孟思妤 孟長明 陳昌福

（1.河南省新鄉(xiāng)市康大消毒劑有限公司，453700；2.華中農業(yè)大學，430070）

2 致病菌藥物敏感性測定

抗菌藥物敏感性試驗（AST）簡稱藥敏試驗（或耐藥試驗），旨在了解病原菌對各種抗生素的敏感（或耐受）程度，以指導藥物治療中合理選用抗生素藥物的微生物學試驗。某種抗生素如果能以很小的劑量抑制、殺滅致病菌，則稱該種致病菌對該抗生素“敏感”。反之，則稱為“不敏感”或“耐藥”。為了解致病菌對哪種抗生素敏感，以合理用藥，減少盲目性，就應該進行對致病生物進行藥敏試驗。致病菌的藥敏試驗大致過程是：從患者的感染部位（病灶）采取含致病菌的標本，接種在適當的培養(yǎng)基上，于一定條件下純化培養(yǎng)菌株。如果采用紙片瓊脂擴散法（K-B法）完成藥敏試驗，就可將分別沾有一定量各種抗生素的紙片貼在培養(yǎng)基表面（或用不銹鋼圈，內放定量抗生素溶液），培養(yǎng)一定時間后觀察抑、殺菌結果。由于致病菌對各種抗生素的敏感程度不同，在藥物紙片周圍便出現(xiàn)不同大小的抑制致病菌生長而形成的“空圈”，稱為抑菌圈。抑菌圈大小與致病菌對各種抗生素的敏感程度成正比關系。因此，可以根據藥敏試驗結果有針對性地選用抗生素。最近已有自動化的藥敏試驗儀器問世，可以使藥敏試驗更加迅速、準確。

對水生動物致病菌的藥敏試驗結果不僅可為科學地選擇治療藥物提供重要參考，避免漁用藥物的濫用或者誤用，而且通過監(jiān)控病原菌的耐藥性變遷，還可用于評價研制漁用藥物中新藥的抗菌譜和抗菌活性等藥效學特征。目前，在水生動物疾病防控中濫用抗生素的現(xiàn)象比較普遍，致使抗藥致病菌急劇增加，甚至因長期大量使用廣譜抗生素，大量殺傷了水生動物體內正常微生物，失去微生物的相互制約作用，從而使一些少見的或一般情況下的非致病菌大量繁殖，引起所謂“二次感染”的情況屢有發(fā)生，給藥物治療水生動物感染性疾病造成人為的困難。因此，在水產養(yǎng)殖中提倡對水生動物致病菌進行藥敏試驗，對于做到精準用藥和堅持合理用藥是十分重要的。

目前常用的藥敏試驗方法有：紙片瓊脂擴散法（K-B法）、稀釋法、E試驗、檢測細菌耐藥性的方法。稀釋法又可分為液體稀釋法和瓊脂稀釋法。在人醫(yī)和獸醫(yī)方面，檢測細菌耐藥性的方法還包括耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）的檢測、耐萬古霉素腸球菌（VER）的檢測、耐青霉素肺炎鏈球菌（PRP）的檢測、超廣譜β-內酰胺酶（ESBL）的檢測和β-內酰胺酶的檢測。

對于水生動物致病菌藥敏試驗主要采用紙片瓊脂擴散法（K-B法）和稀釋法進行。

1）紙片瓊脂擴散法（K-B法）

該方法是將含有定量抗菌藥物的藥敏片（藥敏片），貼在已接種了待測試致病菌的瓊脂培養(yǎng)基表面上，藥敏片中所含的藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴散，隨著擴散距離的增加，抗菌藥物的濃度呈對數減少，在紙片的周圍形成藥物濃度梯度。導致藥敏片周圍能抑菌的藥物濃度范圍內的致病菌不能生長，而處于藥物抑菌濃度范圍外的致病菌則可以生長。因此，在藥敏片周圍形成透明的抑菌圈。不同抑菌藥物的抑菌圈直徑因受藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴散速度的影響而可能不同，抑菌圈的大小即可以反映測試致病菌對藥物的敏感程度，并與該藥物對測試致病菌的MIC相關。

藥敏片可以購買或者自制。自制藥敏片時，取新華1號定性濾紙，用打孔機將其打成6.0毫米直徑的圓形紙片。取圓形紙片50片放入清潔干燥的青霉素空瓶中，瓶口以單層牛皮紙包扎。經15磅15～20分鐘高壓消毒后，放在37℃溫箱或烘箱中數天，使其完全干燥。

接著，向上述含有50片濾紙片的青霉素瓶內加入藥液0.25mL，并翻動濾紙片，使各濾紙片充分浸透藥液，翻動濾紙片時不能將其搗爛。同時在瓶口上記錄藥物名稱，放37℃溫箱內過夜，待其干燥后即密封，如有條件可真空干燥。切勿讓藥敏片受潮，置陰暗干燥處保存，制作好的藥敏片的有效期一般為3～6個月。

需要注意的是藥敏片的質量一定要標準，這是做好藥敏試驗的關鍵。如果藥敏片質量參差不齊（制作藥物紙片時，如果選擇的濾紙厚薄不一致，或者有缺損，就會導制備的藥敏片中藥物含量不均勻），常常引起抑制菌環(huán)不規(guī)則，使藥敏結果判斷不準確。因此，藥敏片間差和準確度都一定要達到標準。同時，為了保持藥敏片中的藥物活性，藥敏片的pH一般要求為中性；同時將其置放低溫條件（-10℃）下保存，避免潮濕。盛裝藥敏片的容器自低溫處取出時，應放置在室溫條件下平衡至少10分鐘后再打開包裝容器，避免冷凝水影響到藥效。

（未完待續(xù)）