□ 劉 娜 常德市食品檢驗(yàn)所

現(xiàn)階段，已有相關(guān)法律來限制或禁止將同化激素應(yīng)用于食用性動物養(yǎng)殖當(dāng)中，但一些不良企業(yè)或商家受利益驅(qū)使，仍大量使用此激素，因而給國民健康帶來了嚴(yán)重危害。當(dāng)前，ASs檢測方法有高效液相色譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法等[1]。本文以動物肌肉組織當(dāng)中殘留甾類同化激素為例，就此檢測法的應(yīng)用效能作一探討。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

Agilent5973N型質(zhì)譜-6890N型氣相色譜聯(lián)用儀（自身配置有適配水浴超聲波發(fā)生裝置）、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、Milli-Q去離子水發(fā)生器、氮?dú)鉂饪s儀、12通道半自動固相萃取裝置。同化激素標(biāo)準(zhǔn)品。HPLC級的甲醇、乙腈、甲苯及叔丁基甲醚。三甲基碘硅烷；二硫蘇糖醇。

運(yùn)用甲醇進(jìn)行混合標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液的制備，各個激素的質(zhì)量濃度均為100 mg/L，存放于-18 ℃下，避光。于無水環(huán)境下，進(jìn)行衍生化溶液的制備，保存于-4～0 ℃下（避光），靜置且過夜后，方能使用。

1.2 樣品前處理

（1）制樣：精取100～200 g動物肌肉組織樣本，攪拌器制樣，然后置于密封環(huán)境中，溫度控制在18 ℃。

（2）均質(zhì)與酶解：取勻質(zhì)與酶解試樣5.0 g，置入50 mL離心管，將醋酸緩沖溶液加入其中，運(yùn)用勻質(zhì)器，勻質(zhì)2×20S（10 000 r/min），然后將酶溶液加入，于37 ℃下，將混合物實(shí)施酶解反應(yīng)，時間為3～4 h。在開展添加試驗(yàn)時，完成均質(zhì)后，向離心管中加入適量的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，靜置，時間為10～15 min，然后將酶溶液加入，開始酶解反應(yīng)[2]。

（3）提取：針對酶解之后所得到的混合物，將甲醇加入，利用旋渦振蕩器，混勻1 min，然后放置到超聲波發(fā)生器當(dāng)中，在室溫下，運(yùn)用超聲進(jìn)行提取，時間為5 min。

1.3 測定條件

1.3.1 質(zhì)譜條件

電子倍增器電壓為1 500 V；四級桿溫度為150 ℃；電子轟擊離子源溫度為225 ℃；溶劑延遲為10 min。

1.3.2 色譜條件

載氣為高純氦，壓力為86.1 kPa；流量為0.9 mL/min；不分流進(jìn)樣1 μL；接口溫度控制在275 ℃；進(jìn)樣口溫度控制在275 ℃。升溫程序：基礎(chǔ)溫度為120 ℃，每1 min溫度升高數(shù)為15 ℃，直至 250 ℃。

2 結(jié)果與討論

2.1 選擇衍生化試劑

針對甾體通化激素而言，其含有阿爾法、芳環(huán)或者雙鍵，除此之外，還含有貝塔不飽和酮以及含氧基團(tuán)和鹵素（酮基、羥基等），有著比較差的熱穩(wěn)定性，且不易揮發(fā)。所以，不適合直接開展GC分析。只有先烷化ASs結(jié)構(gòu)當(dāng)中的羥基硅與酮基，方能更好地采取GC/MS來開展檢查。在實(shí)驗(yàn)過程中，選3種衍生化試劑，分別為雙氟乙酰胺、三甲基氯硅烷與MSTFA/TMIS/DTE，對9種ASs開展衍生分析，從最終所得到的結(jié)果得知，在衍生試劑當(dāng)中，前2種對9種Ass當(dāng)中的部分激素衍生的效果不佳，而對于MSTFA/TMIS/DTE而言，則能夠烷化Ass結(jié)構(gòu)當(dāng)中全部的羥基與酮基，且在衍生化反應(yīng)方面，條件溫和，速度快，此外，效率也更高，可以獲得分子離子峰；在產(chǎn)物方面，有著比較少的碎片，分子質(zhì)量高，對于離子監(jiān)測更為適用。

2.2 方法的檢出限、回收率

取各濃度標(biāo)準(zhǔn)液，進(jìn)樣，選與之對應(yīng)的監(jiān)測離子，開展定量測定。設(shè)定信噪比為3，進(jìn)行計(jì)算，從中將待測的4種雄激素與5種雌激素的相應(yīng)定性檢出限范圍求出來，即0.5～1.0 μg/kg；以S/N=10，將方法的定量監(jiān)測限范圍求出來，即1.0～2.0 μg/Kg。9種激素所對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)偏差是8.7%～18.3%，回收率為70.7%～86.3%。

3 結(jié)語

本文針對動物肌肉組織當(dāng)中殘留的甾類同化激素，用氣相色譜-質(zhì)譜法檢測方法進(jìn)行監(jiān)測。構(gòu)建各動物肌肉中的甾類同化激素殘殘留的色譜與質(zhì)譜分析方法，得出此方法在食品監(jiān)測中應(yīng)用價(jià)值高，可用于多種食品的檢測。

[1]陳雙,劉祥,付睿,等.氣相色譜法及氣相色譜-質(zhì)譜法檢測食品中反式脂肪酸的研究進(jìn)展[J].江西食品工業(yè),2008(4):19-22.

[2]錢沖,勾新磊,周明強(qiáng),等.氣相色譜-質(zhì)譜法在食品藥品安全檢測中的應(yīng)用[J]. 食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報(bào),2016(11):4307-4311.