探討CD146在人骨肉瘤患者組織中的表達(dá)及其臨床意義

邱楓 王曉菲 朱明瀚

骨肉瘤是骨骼系統(tǒng)惡性腫瘤疾病，青少年也有不少患者發(fā)病，小兒患者的發(fā)病率大約是5%，該疾病對(duì)人類的生存產(chǎn)生了威脅。早期骨瘤肉患者（Enneking IIA期）的癥狀較輕，一般不容易覺察到，大部分患者都是在中晚期時(shí)確診?，F(xiàn)在新型輔助化療和外科治療相結(jié)合的方式獲得一定的進(jìn)展，因此，骨肉瘤患者的5年生存率能夠提升至60%[1]，但還有50%的患者會(huì)出現(xiàn)肺轉(zhuǎn)移，而肺轉(zhuǎn)移患者的5年生存率大約是10%～15%[2-5]。研究顯示，人體有許多的惡性腫瘤都呈現(xiàn)CD146高表達(dá)狀態(tài)[6-8]。腫瘤的生長需要依靠血管提供氧和營養(yǎng)，惡性腫瘤細(xì)胞進(jìn)入附近的腫瘤血管，以此為擴(kuò)散途徑。因此，腫瘤的生長、浸潤、轉(zhuǎn)移等過程都和腫瘤血管有關(guān)。但對(duì)于其在骨肉瘤的發(fā)生和發(fā)展作用的研究比較少，此次采取了免疫組織化學(xué)檢驗(yàn)，檢測CD146表達(dá)情況，并統(tǒng)計(jì)患者的微血管密度（microvessel density，MVD），探討CD146表達(dá)對(duì)骨肉瘤患者的意義，現(xiàn)進(jìn)行以下報(bào)道。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院接收的骨肉瘤患者50例開展研究分析，其中有20例女性患者和30例男性患者，患者年齡最小7歲，最大31歲，平均（20.0±2.3）歲，經(jīng)病理診斷確診為骨肉瘤。

1.2 試劑及儀器

CD146：上游引物5'-GAAAAAGTGTGGCTGGAAGT-3'，下游引物5'-GTTGTCGTTGGTTGTCTC TT-3'；內(nèi)參基因：核糖體蛋白S18：上游引物5'-CGA TGG GCGGCG GAA AAT A-3'，下游引物5'-CTGCTTTCCTCAACACCACA-3'； QPCR 反應(yīng)儀為ABI 7500（ABI公司）；日本Olympus BX51 光學(xué)顯微鏡；Real Time反應(yīng)試劑盒（OMEGA公司）；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（Sigma公司）；總蛋白提取試劑盒（BestBio公司）。鼠抗人CD146單克隆抗體（美國Santa Cruz 公司產(chǎn)品）。CD34 鼠抗人單克隆抗體、抗鼠即用型快速免疫組化MaxVisionTM 檢測試劑盒及DAB 染色試劑盒（福州邁新生物技術(shù)有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

CD146及CD34的免疫組化檢測：將骨肉瘤及骨肉瘤周圍非惡性組織標(biāo)本制成4 μm切片，參照試劑盒說明書進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。簡要過程如下：切片用二甲苯脫蠟后浸泡，高壓抗原修復(fù)，血清封閉加一抗，4℃孵育過夜，再復(fù)溫后加入二抗，孵育。用DAB顯色，蘇木精對(duì)比染色后脫水、透明、封片。在光鏡下觀察結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 16.0軟件完成統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)量資料用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

骨肉瘤患者的組織內(nèi)CD146以陽性表達(dá)為主，全部患者的切片中，有36例陽性，14例陰性，陽性率是72%。染色結(jié)果顯示所有骨肉瘤切片中CD34均呈陽性表達(dá)，根據(jù)Weidner的計(jì)數(shù)方法，骨肉瘤組中的MVD平均值為（48.68±4.00），周圍非惡性組織的MVD平均值為（10.27±3.00），兩者對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3 討論

骨肉瘤是現(xiàn)在對(duì)青少年生命產(chǎn)生較大威脅的疾病，臨床中需要尋找可靠有效的治療方式，腫瘤血管生成以及它對(duì)腫瘤的發(fā)展，轉(zhuǎn)移，侵襲等過程產(chǎn)生的作用是研究的新方向[6-8]。腫瘤無血管階段獲取的營養(yǎng)物質(zhì)以及清除代謝物質(zhì)都是通過附近組織彌散作用來完成的，腫瘤增殖到一定程度就會(huì)產(chǎn)生血管，這就是血管期；因?yàn)樾律芙Y(jié)構(gòu)不完整，不成熟，易被腫瘤細(xì)胞侵襲破壞。腫瘤組織的新生血管數(shù)量和腫瘤增生速度成正比，和轉(zhuǎn)移的幾率呈正比，和患者的生存期限呈反比。

此次研究中，骨肉瘤患者的組織內(nèi)CD146以陽性表達(dá)為主，全部患者的切片中，有36例陽性，14例陰性，陽性率是72%。在光學(xué)顯微鏡下可見CD146表達(dá)陰性陽性判斷是根據(jù)胞膜或胞漿中的顆粒顏色和胞質(zhì)內(nèi)的棕黃色顆粒出現(xiàn)情況來判斷，在前者中出現(xiàn)為陽性，在后者中出現(xiàn)為陰性?；颊叩腃D146表達(dá)和骨肉瘤分期和肺轉(zhuǎn)移情況有直接聯(lián)系（P＜0.01）。

總之，骨肉瘤組織的CD146表達(dá)可以作為診斷骨肉瘤的指標(biāo)和依據(jù)，對(duì)其進(jìn)行監(jiān)控，能夠?qū)颊叩牟∏榘l(fā)展程度和轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行了解，為臨床治療提供更加多的有用信息，臨床中對(duì)于這方面的研究應(yīng)該繼續(xù)深入。

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