宋金梅

【摘要】研究缺血性腦血管病患者的膽固醇酯轉運蛋白-D442G，探討其保護因素。通過分組研究，得出結論：CETP D442G基因位點DG基因型可能引起高密度脂蛋白水平增高;缺血性腦血管病的保護因素可能為高密度脂蛋白水平，攜帶G等位基因。

【關鍵詞】膽固醇轉運蛋白;缺血性腦血管病;保護因素

【中圖分類號】R54 【文獻標識碼】B 【文章編號】ISSN.2095-6681.2018.34..02

缺血性腦血管病是各種原因導致的腦部血液供應障礙，使局部腦組織缺血、缺氧性壞死[1]，國內外大量研究證實，該病為多基因遺傳病，對其病因、危險因素、保護因素、基因遺傳學等的研究，對腦血管的遠期預防有深遠的意義[2]。臨床上血脂高指膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平升高，高密度脂蛋白被認為是缺血性腦血管病發(fā)病的保護因素[3]。隨著分子生物學及遺傳學發(fā)展，動脈粥樣硬化及血脂紊亂等一系列疾病，與基因及遺傳也密切相關。血脂受多因素影響，膽固醇酯轉運蛋白（eholesterolestertransferprotein，CETP）在血脂調控中發(fā)揮著重要的作用。本課題選擇研究CETP的基因位點-D442G基因多態(tài)性對血脂水平的影響，從而研究缺血性腦血管病的保護因素，為該病的基因治療提供依據。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 缺血性腦血管病組

選取2014年1月～2015年12月本院神經內科收治的缺血性腦血管病患者140例作為缺血性腦血管病組，其中，男97例，女43例，平均年齡（64.74±11.72）歲;全部病例符合第四屆全國腦血管疾病會議制定的《各類腦血管疾病診斷要點》經頭顱CT/MRI等影像學檢查證實診斷，個體間無親緣關系。排除腦出血、腦栓塞及其他出血病疾病、嚴重凝血功能異常。

1.1.2 對照組

隨機選取本院體檢科健康體檢人員100例作為對照組，其中，男64例，女36例，平均年齡（53.40±10.60）歲;排除腦血管意外及其他嚴重疾病，個體間無親緣關系。

1.2 實驗方法

1.2.1 血標本的采集

受試者禁食12小時以上，于凌晨7時左右抽取靜脈血3 mL，送我院檢驗科查血生化。

1.2.2 聚合酶鏈反應-限制性內切酶片段長度多態(tài)性（PCR- RFLP）

PCR-RFLP主要用于檢測基因突變，既可檢測致病基因的堿基突變，又可進行基因的連鎖分析，為以后的基因診斷做準備。實驗原理為某一DNA基因位點突變使得某一堿基置換位點正好與限制性內切酶識別位點一致，進而使限制性內切酶的酶切位點增加或減少，應用PCR法特異擴增含置換堿基的DNA片段，再經限制性內切酶酶切，電泳分析酶切產物，觀察其變異程度。

1.2.3 CETP D442G基因多態(tài)性分析方法

CETP的D442G多態(tài)位點的PCR擴增引物序列多態(tài)位點引物序列NCBI代號堿基替換D442G上游引5`-TCATGAACAGCAAAGGCGTGAGCCTCTCCG-3`下游引物5′-AGCCAAGCTGGTAGAGGCCCCTCTGTCTGT-3′。

PCR擴增體系反應體系同普通的PCR擴增。擴增片段酶切產物檢測D442G位點配置3%的瓊脂糖凝膠，反應終止后分別經2%瓊脂糖及8%聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。同時用DNA測序鑒定各基因型。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件對數據進行處理，計量資料以“x±s”表示，采用t檢驗，計數資料采用x2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 兩組化驗資料比較

缺血性腦血管病組低密度脂蛋白膽固醇（2.71±0.79）、膽固醇（4.78±1.19）、甘油三酯（2.14±1.03）水平均較對照組（分別為2.51±0.73、4.56±1.18、1.75±1.21）顯著升高，高密度脂蛋白膽固醇（1.29±0.51）較對照組（1.67±0.92）顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2 CETP D442G基因多態(tài)性結果分析

PCR-RFLP瓊脂糖凝膠電泳條帶顯影較清晰，酶切后檢測出，DD基因型、DG基因型、GG基因型，DD野生型出現一條帶（180 bp），DG突變雜合子出現二條帶（180 bp、150 bp），GG突變純合子出現一條帶（150 bp）。

2.3 兩組間CETP D442G基因型及等位基因分布頻率比較

缺血性腦血管病組患者共140例，其中野生型純合子DD型43例，突變純合子GG型52例，突變雜合子DG型45;對照組共100例，DD基因型21例，GG基因型25例，DG基因型54例，缺血性腦血管病組的DG基因型頻率顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;兩組間DD、GG基因型頻率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P<0.05）。對照組G等位基因頻率顯著高于缺血性腦血管病組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），兩組間D等位基因頻率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.4 CETP D442G不同基因型間血脂比較

基因型DG高密度脂蛋白水平（1.65±0.61）顯著高于DD（1.39±1.12）、GG（1.31±0.29）基因型，單因素方差分析，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。DD、DG、GG基因型間膽固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白水平比較，差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.5 缺血性腦血管病組危險因素的Logistic回歸分析

以年齡、性別、糖尿病病史、吸煙史、飲酒史、膽固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、甘油三酯，CETP D442G基因型做為自變量，以是否發(fā)生缺血性腦血管病組為應變量，建立非條件Logistic回歸模型，選定缺血性腦血管病的保護因素。

結論：年齡、甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白為缺血性腦血管病發(fā)病的獨立危險因素（OR>1，P<0.05）;高密度脂蛋白、G等位基因為該病發(fā)病的保護因素（OR<1，P<0.05）;吸煙、飲酒史對該病的發(fā)病無明顯意義（P>0.05）。

3 討 論

3.1 關于缺血性腦血管病組的臨床指標

本研究顯示缺血性腦血管病患者的平均年齡顯著高于對照組，吸煙人數亦高于對照組，甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白水平較對照組增高，高密度脂蛋白低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），兩組間資料具有可比性，故年齡、高血脂、吸煙等因素有可能增加缺血性腦血管病的發(fā)病風險，高密度脂蛋白可能降低了缺血性腦血管病的發(fā)病風險。

3.2 CETP D442G基因多態(tài)性結果分析

本研究結果：缺血性腦血管病的突變雜合子DG基因型頻率明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;DG基因型人群的高密度脂蛋白水平明顯高于GG、DD基因型。非條件Logistic回歸分析結果為突變的G等位基因為缺血性腦血管病發(fā)病的保護基因。其原因可能為突變基因G基因提高高密度脂蛋白，高密度脂蛋白為血管內的清道夫，可清除動脈粥樣硬化斑塊，減輕動脈硬化程度，可促進膽固醇等其他脂質的代謝，發(fā)揮其抗動脈硬化作用。D442G的突變原因暫不明確，可能與種族及其他基因位點協(xié)同作用有關。影響高密度脂蛋白代謝的機制也不明確，需要進一步深入研究證實。

參考文獻

[1] 賈建平.神經病學[M].第七版，人民衛(wèi)生出版社，2009：175-188.

[2] Lovett JK，Coull AJ，Rothwell PM.Early risk of recurrence by subtype of ischemic stroke in population-based incidence studies[J].Neurology，2004（62）：569-573.

[3] Paolo Parini，Lawrence L Rudel，Is there a need for cholesteryl ester transfer protein inhibition？[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2003，23（2）：160-167.

本文編輯：劉欣悅