谷紅霞，葉 雯，錢宇汀，葉曉明，戴文圣

（浙江農(nóng)林大學(xué) 省部共建亞熱帶森林培育國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州311300）

香榧Torreya grandis ‘Merrillii’是紅豆杉科Taxaceae榧屬Torreya榧樹Torrent grandis經(jīng)人工選育和嫁接繁殖栽培的優(yōu)良變異品種。香榧的實(shí)生親代性狀易出現(xiàn)分離或變異，不能保持優(yōu)良單株的栽培和品質(zhì)特性［1］；生產(chǎn)上多用嫁接繁殖，常見方法是用2年生以上的實(shí)生大苗進(jìn)行嫁接，也有的用種砧嫁接法嫁接［2－5］。但傳統(tǒng)方法采穗困難、嫁接速度慢、嫁接受季節(jié)限制等問題，使得香榧繁殖系數(shù)低、育苗成本高，制約了香榧產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。近年來，有人將組培得到的香榧優(yōu)株枝段用腹接法嫁接到當(dāng)年播種的實(shí)生砧木上，即進(jìn)行嫩枝嫁接［6－7］，可使其成活率達(dá)83.3%，為香榧開展微型嫁接作了有益的探索。微型嫁接是指把母株或試管苗上切取的莖尖嫁接到幼苗或試管苗上的嫁接技術(shù)，該技術(shù)早見于草本植物的莖尖嫁接，20世紀(jì)70年代MURASHIGE等［8］將其應(yīng)用到木本植物的脫病毒植株的培養(yǎng)上，隨后陸續(xù)在腰果 Anacardium occidentale［9］和馬來沉香 Aquilaria malaccensis［10］上得到應(yīng)用； 在中國， 該項(xiàng)技術(shù)主要應(yīng)用于柑橘 Citrus reticulate［11－12］， 梨 Pyrus bretschneideri［13］， 櫻桃 Prunus avium［14－15］等果樹的育種和高品質(zhì)苗木大量快速繁殖，在針葉樹種尤其是香榧中鮮見報(bào)道。本研究探討了不同微型嫁接方法、接穗留葉數(shù)量、頂端去留等措施對(duì)香榧嫁接苗成活和生長的影響，提高香榧良種繁殖系數(shù)，降低育苗成本，實(shí)現(xiàn)工廠化育苗，為探索香榧良種快繁新技術(shù)，解決香榧生產(chǎn)上良種苗木供應(yīng)短缺的問題提供理論和實(shí)踐基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 砧木準(zhǔn)備 試驗(yàn)所用砧木來自浙江省杭州市臨安野草農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司的香榧育苗基地。于2015年10月采收榧樹種子，采用塑模拱棚、濕毛氈布覆蓋層積催芽；翌年1月，挑選剛露胚根或種殼開裂種子播種到無紡布營養(yǎng)缽中；即將展葉時(shí)，選取生長勢(shì)相對(duì)一致的榧樹實(shí)生小苗備用。

1.1.2 接穗采集 試驗(yàn)所用接穗采自浙江農(nóng)林大學(xué)香榧基地。于2016年4月在香榧母樹上采集未形成頂芽、未木質(zhì)化或半木質(zhì)化的當(dāng)年生嫩枝作接穗，截取長度為2～3 cm，留葉4～6片，一半保留頂端，另一半摘除頂端，隨采隨接。

圖1 不同微型嫁接方法流程Figure 1 The micrografting methods of Torreya grandis ‘Merrillii’

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 嫁接方法［16］本試驗(yàn)采用劈接（圖1A），鉆孔接（圖1B）和腹接（圖1C）等3種微型嫁接方法，60株·方法－1。①砧木處理。采用劈接和鉆孔接時(shí)，先將榧樹實(shí)生小苗距離幼莖基部2～3 cm處剪斷、削平；劈接時(shí)用刀片沿砧木中間向下切1 cm長的切口；鉆孔接時(shí)用鑷子從上而下垂直在砧木中間鉆出孔徑1 mm，深1 cm的小孔。腹接時(shí)砧木不剪，在離幼莖基部2～3 cm處用刀片從上而下斜切至中部，切口長約1 cm。②接穗處理。劈接用接穗，將香榧穗條用11號(hào)手術(shù)刀片削成兩面等長、削面長約1 cm的楔形；鉆孔接時(shí)將接穗削成圓錐形；腹接用穗條削成一面長、另一面短的馬耳形。③插穗包扎。將處理好的穗條插入切開的砧木中，用寬約1 cm的保鮮膜將接口捆嚴(yán)綁緊。④接后管理。將嫁接苗置于裝有基質(zhì)濕度為90%左右條件一致的育苗盒里自然生長，統(tǒng)一管理。腹接苗待到接穗萌動(dòng)后截掉砧木上部。

1.2.2 接穗類型 ①留葉數(shù)量。分別設(shè)置在穗條上留2，4，6片葉片等3種處理。②頂部處理。設(shè)置穗條摘頂和穗條留頂2種處理。③嫁接時(shí)間。為保證試驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性，在4月14日首次嫁接后，于4月15日，4月18日又進(jìn)行2次嫁接，共3次重復(fù)。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 接穗萌發(fā)動(dòng)態(tài)及生長量測(cè)定 嫁接苗于嫁接當(dāng)天測(cè)量接穗高度、接穗粗度和砧木粗度。在嫁接后15，30，45和60 d記錄嫁接苗新梢萌發(fā)情況；90 d后，考慮到嫁接苗成活率，隨機(jī)選取30株再次測(cè)量，并記錄其新增枝條數(shù)、新增葉片數(shù)和新茬數(shù)。嫁接后1 a，對(duì)不同接穗類型嫁接苗的地徑，苗高和新茬數(shù)進(jìn)行測(cè)定比較。

1.3.2 嫁接成活率觀測(cè) 記錄不同留葉數(shù)量的嫁接苗株數(shù)，同時(shí)記錄嫁接速率（株·h-1）；45 d后調(diào)查成活株數(shù)，并統(tǒng)計(jì)成活率，計(jì)算嫁接工效。

1.4 數(shù)據(jù)處理及分析

采用Excel 2010對(duì)所測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理及圖表繪制，用軟件SPSS 17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，利用最小顯著差（LSD）法進(jìn)行多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同嫁接方法對(duì)嫁接苗萌發(fā)生長的影響

不同嫁接方法下嫁接苗萌發(fā)動(dòng)態(tài)的觀測(cè)結(jié)果見表1。嫁接15 d內(nèi)，多數(shù)嫁接苗均未萌動(dòng)，特別是鉆孔接苗，全部處于未萌動(dòng)狀態(tài)；15 d后，劈接和腹接接穗已有少量露白跡象，說明這些嫁接苗已經(jīng)成活并且開始生長；此時(shí)鉆孔接的嫁接苗還未露白，說明采用此法嫁接的接穗與砧木之間的愈合時(shí)間較長，恢復(fù)生長較遲緩。嫁接30 d后，鉆孔接苗雖然已有部分穗條開始萌動(dòng)，但未萌動(dòng)的比例仍然很高；嫁接45 d后，劈接苗和腹接苗多數(shù)都已萌動(dòng)，說明此時(shí)大多數(shù)嫁接苗已成活萌發(fā)，但只有劈接苗出現(xiàn)展葉現(xiàn)象。嫁接60 d后，劈接苗都已展葉，鉆孔接苗和腹接苗還剩少數(shù)沒有露白。整體來看，用劈接法接穗萌發(fā)生長最快，腹接次之，鉆孔接最慢。

表1 香榧不同微型嫁接苗接穗萌發(fā)觀測(cè)Table 1 Germination of different micrografting seedlings of Torreya grandis ‘Merrillii’

不同微型嫁接方法下嫁接苗的生長動(dòng)態(tài)如表2所示。劈接苗的接穗新梢生長量最大，腹接法次之，不同嫁接方法的差異顯著（P＜0.05）。鉆孔接的嫁接苗新萌發(fā)枝梢的粗度較粗，與另2種嫁接方法差異顯著（P＜0.05）。腹接苗砧木粗度增長最快，顯著高于劈接和鉆孔接（P＜0.05）。在新增枝條數(shù)和新茬數(shù)上，不同方法之間無顯著差異。不同嫁接方法對(duì)嫁接苗新增葉片數(shù)的影響達(dá)到顯著水平（P＜0.05），腹接苗新增葉片數(shù)最多，劈接次之，鉆孔接最少。由此認(rèn)為，用劈接法嫁接的苗木前期生長較快，較其他方法更適宜香榧微型嫁接繁殖。

表2 香榧不同微型嫁接苗生長測(cè)定Table 2 Growth indexes of different micrografting seedlings of Torreya grandis ‘Merrillii’

圖2為嫁接苗培育一定時(shí)間后的枝梢生長形態(tài)（拍攝于2016年11月25日）。由圖2可知：劈接香榧苗在生長高度上有優(yōu)勢(shì)，腹接香榧苗存在頂芽五分枝生長現(xiàn)象，而鉆孔接香榧苗新生嫩枝生長較為分散。

圖2 不同微型嫁接方法下香榧苗的生長形態(tài)Figure 2 Growthform of different micrografting seedlings of T.grandis ‘Merrillii’

2.2 接穗頂端保留與否對(duì)嫁接苗生長動(dòng)態(tài)的影響

接穗是否保留頂端對(duì)香榧微型嫁接苗生長動(dòng)態(tài)也有影響，圖3顯示：接穗保留頂端的嫁接苗于嫁接后15 d就出現(xiàn)頂芽萌動(dòng)跡象，并在后期生長中出現(xiàn)較多不定芽；而接穗摘除頂端的嫁接苗在嫁接后30 d左右才有不定芽開始萌動(dòng)。表3為培育1 a后的嫁接苗生長動(dòng)態(tài)觀測(cè)圖，發(fā)現(xiàn)接穗保留頂端與否對(duì)嫁接苗地徑和新茬數(shù)的生長無明顯差異，但就苗高而言，摘除頂端的嫁接苗要顯著高于保留頂端的嫁接苗。

圖3 接穗頂端不同處理下的嫁接苗Figure 3 Different micrografting seedlings with/without crown

2.3 不同微型嫁接方法對(duì)嫁接成活率的影響

嫁接45 d后，不同嫁接方法、不同留葉數(shù)量嫁接苗的成活率統(tǒng)計(jì)結(jié)果見表4。劈接法接穗留葉數(shù)為4片時(shí)，嫁接苗成活率最高，達(dá)97.8%；腹接法接穗留葉數(shù)為6片時(shí)，嫁接苗的成活率達(dá)到了86.7%；無論哪種方法嫁接，接穗留葉2片的嫁接苗成活率都是最低的。綜合來看，劈接法平均成活率最高，達(dá)到了89.7%，顯著高于其他方法。不同嫁接方法在嫁接速率上差異不顯著，但在嫁接工效上劈接法明顯高于鉆孔接法和腹接法，說明劈接技術(shù)容易掌握、便于操作。由此可以認(rèn)為，較另2種嫁接方法而言，劈接法更適用于香榧的微型嫁接。

表3 接穗是否保留頂端對(duì)培育1 a的嫁接苗生長的影響Table 3 Growth of micrografting seedlings with/without crown after 1 year

3 結(jié)論與討論

相比于傳統(tǒng)嫁接法應(yīng)用2年生以上實(shí)生苗和生長1 a的穗條，微型嫁接法所用砧穗均取自當(dāng)年，可有效縮短良種苗木培育時(shí)間，勞動(dòng)強(qiáng)度低、可操作性強(qiáng)，且嫁接不受時(shí)間限制，具有很好的應(yīng)用前景。與沉香Aguilaria sinensis的最適微型嫁接法研究結(jié)果不同［8］，本試驗(yàn)中，劈接法在嫁接苗生長量、成活率、嫁接工效上都高于鉆孔接法和腹接法，且萌動(dòng)較早，苗高生長量較大，因此，可認(rèn)為是香榧微型嫁接的最佳選擇。

表4 香榧不同微型嫁接苗成活情況統(tǒng)計(jì)表Table 4 The survival statistics of different micrografting seedling in Torreys grandis ‘Merrillii’

接穗留葉4～6片的微型嫁接成活率較高，與蘋果Malus domestica試管微嫁接保留葉片2～4片為宜的研究結(jié)果較為一致［17］，說明不同樹種微型嫁接時(shí)接穗保留一定數(shù)量葉片有利于提高嫁接成活率，這可能與葉片功能有關(guān)，具體機(jī)制有待于進(jìn)一步研究。對(duì)香榧微型嫁接苗生長的長期監(jiān)測(cè)發(fā)現(xiàn)，保留頂端的嫁接苗萌芽較早，但后期苗高的生長顯著低于摘除頂端的嫁接苗。因此，就長期生長來看，采用穗條摘除頂端的處理技術(shù)不僅可以培育高質(zhì)量的苗木，而且可提高接穗利用率，降低對(duì)母樹的影響，大大減低育苗成本。

本研究為香榧微型嫁接提供了方法和實(shí)踐探索，填補(bǔ)了香榧良種栽培微型嫁接技術(shù)的空白，但砧苗培養(yǎng)、嫁接時(shí)間、激素應(yīng)用等諸多因素需要深化研究，將進(jìn)一步探索香榧微型嫁接苗的愈合機(jī)制和調(diào)控措施，構(gòu)建香榧良種工廠化快速繁殖技術(shù)體系。

［1］黎章矩，戴文圣．中國香榧［M］．北京：科學(xué)出版社，2007．

［2］郭欽標(biāo)，任欽良，馬正三，等．香榧種砧嫁接技術(shù)的研究［J］．浙江林學(xué)院學(xué)報(bào)，1986，3（1）：43－48．GUO Qinbiao,REN Qinliang,MA Zhengsan,et al.Studies on the seed-stock grafting techniques of Torreya grandis［J］.J Zhejiang For Coll,1986,3（1）:43 － 48.

［3］劉越秀.香榧嫁接和人工授粉技術(shù)初探［J］．江西林業(yè)科技，2008（1）：34－35．LIU Yuexiu.Preliminary study on graft and artificial pollination of Torreya grandis ［J］.J Jiangxi For Sci Technol,2008（1）:34 － 35.

［4］吳連海，顏?；?，姜根平，等．香榧實(shí)生大苗嫁接技術(shù)試驗(yàn)［J］．浙江林業(yè)科技，2013，33（2）：67－70．WU Lianhai,YAN Fuhua,JIANG Genping,et al.Experiment on grafting of Torreya grandis ‘Merrillii’ seedling ［J］.J Zhejiang For Sci Technol,2013,33（2）:67 － 70.

［5］王喬春．影響蘋果試管嫁接苗培育的因素［J］．果樹科學(xué)， 1996，13（2）： 79－83．WANG Qiaochun.Factors affecting the growth and survival of in vitro grafted apple ［J］.J Fruit Sci,1996,13（2）:79－83.

［6］金航標(biāo)．香榧組織培養(yǎng)及室內(nèi)嫩枝嫁接技術(shù)研究［D］．杭州：浙江農(nóng)林大學(xué)，2008．JIN Hangbiao.Study on the Technique of Tissue Culture and the Shoot-grafting of Torreya grandis ‘Merrillii’ in Greenhouse ［D］.Hangzhou:Zhejiang A&F University,2008.

［7］莊觀山．香榧嫁接苗培育與低產(chǎn)林管理［J］．園藝與種苗，2012（10）：9－12．ZHUANG Guanshan.Cultivation of grafted seedlings and low-yield forest management of Torreya grandis ［J］.Hortic Seed,2012（10）:9 － 12.

［8］MURASHIGE T,BITTERS W P,RANGAN T S,et al.A technique of shoot apex grafting and its utilization towards recovering virus-free citrus clone ［J］.HortScience,1972,7:118 － 119.

［9］MNENEY E E,MANTELL S H.In vitro micrografting of cashew ［J］.Plant Cell Tissue Organ Cult,2001,66（1）:49 －58.

［10］TORUAN-MATHIUS N,SITUMORANG J,RACHMAWATI D,et al.Compatibility studies of interspecific in vitro micrografting of agarwood （Aquilaria malaccensis Lamk.） ［J］.Biotrop Southeast Asian J Trop Biol,2008,15（2）:95－109.

［11］陳如珠，李耿光，張?zhí)m英，等．提高柑桔莖尖微型嫁接成苗率研究［J］．廣西植物，1991，11（1）：63－66．CHEN Ruzhu,LI Gengguang,ZHANG Lanying,et al.High frequency of successful grafts obtained by shoot-tip grafting in citrus in vitro ［J］.Guihaia,1991,11（1）:63 － 66.

［12］陳澤雄，劉奕清，婁娟．利用柑橘莖段誘導(dǎo)不定芽改進(jìn)微芽嫁接技術(shù)的研究［J］．西南師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2007， 32（1）： 57 － 61．CHEN Zexiong,LIU Yiqing,LOU Juan.Improvement of shoot-tip micrografting through adventitious bud induction from citrus stem explants ［J］.J Southwest China Norm Univ Nat Sci Ed,2007,32（1）:57 － 61.

［13］趙巍巍，陳蕾，曹后男，等．梨的試管微嫁接技術(shù)研究［J］．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（2）：624－626．ZHAO Weiwei,CHEN Lei,CAO Hounan,et al.Study on micro-grafting in vitro of tube pear ［J］.J Anhui Agric Sci,2010,38（2）:624 － 626.

［14］成密紅．櫻桃組織培養(yǎng)及微型嫁接技術(shù)研究［D］．楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2006．CHENG Mihong.Study on the Technique of Tissue Culture and the Micro-Grafts of Cherry ［D］.Yangling:Northwest A&F University,2006.

［15］成密紅，郭軍戰(zhàn)，蘇美瓊，等．櫻桃組培苗微型嫁接技術(shù)研究［J］．西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2007， 35（12）： 63 － 66．CHENG Mihong,GUO Junzhan,SU Meiqiong,et al.Study on the technique of micrografts of cherry ［J］.J Northwest A&F Univ Nat Sci Ed,2007,35（12）:63 － 66.

［16］高新一，王玉英．林木嫁接技術(shù)圖解［M］．北京：金盾出版社，2009．

［17］周瑞金，杜國強(qiáng)，師校欣，等．影響轉(zhuǎn)基因蘋果試管微嫁接苗成活的因子［J］．果樹學(xué)報(bào)，2007，24（2）：215－217．ZHOU Ruijin,DU Guoqiang,SHI Xiaoxin,et al.Studies on factors affecting survival rate of micro-graft in vitro in transgenic apple ［J］.J Fruit Sci,2007,24（2）:215 － 217.