樊秀敏

（遼寧省朝陽(yáng)市建平縣畜產(chǎn)品安全監(jiān)察所，遼寧 朝陽(yáng) 122400）

金剛烷胺為禁止用于獸用的抗病毒藥品。金剛烷胺具有神經(jīng)毒性，能使中樞神經(jīng)系統(tǒng)受刺激或中毒，在食品中殘留，對(duì)心肺及腎功能不全者，還容易導(dǎo)致蓄積毒性。

1 酶聯(lián)免疫試劑盒準(zhǔn)備

金剛烷胺酶聯(lián)免疫試劑盒（Ⅳ型）。北京維德維康生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

2 原理

雞肉中的金剛烷胺與酶標(biāo)板上固定的金剛烷胺特異性競(jìng)爭(zhēng)抗體，當(dāng)雞肉中不含金剛烷胺或金剛烷胺含量很少時(shí)，更多的抗體就會(huì)與酶標(biāo)板上的金剛烷胺結(jié)合，結(jié)合物被固定在酶標(biāo)板上，加入酶標(biāo)記物以后，底物被催化顯色，根據(jù)顯色的深淺來(lái)判斷雞肉中金剛烷胺的含量。顯色越深，含量越少，顯色越淺，含量越多。

3 工作液準(zhǔn)備

3.1 樣品提取液 1份濃縮樣品提取液加19份去離子水。

3.2 樣品稀釋液 1份濃縮樣品稀釋液加9份去離子水。

3.3 洗滌工作液 1份濃縮洗滌液加19份去離子水。

3.4 酶標(biāo)記物工作液 1份酶標(biāo)記物濃縮液加10份酶標(biāo)記物稀釋液。

4 雞肉前處理

4.1 稱取2±0.05g均質(zhì)后的雞肉于50mL離心管中。

4.2 加入4mL樣品提取液充分渦動(dòng)5min。

4.3 離心機(jī)4000g以上，離心5min。

4.4 取0.2mL上清液于干凈離心管中，加入0.2mL樣品稀釋液充分渦動(dòng)10s。

4.5 取50μL進(jìn)行檢測(cè)。

5 檢測(cè)

5.1 根據(jù)樣品數(shù)量的多少取出相應(yīng)數(shù)量的酶標(biāo)板條固定在酶標(biāo)板架上，要求做兩個(gè)平行樣，標(biāo)記清楚標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的滴加位置。未使用的酶標(biāo)板條用自封袋密封后，立即保存期于2～8℃環(huán)境中。

5.2 將 50μL 各標(biāo)準(zhǔn)品工作液（0、0.1、0.3、0.9、2.7、8.1ppb）和50μL各樣品溶液分別加入對(duì)應(yīng)的酶標(biāo)板孔中。

5.3 各孔均加入50μL酶標(biāo)記物工作液，槍頭不能接觸到酶標(biāo)板孔中的液體。

5.4 把酶標(biāo)板用蓋板膜蓋好，輕輕振蕩酶標(biāo)板10s，使溶液充分混勻，在室溫（25±2℃）下避光反應(yīng)30min。

5.5 揭開(kāi)蓋板膜，把酶標(biāo)板孔中的液體倒凈，在每個(gè)孔中分別加入260μL洗滌工作液，充分洗滌4次，每次浸泡10～20s。

5.6 洗滌完畢后，倒掉酶標(biāo)板孔中洗滌工作液，將酶標(biāo)板倒倒置于吸水紙上，輕輕拍打到拍干。（用干凈的槍頭戳破孔底的氣泡，為防止交叉污染戳氣泡時(shí)要更換槍頭）

5.7 立即在每個(gè)孔中分別加入100μL底物A、B的混合液（底物A、B按1：1比例混合，混合液使用不能超過(guò)5min）。

5.8 把酶標(biāo)板用蓋板膜蓋好，輕輕振蕩酶標(biāo)板10s，使溶液充分混勻，在室溫（25±2℃）下避光反應(yīng)10min。

5.9 揭開(kāi)蓋板膜，各孔中分別加入50μL終止液，輕輕振蕩酶標(biāo)板10s，使溶液充分混勻。

5.1 0 加入終止液5min內(nèi)，用酶標(biāo)儀在雙波長(zhǎng)450nm、630 nm下讀取酶標(biāo)板吸光度值。

6 注意事項(xiàng)

6.1 試劑盒貯存于2～8℃環(huán)境中，切勿冷凍。

6.2 使用試劑盒前，應(yīng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。

6.3 請(qǐng)勿使用過(guò)期試劑盒，不同批號(hào)試劑盒中的試劑不能混用。

6.4 使用試劑盒前，將盒內(nèi)各組份放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上恢復(fù)至室溫25±2℃。

6.5 樣品處理前先恢復(fù)至室溫，處理完畢后應(yīng)立即檢測(cè)。

6.6 避免使用金屬類物質(zhì)盛裝和攪拌試劑。

6.7 各試劑在使用前應(yīng)搖勻，混合時(shí)避免出現(xiàn)氣泡。

6.8 酶標(biāo)板孔中加入樣品溶液、酶標(biāo)記物工作液、AB混合液、終止液各步驟時(shí)間不得超過(guò)3min。

6.9 終止液中含有強(qiáng)酸物質(zhì)，若不小心濺到皮膚或衣物上請(qǐng)立即用水沖洗。

6.1 0 檢測(cè)過(guò)程中所用槍頭不得重復(fù)使用。

做酶聯(lián)免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)是一項(xiàng)認(rèn)真謹(jǐn)慎的工作，把握好每一個(gè)環(huán)節(jié)都顯得尤為重要，只有嚴(yán)格按照操作要求去做，才能保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，同時(shí)對(duì)監(jiān)控違禁藥品的使用也具有重要意義。