yàn)輔助從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)菌種類的判別外，其余93株菌株均可利用VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)直接鑒定。革蘭陽(yáng)性菌中的停乳鏈球菌似馬亞種系統(tǒng)鑒定分辨率是50%，為低分辨率。酵母菌符合率為100%，鑒定菌株為白色假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌、克柔假絲酵母菌，此四種菌為臨床酵母菌感染中的常見(jiàn)菌，也是念珠菌顯色培養(yǎng)基可鑒定的范疇。

3.討論

現(xiàn)階段，VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)擁有6種不同微生物的鑒定卡，細(xì)菌鑒定結(jié)果采用GB推薦生化鑒定顯色法，大于500種可鑒定細(xì)菌[2]，在臨床試驗(yàn)過(guò)程中，經(jīng)常運(yùn)用革蘭氏陰性細(xì)菌鑒定卡GN和革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌鑒定卡GP進(jìn)行細(xì)菌鑒定工作，同時(shí)，酵母菌鑒定卡YST在細(xì)菌鑒定中應(yīng)用的次數(shù)也較多。應(yīng)用VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)可對(duì)臨床感染中的多數(shù)病原菌進(jìn)行檢測(cè)，從而提升疾病的預(yù)防和診治能力。直接獲取鑒定結(jié)果，所需要的時(shí)間平均為6～8個(gè)小時(shí)，相比于常規(guī)的鑒定方法來(lái)說(shuō)，耗時(shí)縮短了許多，有效提升了鑒定的效率[3]。因此，采用VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)進(jìn)行微生物的鑒定具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義，被臨床實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)室的鑒定結(jié)果顯示，念珠菌顯色培養(yǎng)基和VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)對(duì)上述四種酵母菌均有較高分辨率和符合率。3例列為不符合的革蘭氏陰性菌，多殺巴斯德菌、副溶血性弧菌及無(wú)丙二酸檸檬酸桿菌的系統(tǒng)分辨率均低于85%，需以輔助試驗(yàn)加以確認(rèn)。表明VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)對(duì)微生物鑒定的結(jié)果還是較為準(zhǔn)確。但對(duì)少數(shù)疑難細(xì)菌，在鑒定時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)偏差。在鑒定的過(guò)程中，菌株種類復(fù)雜，試劑濃度不合格以及菌株的培養(yǎng)時(shí)間不一致都會(huì)對(duì)鑒定結(jié)果的符合率造成影響。因此，在出現(xiàn)問(wèn)題的時(shí)候應(yīng)對(duì)上述可能引發(fā)鑒定結(jié)果符合率下降的因素進(jìn)行逐一排查，并定期檢查鑒定儀器、鑒定卡片及配套試劑，確保其在有效期內(nèi)使用，同時(shí)應(yīng)開(kāi)展鑒定技術(shù)培訓(xùn)，提升鑒定人員對(duì)VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)的操作熟練程度和技術(shù)水平，實(shí)現(xiàn)人工鑒定方法和利用VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)進(jìn)行鑒定的方法相結(jié)合，從而形成參照關(guān)系，有利于提升微生物鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性[3]。

鑒定結(jié)果表明，VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)在選擇所需鑒定菌株的過(guò)程中，應(yīng)注重選擇培養(yǎng)時(shí)間較短的菌株，同時(shí)要將菌株進(jìn)行分離，分離時(shí)間約為24h，從而提升鑒定結(jié)果的準(zhǔn)確性。同時(shí)，在貯存菌株的過(guò)程中，應(yīng)保持適宜的溫度，避免反復(fù)冷凍和融化的現(xiàn)象，并牢記菌株的保存期限。研究結(jié)果表明，李斯特菌、耶爾森菌鑒定結(jié)果的符合率隨時(shí)間變化下降不甚明顯，副溶血性弧菌和金黃色葡糖球菌鑒定結(jié)果的符合率與時(shí)間的變化呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)的發(fā)展趨勢(shì)，即時(shí)間越長(zhǎng)，副溶血性弧菌和金黃色葡糖球菌鑒定結(jié)果的符合率越低。由此可見(jiàn)，保存時(shí)間過(guò)長(zhǎng)和反復(fù)融化和冷凍都會(huì)對(duì)微生物的特性造成影響，進(jìn)一步對(duì)鑒定結(jié)果造成影響[4]。綜上所述，利用VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)進(jìn)行菌株的鑒定，能夠確定致病菌的種類，為合理選擇治療法方法奠定理論基礎(chǔ)。具有較高的鑒定符合率，值得被廣泛推廣和應(yīng)用。同時(shí)，在鑒定的過(guò)程中，應(yīng)注意結(jié)合手工鑒定的方法對(duì)鑒定結(jié)果進(jìn)行復(fù)查，從而提升鑒定的準(zhǔn)確性[5]。

4.結(jié)論

研究結(jié)果表明，利用VITEK 2 Compact微生物全自動(dòng)分析系統(tǒng)對(duì)微生物進(jìn)行檢測(cè)符合率較高，提升了臨床病原菌的診斷與治療的及時(shí)性和準(zhǔn)確性。

[1]丁秀榮,劉志忠,陳銘,等.VITEK2Compact全自動(dòng)微生物鑒定系統(tǒng)對(duì)無(wú)名念珠菌的錯(cuò)誤鑒定及文獻(xiàn)回顧[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2016,26(13):1855-1857.

[2]楊晶,王偉歡.VITEK2Compact系統(tǒng)的應(yīng)用及鑒定結(jié)果分析[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志,2016,26(18):2643-2645.

[3]陳蓉,居颺,劉戰(zhàn)民.3種鑒定系統(tǒng)在微生物室間質(zhì)量評(píng)價(jià)中的應(yīng)用和比較[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2017,32(5):415-420.

[4]Gray TJ,Kong F,Jelfs P,et al.Improved identification of rapidly growing mycobacteria by a 16S-23S internal transcribed spacer region PCR and capillary gelelectrophoresis[J].PLo S One,2014,9(7):102290.

[5]葉乃芳,凌華志.16S r RNA 序列分析技術(shù)對(duì)臨床標(biāo)本中疑難細(xì)菌的鑒定[J].安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2015,50(7):1000-1003.