王小青， 高 楊， 董永彩， 商亞珍△

(1河北省中醫(yī)藥抗癡呆重點(diǎn)研究室， 河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所， 2承德鋼鐵集團(tuán)有限公司總醫(yī)院， 河北 承德 067000)

神經(jīng)退行性疾病是大腦和脊髓的細(xì)胞神經(jīng)元喪失的疾病狀態(tài)，隨著世界人口老齡化的日益加重，該病發(fā)病率逐年增加，當(dāng)今已經(jīng)成為繼心血管疾病、腫瘤和腦卒中之后老年人的第4大死亡原因[1]。阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)是最常見(jiàn)的神經(jīng)退行性疾病，其主要臨床癥狀是記憶漸進(jìn)性減退，神經(jīng)病理上腦內(nèi)神經(jīng)元纖維纏結(jié)(neurofibrillary tangles，NFTs)和老年斑(senile plaques，SPs)的形成被認(rèn)為是最主要的發(fā)病原因。NFTs是由胞內(nèi)微管相關(guān)蛋白tau高度磷酸化形成的雙螺旋細(xì)絲(paired helical filaments，PHFs)積聚而成[2]。到目前為止，導(dǎo)致PHFs生成的內(nèi)在機(jī)制還不完全清楚，普遍認(rèn)為其可能與蛋白磷酸酶(protein phosphatase，PP)調(diào)節(jié)失衡有關(guān)。蛋白磷酸酶2A(PP2A)對(duì)tau蛋白的脫磷酸化作用占所有相關(guān)的蛋白磷酸酶作用的70%，而蛋白磷酸酶1(PP1)和蛋白磷酸酶2B(PP2B)等的作用則僅占到10%甚至更少[3]。另外，有報(bào)道表明抑制小鼠腦內(nèi)蛋白磷酸酶2C(PP2C)的活性可以減輕高膽固醇引起小鼠神經(jīng)毒性反應(yīng)[4]。在AD病人腦中蛋白磷酸酶活性顯著降低，因此，上調(diào)蛋白磷酸酶活性，增加磷酸化tau蛋白脫磷酸化、減少磷酸化tau蛋白含量，阻止PHF在神經(jīng)元內(nèi)形成NFT可能會(huì)成為治療AD的重要手段之一。

文獻(xiàn)報(bào)道，腦內(nèi)注射岡田酸(okadaic acid，OA)特異性地抑制PP1和PP2A的活性，可引起記憶障礙并伴隨神經(jīng)病理學(xué)改變，包括海馬神經(jīng)變性、tau蛋白配對(duì)的螺旋絲樣磷酸化以及形成含有β-淀粉樣蛋白(amyloid β-protein，Aβ)的斑塊狀結(jié)構(gòu)，并且實(shí)驗(yàn)證明其能使tau蛋白過(guò)度磷酸化從而很好的模擬AD樣病理學(xué)特征[5]。

黃芩莖葉黃酮(flavonoids from stem and leaf ofScutellariabaicalonsisGeorgi，SSF)是從黃芩地上部分分離的黃酮類化合物，以往研究已經(jīng)證明，SSF具有較強(qiáng)的抗氧化、抗炎、抗腫瘤、降壓、降血脂、解熱、鎮(zhèn)痛及調(diào)節(jié)自由基和能量代謝的作用，能夠改善氯化鋁(AlCl3)、D-半乳糖、β-淀粉樣蛋白和慢性腦缺血等引起的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)習(xí)記憶障礙[6-10]，但對(duì)OA所致大鼠腦內(nèi)PHF異常生成及相關(guān)蛋白磷酸酶的影響尚未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)利用大鼠側(cè)腦室注射OA建立大鼠記憶障礙模型，探討SSF對(duì)OA誘導(dǎo)的PHF異常生成及PP1、PP2A-Cα、PP2A-Cβ、PP2CA和PP2CB蛋白表達(dá)的影響，研究上述蛋白磷酸酶在SSF抑制PHF異常生成中的調(diào)節(jié)機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和試劑

雄性清潔級(jí)Sprague-Dawley(SD)大鼠，體重250～300 g，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)為810034。

岡田酸購(gòu)于Sigma；SSF由承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所提供，純度為87.11%；RIPA組織/細(xì)胞裂解液和PMSF購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；BCA蛋白定量試劑盒購(gòu)于碧云天生物技術(shù)公司；預(yù)染蛋白marker購(gòu)于Thermo；抗PHF、PP1、PP2A-Cα，PP2A-Cβ、PP2CA和PP2CB抗體購(gòu)于北京博奧森生物技術(shù)有限公司；辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔IgG購(gòu)于中杉金橋生物技術(shù)有限公司；ECL超敏發(fā)光液試劑盒購(gòu)于北京普利來(lái)基因技術(shù)有限公司；陽(yáng)性對(duì)照藥銀杏葉黃酮(GinKgobilobaleaf flavonoids，GLF)由貴州信邦制藥有限公司提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1大鼠記憶障礙模型的建立和篩選 健康雄性SD大鼠，實(shí)驗(yàn)室適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，術(shù)前禁食12 h。腹腔注射10%水合氯醛(300 mg/kg)麻醉，常規(guī)消毒，固定于大鼠腦立體定位儀，顱頂正中矢狀切開(kāi)，暴露硬腦膜，標(biāo)記前囟點(diǎn)位置。參照包新民編著《大鼠腦立體定位圖譜》，以前囟點(diǎn)為坐標(biāo)原點(diǎn)，于前囟點(diǎn)后0.8 mm和中線右側(cè)旁開(kāi)1.3 mm確認(rèn)入針點(diǎn)，三棱錐鉆一直徑為0.2 mm的孔，將帶內(nèi)芯的穿刺套管從進(jìn)針點(diǎn)垂直插入3.5 mm，緩慢旋出導(dǎo)管內(nèi)芯，見(jiàn)腦脊液溢出后把內(nèi)芯置回。以牙托粉固定穿刺套管，縫合頭部皮膚并消毒，將200 ng/kg OA(10% DMSO溶解配制)分2次注入，2次注射時(shí)間間隔3 d。假手術(shù)(sham)組大鼠做同樣手術(shù)但腦室注入等體積的含10% DMSO的生理鹽水溶液。第2次注射后，每籠4只大鼠恢復(fù)飼養(yǎng)21 d，用Morris水迷宮訓(xùn)練進(jìn)行篩選，以第4天水迷宮訓(xùn)練成績(jī)作為癡呆模型成模標(biāo)準(zhǔn)[8,11]。

2.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及樣品制備 將40只造模成功大鼠隨機(jī)分為5組，模型(model)組、25、50和100 mg/kg SSF 3個(gè)劑量SSF(分別為SSF25、SSF50和SSF100)組和GLF組。3個(gè)劑量SSF組和GLF組大鼠分別連續(xù)灌胃SSF 25、50和100 mg/kg及GLF 200 mg/kg 36 d(每天1次)，假手術(shù)組和模型組取等體積蒸餾水灌胃。SSF先用飽和碳酸氫鈉溶解，使藥液pH為7.2～7.4，再用蒸餾水稀釋到所需濃度。大鼠手術(shù)后第65天，即給藥第36天，所有大鼠在給藥后60 min乙醚麻醉，斷頭處死，冰上分離大腦皮層與海馬組織，稱重迅速放在1.5 mL無(wú)RNA酶的EP管中，凍存于-80 ℃超低溫冰柜中備用。

2.3Western blot法檢測(cè)大鼠大腦皮層與海馬中PHF及PP1、PP2A-Cα、PP2A-Cβ、PP2CA和PP2CB的蛋白表達(dá) 將凍存的各組大鼠皮層與海馬組織用勻漿器冰上勻漿，用RIPA裂解液提取相應(yīng)組織總蛋白，BCA法測(cè)定樣品蛋白濃度。在蛋白樣品中加入5×上樣緩沖液，100 ℃沸水變性3 min。在12% SDS-PAG中用120 V恒壓電泳分離蛋白，250 mA恒流濕轉(zhuǎn)膜2 h，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜。5% 脫脂奶粉溶液封閉2 h，分別加入抗PHF、PP1、PP2A-Cα、PP2A-Cβ、PP2CA和PP2CB的I抗(1∶500)4 ℃過(guò)夜，用TBST緩沖液漂洗5次，每次5 min，分別加入相應(yīng)的II抗孵育2 h，TBST 緩沖液漂洗5次，每次5 min。使用ECL化學(xué)發(fā)光劑進(jìn)行曝光并顯影。膠片掃描后采用 Quantity One 4.6.2 軟件對(duì)顯影條帶進(jìn)行分析，以目的蛋白與內(nèi)參照β-actin蛋白的灰度比值作為目的蛋白的相對(duì)表達(dá)量。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

利用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，GraphPad Prism 5.0作圖，所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。多樣本均數(shù)間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)，方差齊組按照Bonferroni檢驗(yàn)，方差不齊組按照Games-Howell檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 大鼠記憶障礙模型篩選

Morris水迷宮訓(xùn)練中隨著訓(xùn)練天數(shù)的延長(zhǎng)，所有大鼠找到平臺(tái)的潛伏期都逐漸降低，且假手術(shù)組大鼠找到平臺(tái)的潛伏期明顯低于腦室注射OA大鼠。根據(jù)第4天每只腦室注射OA大鼠與假手術(shù)組大鼠的成功篩選率(screeing ratio，SR)大于0.2計(jì)算，本實(shí)驗(yàn)大鼠存活率和模型成功率分別為95%和81.67%[12]。

2 SSF對(duì)各組大鼠皮層與海馬中PHF和蛋白磷酸酶蛋白表達(dá)的影響

大鼠側(cè)腦室注射OA(200 ng/Kg)建立記憶障礙模型，模型成功后分別用25、50和100 mg/kg SSF灌胃36 d，采用Western blot法測(cè)定大鼠大腦皮層與海馬組織中PHF、PP1、PP2A-Cα、PP2A-Cβ、PP2CA和PP2CB的蛋白表達(dá)，GLF作為陽(yáng)性對(duì)照藥，上述蛋白的Western blot結(jié)果見(jiàn)圖1。

Figure 1. The effects of SSF on the expression of PHF and protein phosphatase in rat cortex and hippocampus induced by OA.

圖1SSF對(duì)各組大鼠皮層與海馬中PHF和蛋白磷酸酶表達(dá)的影響

2.1SSF 對(duì)各組大鼠皮層與海馬中PHF蛋白表達(dá)量的影響 與假手術(shù)組比較， 側(cè)腦室注射OA(200 ng/kg)可使大鼠皮層與海馬中PHF的蛋白表達(dá)量均明顯增加(P<0.01)；與模型組相比，3個(gè)劑量的SSF不同程度地逆轉(zhuǎn)OA所引起的大鼠皮層與海馬中PHF的蛋白表達(dá)的增加(P<0.01)； GLF也表現(xiàn)出與SSF類似的作用結(jié)果，PHF蛋白表達(dá)量均降低(P<0.01)，見(jiàn)圖2。

2.2SSF對(duì)各組大鼠皮層與海馬中PP1蛋白表達(dá)量的影響 Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與假手術(shù)組相比，側(cè)腦室注射OA(200 ng/kg)可使大鼠皮層中PP1的蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.05)；與模型組相比，3個(gè)劑量的 SSF給藥36 d后模型大鼠皮層中PP1的蛋白均增加(P<0.05)，GLF亦使大鼠皮層中PP1蛋白表達(dá)量升高(P<0.01)。但SSF及GLF對(duì)大鼠海馬中PP1蛋白表達(dá)量無(wú)顯著性影響，見(jiàn)圖3。

Figure 2. The effects of SSF on the expression of PHF in rat cortex and hippocampus induced by OA. Mean±SD.n=6.##P<0.01vssham group;**P<0.01vsmodel group.

圖2SSF對(duì)OA誘導(dǎo)的大鼠皮層與海馬中PHF蛋白表達(dá)量的影響

Figure 3. The effects of SSF on the expression of PP1 in rat cortex and hippocampus induced by OA. Mean±SD.n=6.#P<0.05vssham group;*P<0.05,**P<0.01vsmodel group.

圖3SSF對(duì)OA誘導(dǎo)的大鼠皮層與海馬中PP1蛋白表達(dá)量的影響

2.3SSF對(duì)各組大鼠皮層與海馬中PP2A-Cα和PP2A-Cβ蛋白表達(dá)量的影響 側(cè)腦室注射OA(200 ng/kg)可減少大鼠腦中PP2A-Cα和PP2A-Cβ的蛋白表達(dá)，與假手術(shù)組相比，model組大鼠皮層和海馬中PP2A-Cα和PP2A-Cβ蛋白表達(dá)均降低(P<0.05)；灌胃給予SSF 25、50 和 100 mg/kg治療36 d均可逆轉(zhuǎn)OA引起的大鼠皮層與海馬中PP2A-Cα和PP2A-Cβ蛋白表達(dá)的降低(P<0.01)； GLF具有與SSF類似的結(jié)果，使大鼠皮層與海馬中PP2A-Cα和PP2A-Cβ蛋白表達(dá)均增加(P<0.01)，見(jiàn)圖4、5。

Figure 4. The effects of SSF on the expression of PP2A-Cα in rat cortex and hippocampus induced by OA. Mean±SD.n=6.##P<0.01vssham group;**P<0.01vsmodel group.

圖4SSF對(duì)OA誘導(dǎo)的大鼠皮層與海馬中PP2A-Cα蛋白表達(dá)量的影響

Figure 5. The effects of SSF on the expression of PP2A-Cβ in rat cortex and hippocampus induced by OA. mean±SD.n=6.#P<0.05,##P<0.01vssham group;**P<0.01vsmodel group.

圖5SSF對(duì)OA誘導(dǎo)的大鼠皮層與海馬中PP2A-Cβ蛋白表達(dá)量的影響

2.4SSF對(duì)各組大鼠皮層與海馬中PP2CA蛋白表達(dá)量的影響 Western blot顯示，與假手術(shù)組相比，側(cè)腦室注射OA(200 ng/kg)可顯著增加大鼠皮層中PP2CA的蛋白含量(P<0.01)； 與模型組相比，100 mg/kg SSF可增加大鼠皮層中PP2CA的表達(dá)(P<0.01); GLF也表現(xiàn)出與SSF類似的作用結(jié)果，與model組相比，皮層PP2CA蛋白表達(dá)量升高(P<0.01),見(jiàn)圖6。

Figure 6. The effects of SSF on the expression of PP2CA in rat cortex and hippocampus induced by OA. Mean±SD.n=6.##P<0.01vssham group;**P<0.01vsmodel group.

圖6SSF對(duì)OA誘導(dǎo)的大鼠皮層與海馬中PP2CA蛋白表達(dá)量的影響

2.6SSF對(duì)各組大鼠皮層與海馬中PP2CB蛋白表達(dá)量的影響 與假手術(shù)組相比，側(cè)腦室注射OA(200 ng/kg)可增加大鼠皮層中PP2CB的蛋白含量(P<0.01)，降低海馬中PP2CB的蛋白含量(P<0.01)；與模型組相比，3個(gè)劑量SSF治療36 d可不同程度地調(diào)節(jié)OA引起的大鼠皮層與海馬中PP2CB的蛋白表達(dá)， 其中，50和100 mg/kg SSF可顯著提高皮層中PP2CB的表達(dá)(P<0.01)，而100 mg/kg SSF顯著降低海馬中PP2CB的表達(dá)(P<0.05)， GLF呈現(xiàn)相似的作用，與模型組相比，GLF組PP2CB皮層蛋白表達(dá)量升高(P<0.01)，海馬蛋白表達(dá)量降低(P<0.05)，見(jiàn)圖7。

討 論

Tau蛋白是神經(jīng)細(xì)胞主要的微管相關(guān)蛋白，其對(duì)促進(jìn)微管形成和穩(wěn)定微管系統(tǒng)起著重要作用。在AD患者腦中tau蛋白發(fā)生過(guò)度磷酸化，使tau蛋白喪失了其正常生理學(xué)功能，并積聚形成PHF，PHF具有極強(qiáng)的神經(jīng)毒性，它們主要沉積在神經(jīng)元軸突，也存在于神經(jīng)元胞體，大量PHF聚合而成的NFT可誘導(dǎo)神經(jīng)元受損及變性，干擾神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)，進(jìn)而導(dǎo)致神經(jīng)結(jié)構(gòu)與功能障礙。Tau蛋白異常磷酸化是造成癡呆的主要原因之一，與AD患者臨床癡呆程度呈正相關(guān)。OA是一種稱為腹瀉性貝毒的天然毒素，它由38碳聚醚脂肪酸構(gòu)成，能夠滲透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)，與PP2A-C L7環(huán)序列CYRCG結(jié)合， 抑制PP2A活性[13]。OA可誘導(dǎo)離體培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元中tau蛋白過(guò)度磷酸化，在體內(nèi)能促進(jìn)Aβ沉積，造成神經(jīng)元退化，突觸缺失及記憶障礙，產(chǎn)生類AD樣病理特征， 已成為研究AD疾病過(guò)程的常用工具藥[14]。

Figure 7. The effects of SSF on the expression of PP2CB in rat cortex and hippocampus induced by OA. Mean±SD.n=6.##P<0.01vssham group;*P<0.05,**P<0.01vsmodel group.

圖7SSF對(duì)OA引起大鼠皮層與海馬中PP2CB蛋白表達(dá)量的影響

前期研究發(fā)現(xiàn)，SSF可改善OA引起的神經(jīng)元損傷，減少Aβ1-40和丙二醛沉積，增強(qiáng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶和乳酸脫氫酶活性[9]。本研究發(fā)現(xiàn)，腦室注射OA可引起大鼠皮層與海馬中PHF顯著升高，而3個(gè)劑量SSF不同程度地降低大鼠腦內(nèi)PHF表達(dá)，據(jù)此，SSF可作為治療AD的候選藥物。

AD患者腦中PHF異常生成與蛋白磷酸酶下調(diào)有關(guān)[15]，根據(jù)底物蛋白分子上磷酸化的氨基酸殘基的種類，可將蛋白磷酸酶分為3類：絲氨酸(Ser)/蘇氨酸(Thr)型蛋白磷酸酶(PPP)、Mg2+依賴性Ser/Thr型蛋白磷酸酶(PPM)和Tyr型蛋白磷酸酶(PTP)。另外，根據(jù)其底物特異性、對(duì)抑制物的敏感程度以及對(duì)不同離子的需求，可將Ser/Thr型蛋白磷酸酶分成4類：1型、2A型、2B型和2C型，分別用PP1、PP2A、PP2B和PP2C代表。PP1、PP2A和PP2B在結(jié)構(gòu)上有較大的相似性，編碼這3個(gè)亞族的基因都屬于PPP基因家族，研究顯示PPP與tau蛋白磷酸化關(guān)系最為密切[16]。

PP1為Ser/Thr型蛋白磷酸酶，特異性地集中在神經(jīng)元樹(shù)突棘內(nèi)[17]，其主要作用于磷酸酶激酶的β亞單位，對(duì)哺乳動(dòng)物磷酸酶激酶亞基的脫磷酸化活力較高，受內(nèi)源蛋白抑制物1、2(inhibltor-1、2，I-1、2)的抑制[18]。有研究發(fā)現(xiàn)， PP1必需與ATP/Mg2+孵育后方可被糖原合成酶激酶3激活，大腦中ATP/Mg依賴的PPl，通過(guò)I-2的磷酸化作用而使PP1有活性[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠腦室注射OA可引起PP1蛋白表達(dá)的降低，與OA為PP1特異性抑制劑相符，而3個(gè)劑量的SSF可顯著升高大鼠皮層中PP1的蛋白表達(dá)，由此可見(jiàn)，SSF可以逆轉(zhuǎn)OA導(dǎo)致的PP1活性降低。

PP2A是參與tau蛋白磷酸化的關(guān)鍵酶之一[13]，在tau蛋白脫磷酸化中發(fā)揮著非常重要的作用，PP2A作用于蛋白磷酸激酶的α亞單位，且不受I-1和I-2的抑制。PP2A以核心酶和全酶2種形式存在。核心酶由65 kD的結(jié)構(gòu)亞基A(PP2A-A)與36 kD的催化亞基C(PP2A-C)構(gòu)成，另有分子量為50～130 kD 不等的調(diào)節(jié)亞基B(PP2A-B)與核心酶結(jié)合形成三聚體的全酶。催化亞單位PP2A-C由309個(gè)氨基酸組成，分子量為36 kD，以Cα和Cβ兩個(gè)異構(gòu)體存在，由相應(yīng)的基因編碼，它們的序列相似有97%。在哺乳動(dòng)物的心臟和大腦中PP2A-C高度表達(dá)，并且主要是分布在細(xì)胞質(zhì)和核中，Lammers等[19]報(bào)道PP2A-C可以不依賴于A、B亞基而啟動(dòng)蛋白質(zhì)翻譯與終止來(lái)維持PP2A活性。本研究發(fā)現(xiàn)，大鼠側(cè)腦室注射OA可使PP2A-Cα與PP2A-Cβ表達(dá)顯著降低，與OA可特異性抑制PP2A活性有關(guān)，3個(gè)劑量SSF均不同程度地增加了PP2A-Cα與PP2A-Cβ在大鼠皮層與海馬中的表達(dá)，由此可知，SSF可逆轉(zhuǎn)OA導(dǎo)致的PP2A活性降低。

PP2C是Mg2+/Mn2+依賴性單體酶，其在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核或線粒體中具有特定的位置[20]。由于它們是唯一的金屬依賴類型的PP，它們也被稱為PPM，與其他3個(gè)亞族關(guān)系較遠(yuǎn)，有著不同的進(jìn)化背景，可控制哺乳動(dòng)物細(xì)胞和植物中的應(yīng)激信號(hào)通路。Jones等[21]表明，PPM1A(PP2CA)和PPM1B(PP2CB)蛋白的膜結(jié)合需要N-肉豆蔻?；部赡苡糜谧R(shí)別其生理目標(biāo)，另外， Lu等[4]報(bào)道，槲皮素可抑制高膽固醇誘導(dǎo)的小鼠腦中PP2C的表達(dá)，從而減少相關(guān)小鼠的神經(jīng)毒性。本研究發(fā)現(xiàn)，腦室注射OA使大鼠皮層中PP2CA和PP2CB蛋白表達(dá)升高，而海馬中PP2CA蛋白表達(dá)變化較小，而3個(gè)劑量的SSF并未逆轉(zhuǎn)OA對(duì)PP2CA及PP2CB蛋白表達(dá)的影響。

除海馬中PP1外，GLF的作用皆與SSF相似，但從量效關(guān)系上講，SSF的作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于GLF。綜上所述，SSF抑制OA大鼠腦內(nèi)PHF蛋白表達(dá)，可能是通過(guò)調(diào)節(jié)皮層與海馬區(qū)PP1、PP2A-Cα及PP2A-Cβ活性來(lái)共同完成的。

[1] 李國(guó)徽， 陳 凌， 麥鳳香， 等. 阿爾茨海默病病因病機(jī)研究進(jìn)展 [J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志, 2015, 35(20):5955-5957.

[2] Spires-Jones TL, Stoothoff WH, de Calignon A, et al. Tau pathophysiology in neurodegeneration: a tangled issue[J]. Trends Neurosci, 2009, 32(3):150-159.

[3] Liu F, Grundke-Iqbal I, Iqbal K, et al. Contributions of protein phosphatases PP1, PP2A, PP2B and PP5 to the regulation of tau phosphorylation [J]. Eur J Neurosci, 2005, 22(8):1942-1950.

[4] Lu J, Wu DM, Zheng YL, et al. Quercetin activates AMP-activated protein kinase by reducing PP2C expression protecting old mouse brain against high cholesterol-induced neurotoxicity[J]. J Pathol, 2010, 222(2):199-212.

[5] Yin YY, Liu H, Cong XB, et al. Acetyl-L-carnitine attenuates okadaic acid induced tau hyperphosphorylation and spatial memory impairment in rats[J]. J Alzheimers Dis, 2010, 19(2):735-746.

[6] 王瑞婷， 張建新， 董雅潔. 黃芩莖葉總黃酮對(duì)AD大鼠模型海馬神經(jīng)元超微結(jié)構(gòu)的影響及抗氧化作用[J]. 中國(guó)老年學(xué)雜志, 2010, 30(7):926-928.

[7] Shang YZ, Qin BW, Cheng JJ, et al. Prevention of oxidative injury by flavonoids from stems and leaves ofScutellariabaicalensisGeorgi in PC12 cells[J]. Phytother Res, 2006, 20(1):53-57.

[8] Wu XG, Wang SS, Miao H, et al.Scutellariabarbataflavonoids alleviate memory deficits and neuronal injuries induced by composited Aβ in rats[J]. Behav Brain Funct, 2016, 12(1):33-43.

[9] Zhang SF, Dong YC, Zhang XF, et al. Flavonoids from Scutellaria attenuate okadaic acid-induced neuronal damage in rats[J]. Brain Inj, 2015, 29(11):1376-1382.

[10] 王玉梅， 劉永平， 曹 凱， 等. 黃芩莖葉黃酮對(duì)慢性腦缺血大鼠腦內(nèi)NMDA受體和VEGF表達(dá)的影響[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2012, 28(2):353-357.

[11] 郭 可， 繆 紅， 王樹(shù)松， 等. 半枝蓮黃酮抑制復(fù)合Aβ所致大鼠皮層細(xì)胞NFT沉積及其調(diào)節(jié)機(jī)制[J]. 中國(guó)病理生理雜志, 2016, 32(12):2147-2156.

[12] 萬(wàn)紫旭. 黃芩黃酮對(duì)岡田酸所致大鼠記憶障礙的改善作用[D]. 承德： 承德醫(yī)學(xué)院, 2010.

[13] Torrent L, Ferrer I. PP2A and Alzheimer disease[J]. Curr Alzheimer Res, 2012, 9(2):248-256.

[14] Iqbal K, Liu F, Gong CX, et al. Mechanisms of tau-induced neurodegeneration[J]. Acta Neuropathol, 2009, 118(1):53-69.

[15] Millward TA, Zolnierowicz S, Hemmings BA. Regulation of protein kinase cascades by protein phosphatase 2A[J]. Trends Biochem Sci, 1999, 24(5):186-191.

[16] Rahman A, Grundke-Iqbal I, Iqbal K. Phosphothreonine-212 of Alzheimer abnormally hyperphosphorylated tau is a preferred substrate of protein phosphatase-1[J]. Neurochem Res, 2005, 30(2):277-287.

[17] 陳金煥， 夏新莉， 尹偉倫， 等. 植物2C類蛋白磷酸酶及其在逆境信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用 [J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào), 2010, 32(5):168-171.

[18] Baharians Z, Sch?nthal AH. Autoregulation of protein phosphatase type 2A expression[J]. J Biol Chem, 1998, 273(30):19019-19024.

[19] Lammers T, Lavi S. Role of type 2C protein phosphatases in growth regulation and in cellular stress signaling[J]. Crit Rev Biochem Mol Biol, 2007, 42(6):437-461.

[20] Chida T, Ando M, Matsuki T, et al. N-Myristoylation is essential for protein phosphatases PPM1A and PPM1B to dephosphorylate their physiological substrates in cells[J]. Biochem J, 2013, 449(3):741-749.

[21] Jones NC, Nguyen T, Corcoran, NM, et al. Targeting hyperphosphorylated tau with sodium selenate suppresses seizures in rodent models[J]. Neurobiol Dis, 2012, 45(3):897-901.