液相色譜儀檢定中的方法及注意事項

馮偉杰

（鎮(zhèn)江市計量檢定測試中心， 江蘇 鎮(zhèn)江 212000）

引言

物質色譜分析的重要設備就是液相色譜儀，其在食品安全檢測、化學品等檢測領域被廣泛的應用著。計量檢定人員在使用液相色譜儀檢測時，經常會遇見包括儀器計量性能在內的很多問題，從而無法滿足JJ G705—2014《液相色譜儀檢定規(guī)程》規(guī)定的計量指標。文章以JJG 705—2014《液相色譜儀檢定規(guī)程》為依據詳細分析了液相色譜儀的檢定經驗，并以紫外-可見光檢測器為研究對象，結合實際工作對主要檢定項目如：泵流量、柱溫箱溫度設定值誤差和溫度穩(wěn)定性、基線噪聲和基線漂移、最小檢測濃度、整機性能（定性、定量重復性）的檢定及檢定中的注意事項談了幾點看法，希望能對液相色譜儀的檢定和發(fā)展起到一定的促進作用。

1 液相色譜儀檢定中的注意事項

1.1 泵流量檢定經驗分析

1.1.1 泵流量檢定的步驟

啟動儀器，流量結合規(guī)程要求進行設定，壓力平穩(wěn)后，在一定時間內將流動相進行收集，并通過秒表計時；而出口處的流動相使用清洗干凈的稱重容量瓶收集，并用天平進行稱重，重復測量三次；此時可通過JJ G705—2014《液相色譜儀檢定規(guī)程》中給出的公式，能夠對流量穩(wěn)定性SR、泵流量設定值誤差SS進行計算[1]。

1.1.2 泵流量檢定中的注意事項

1）首先需要保管好有關的試驗材料，再進行數據收集。并最好用一個人同時進行計時和流動相的收集，這樣可以最大程度地防止誤差出現；同時由于甲醇有揮發(fā)性，必須要對實驗的時間和速度進行良好把控。該人員還要按部就班地根據試驗程序進行操作，從而使實驗失誤以及經濟損失降低。在對流動相進行收集時需要將瓶口用封口膠密封，并且收集滿一瓶后立即稱重，并對收集的流動相進行換算時，需要注意保留到小數點以后的三位，并詳細地整理實驗記錄，從而最大程度保證實驗記錄的真實可靠。

2）與設定值相比，若實際流速較低，則需要對過濾頭、單向閥進行清洗或更換；一旦流速偏高，就要對壓縮補償調節(jié)和流速補償進行檢查，看是否有效。流量一旦出現不穩(wěn)定狀態(tài)，需要看是否有聚集氣泡存在泵頭內，有的話，將空閥打開，使泵高流速運行，確保氣泡排出。

1.2 柱溫箱檢定中的注意事項

1）柱溫箱溫度設定值誤差和溫度穩(wěn)定性檢定中的注意事項。在柱溫箱內固定數字溫度計的探頭，確保使其和色譜柱的位置相同，并選擇35℃和45℃進行檢定（也可按照用戶使用的溫度設置）。并參照液相色譜儀的使用說明書進行操作，在溫度升高并穩(wěn)定時，對數值進行記錄同時進行計時，并間隔10 min記錄一次數值，總計7次，并將平均值求出，通過JJ G705—2014《液相色譜儀檢定規(guī)程》中給出的公式進行計算，柱溫箱溫度設定值誤差△TS為平均值和設定值差，而柱溫箱溫度穩(wěn)定性TC是7次讀數中最小值、最大值差。

2）柱溫箱理論塔板數檢定中的注意事項。一般情況下，理論塔板數會因溫升而加大，導致峰與峰間距離縮小，但需要確保不改變每個峰面積。因此，在峰距縮小時，會增加峰高，故：溫度升高可以縮短保留時間；溫度降低卻相反，需要將保留時間進行延長[2]。

1.3 基線噪聲和基線漂移檢定中的注意事項

1.3.1 基線噪聲和基線漂移檢定的步驟

選擇流動相為100%的甲醇，色譜柱選用C18色譜柱選，1.0 mL/min的流量，254 nm的紫外檢測器的波長，并將檢測梁敏度調制到最靈敏處，打開機器進行充分的預熱，等到儀器穩(wěn)定后對基線記錄30 min，并對基線中噪聲最大的峰-峰高對應的信號值進行選取，并對基線噪聲進行計算，而基線漂移則選擇30min內基線偏離起始點最大的信號值。

1.3.2 基線噪聲和基線漂移檢定中的注意事項

1）在對漂移和噪聲進行檢定時，避免檢測器中有標準物質通過，并保證流動相只有100%的甲醇，必須保證儀器中除了甲醇不能有其他物質流動相。

2）當基線有毛刺和波動情況產生時，需要察看是否有空氣進入了流動相中，形成氣泡，并對氘燈穩(wěn)定情況進行等待，再看儀器接地狀態(tài)是否良好，如果有問題需要對氘燈進行更換。如果流動相中有雜質，并且發(fā)生大的漂移，需要對流動相、儲液瓶、色譜柱、泵進行檢查，看是否存在著污染物。

3）同時檢定員一定要對單位換算嚴格考慮，不要出現單位上的差錯而影響檢定結論。當工作站顯示屏縱坐標為mV，需要按照JJG 705—2014《液相色譜儀檢定規(guī)程》中給出的公式換算出AU，也就是1 mV=1×10-3/AU[3]。

1.4 最小檢測濃度檢定中的注意事項

1）最小檢測濃度檢定中的注意事項。最小檢測濃度的檢定同上面的基線噪聲采用相同的條件，在對最小檢測濃度進行檢定時，可將10-20μL的質量濃度為1.00×10-7g/mL的萘-甲醇溶液注入到進樣系統(tǒng)中，并遵循一定的操作步驟對色譜圖進行嚴格記錄，并按照公式CL=2NdcV/20H計算出最小檢測濃度。

2）應當注意，公式分母中的數字不是按照濃度進行的計算，而是根據20 μL的注射體積來完成計算的。

2 結語

液相色譜儀是理化領域常見的分析類計量器具，液相色譜儀在更多的理化分析領域被廣泛的應用。而液相色譜儀的檢定結果會受到很多因素影響，如進樣量、檢定人員對規(guī)程的理解程度、操作人員的熟練程度、標準物質的不確定度等等，這樣會在一定程度上增加檢定難度。所以，檢定人員需要充分理解好JJG 705—2014《液相色譜儀檢定規(guī)程》的內容，并在實踐中進行充分總結，防止檢定中出現問題。同時檢定人員在對液相色譜儀進行檢定和操作時，需要加倍重視其檢定方法，若不嚴格執(zhí)行檢定方法，將最終導致液相色譜儀在使用出現很多不確定性因素，從而使檢定結果受到影響，進而影響檢定結論。因此保證液相色譜儀檢定結果的準確和可靠具有非常重要的意義。