貯藏期及貯藏溫度對(duì)低溫制粒顆粒料霉變的影響

金娉婷 張明花 曹美花 張秀海 趙善倉 盛清凱

摘要：為促進(jìn)發(fā)酵飼料的應(yīng)用，研究貯藏期（1、8、16、24 d）和貯藏溫度（低溫0～4℃、中溫16～20℃和高溫30～34℃）對(duì)豬用發(fā)酵飼料低溫制粒顆粒料自由基、pH值、淀粉酶、霉菌及黃曲霉毒素等指標(biāo)的影響。制粒溫度48℃，顆粒料水分含量為12.27%，用呼吸膜塑料袋厭氧貯藏。試驗(yàn)結(jié)果表明，貯藏期對(duì)過氧化氫、霉菌和黃曲霉毒素的含量及過氧化氫酶、淀粉酶活性無顯著影響（P>0.05）;貯藏溫度對(duì)丙二醛含量、過氧化氫酶和淀粉酶活性及pH值有顯著影響（P<0.05），對(duì)霉菌和黃曲霉毒素含量無影響（P>0.05）。高溫下貯藏24 d時(shí)霉菌和黃曲霉毒素的含量與貯藏1 d時(shí)無差別（P>0.05）。結(jié)果顯示發(fā)酵飼料低溫制粒顆粒料盡量避免高溫貯藏，高溫下貯藏期可以達(dá)到24 d。

關(guān)鍵詞：低溫制粒顆粒料;貯藏期;貯藏溫度;自由基;霉變

中圖分類號(hào)：S816.8文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)號(hào)：A文章編號(hào)：1001-4942（2018）12-0123-04

發(fā)酵飼料具有改善飼料適口性、促進(jìn)豬生長、降低豬糞臭味、改善肉品質(zhì)的良好效果[1，2]，但發(fā)酵飼料為濕料，水分含量達(dá)到50%，飼喂時(shí)難以運(yùn)輸，無法大規(guī)模應(yīng)用，其瓶頸因素為目前大規(guī)模豬場的飼料自動(dòng)運(yùn)輸系統(tǒng)為干顆粒料運(yùn)輸系統(tǒng)。如果發(fā)酵飼料高溫制粒，理論上可以應(yīng)用于大規(guī)模豬場，但高溫制粒耗能多，且破壞益生菌、生物酶、維生素等熱敏物質(zhì)[3]。如果發(fā)酵飼料低溫制粒，則在保留其中益生菌、酶、維生素等物質(zhì)活性的前提下，便于大規(guī)模豬場的應(yīng)用。但低溫制粒的顆粒料水分含量高，容易變質(zhì)，如何貯藏成為難題。飼料變質(zhì)為自由基紊亂[4]、菌群改變[5]的結(jié)果，霉變過程受貯藏溫度、貯藏期等外界條件的影響[6]。確定適宜的貯藏參數(shù)，有助于低溫制粒顆粒料的廣泛使用。目前關(guān)于飼料低溫制粒顆粒料貯藏期的資料缺乏。盛清凱等報(bào)道高溫下水分含量為27.53%的全株青綠玉米低溫制粒顆粒料貯藏期不超過8 d[7]。一般高溫制粒顆粒料的水分含量低于8%，其貯藏期可以超過6個(gè)月。水分含量居于10%至20%之間低溫制粒顆粒料的貯藏期未見報(bào)道。為此，本試驗(yàn)研究貯藏期及貯藏溫度對(duì)發(fā)酵飼料低水分含量低溫制粒顆粒料自由基、酶、霉菌及霉菌毒素等指標(biāo)的影響，為發(fā)酵飼料應(yīng)用提供參考。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)材料

全價(jià)飼料低溫制粒顆粒料：將乳酸菌厭氧發(fā)酵成功的全價(jià)飼料濕粉料與全價(jià)飼料干粉料按一定比例混勻后[8]，輸送入平模顆粒制粒機(jī)中，48℃低溫制粒。將制備好的顆粒料裝入呼吸膜塑料袋中貯存待測(cè)。低溫制粒顆粒料的初始水分含量為12.27%。

1.2?試驗(yàn)設(shè)計(jì)

采用兩因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，兩因素分別為貯藏環(huán)境溫度與貯藏期。環(huán)境溫度為低溫（0～4℃）、中溫（16～20℃）和高溫（30～34℃），貯藏期分別為1、8、16、24 d。將樣品根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)分為三組，分別存放于低溫、中溫和高溫環(huán)境中，每組10袋，每袋2 kg。試驗(yàn)開始日上午8時(shí)起至次日上午8時(shí)為第一天，其余類推。每次上午8時(shí)取樣100 g，然后立即將呼吸膜塑料袋封閉并擠壓排出空氣;將所取樣品快速溶于質(zhì)量比10%的蒸餾水中，3 000 r/min離心5 min后取上清液進(jìn)行分析。

1.3?檢測(cè)指標(biāo)及方法

過氧化氫、丙二醛、過氧化氫酶、淀粉酶試劑盒由南京建成生物工程研究所生產(chǎn)。黃曲霉、霉菌毒素酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒購自上海優(yōu)甘生物公司。呼吸膜塑料袋由沃進(jìn)公司提供。霉菌采用平板計(jì)數(shù)法。

1.4?數(shù)據(jù)處理

采用SAS（V9.2）軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，采用TWO-WAY ANNOVA進(jìn)行方差分析，采用Student-Newmnan-Keuls法進(jìn)行多重比較。數(shù)據(jù)以平均值表示。

2?結(jié)果與分析

2.1?貯藏期及貯藏溫度對(duì)顆粒料自由基的影響

表1顯示，貯藏期和貯藏溫度對(duì)過氧化氫含量皆無顯著影響（P>0.05），皆對(duì)丙二醛含量影響顯著（P<0.05）。貯藏第1、8、16、24 d，高溫處理丙二醛含量皆顯著高于低溫（P<0.05）。建議顆粒料貯藏時(shí)盡量避免高溫。

2.2?貯藏期及貯藏溫度對(duì)顆粒料自由基清除劑的影響

表2顯示，貯藏期對(duì)過氧化氫酶活性無顯著影響（P>0.05），貯藏溫度對(duì)過氧化氫酶活性影響顯著（P<0.05）。貯藏期和貯藏溫度對(duì)過氧化物酶活性的影響同過氧化氫酶。對(duì)于過氧化氫酶，貯藏第1、8、16、24 d高溫處理的活性皆顯著高于低溫處理（P<0.05）。對(duì)于過氧化物酶，貯藏第1 d高溫處理的活性與低溫處理無顯著差異（P>0.05），第8、16、24 d皆顯著低于低溫（P<0.05）。

2.3?貯藏期及貯藏溫度對(duì)顆粒料pH值和淀粉酶活性的影響

表3顯示，貯藏期和貯藏溫度對(duì)pH值皆有極顯著影響（P<0.01）;貯藏期對(duì)淀粉酶活性無顯著影響（P>0.05），而貯藏溫度對(duì)淀粉酶活性影響顯著（P<0.05）。貯藏第1、8、16、24 d，高溫處理的pH[JP3]值皆顯著高于低溫處理（P<0.01）。貯藏第1 d高溫處理的淀粉酶活性顯著高于低溫，而第8、16、24 d皆顯著低于低溫處理（P<0.05）。

2.4?貯藏期及貯藏溫度對(duì)顆粒料霉菌和黃曲霉毒素的影響

表4顯示，貯藏期和貯藏溫度對(duì)霉菌和黃曲霉毒素皆無顯著影響（P>0.05），表明高溫下顆粒料貯藏期可以達(dá)到24 d。

3?討論與結(jié)論

由于低溫制粒的顆粒料初水分含量仍超過10%，遠(yuǎn)高于干顆粒料的8%，因此如何貯藏發(fā)酵飼料低溫制粒顆粒料成為制約大規(guī)模豬場廣泛應(yīng)用的關(guān)鍵問題之一。

目前未見貯藏期對(duì)低溫制粒顆粒料自由基影響的報(bào)道。本試驗(yàn)貯藏期對(duì)顆粒料自由基及霉菌無顯著影響的結(jié)果與貯藏期影響發(fā)酵飼料質(zhì)量的結(jié)果[1]不同，差異原因在于本試驗(yàn)顆粒料為呼吸膜塑料袋中厭氧貯存，而發(fā)酵飼料為有氧貯存。本試驗(yàn)貯藏期對(duì)顆粒料霉菌無顯著影響，其可能原因?yàn)椋浩湟?，全價(jià)飼料厭氧發(fā)酵后碳水化合物降解，產(chǎn)生乳酸等有機(jī)酸，有機(jī)酸抑制了霉菌、大腸桿菌等的生長[9，10]，從而延長貯藏期;其二，呼吸膜塑料袋有助于飼料的厭氧發(fā)酵[11]，使飼料維持在厭氧的酸性環(huán)境中。

目前國內(nèi)外未見貯藏溫度對(duì)低溫制粒顆粒料自由基及霉菌影響的報(bào)道。本試驗(yàn)中貯藏溫度對(duì)顆粒料丙二醛含量、過氧化物酶活性等有顯著影響，表明貯藏溫度影響自由基的代謝，這與食品類的相關(guān)研究結(jié)果一致[12，13]。本試驗(yàn)貯藏溫度對(duì)霉菌和黃曲霉毒素?zé)o顯著影響的結(jié)果與食品類的一些研究結(jié)果不同[14，15]，原因可能主要在于厭氧發(fā)酵與有氧發(fā)酵的方式不同。本試驗(yàn)中隨著貯藏溫度的變化，自由基代謝發(fā)生改變，而霉菌、黃曲霉毒素沒有改變，這與自由基紊亂導(dǎo)致食物變質(zhì)的結(jié)論[16，17]并不矛盾。其中一個(gè)可能原因?yàn)楸驹囼?yàn)自由基代謝雖然發(fā)生變化，原有的自由基產(chǎn)生與清除之間的平衡被打破，但自由基尚未過量產(chǎn)生。盡管自由基能夠攻擊細(xì)胞膜、線粒體等，但本試驗(yàn)條件下自由基尚未導(dǎo)致飼料的變質(zhì)。本試驗(yàn)自由基尚未泛濫的原因可能在于貯藏期短或貯藏溫度不高。Mannaa等[18]報(bào)道高溫有助于霉菌的生長和霉菌毒素的產(chǎn)生，低溫作用相反。Mondal等[19]報(bào)道高溫增加了過氧化氫等自由基的活性，縮短了貯藏期。更高的貯藏溫度及更長的貯藏期對(duì)于低溫制粒顆粒料自由基代謝及微生物活性的影響有待進(jìn)一步研究。

本試驗(yàn)高溫下貯藏期24 d的結(jié)果與盛清凱等[7]的結(jié)果不同，原因在于水分含量不同。目前未見低溫制粒顆粒料中水分含量對(duì)貯藏期影響的報(bào)道。從本試驗(yàn)結(jié)果、盛清凱試驗(yàn)結(jié)果[7]以及高溫制粒顆粒料可以長期貯藏的常識(shí)判斷，降低水分含量或許可以延長低溫制粒顆粒料的貯藏期，這有待進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，貯藏溫度影響低溫制粒顆粒料自由基的產(chǎn)生與清除以及飼料品質(zhì)。高溫下全價(jià)飼料低溫制粒顆粒在呼吸膜塑料袋中貯藏期可以達(dá)到24 d，低溫下可能更長。

參?考?文?獻(xiàn)：

[1]?盛清凱，李祥明，戰(zhàn)余銘，等.豬用全株青綠玉米發(fā)酵前后營養(yǎng)成分的變化[J].飼料研究，2016（15）：48-51.

[2]?胡新旭，周映華，卞巧，等.無抗發(fā)酵飼料對(duì)生長育肥豬生產(chǎn)性能、血液生化指標(biāo)和肉品質(zhì)的影響[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2015，34（1）：72-77.

[3]?劉澤輝，楊海鋒，黃志英，等.不同制粒工藝對(duì)飼料脂溶性維生素穩(wěn)定性的影響規(guī)律研究[J].糧食與飼料工業(yè)，2015（4）：45-47，52.

[4]?余丹，陳代文.活性氧自由基對(duì)動(dòng)物健康及飼料質(zhì)量的影響[J].飼料廣角，2005（11）：27-28， 36.

[5]?王懷中，王文志，盛清凱，等.貯藏溫度及貯藏期對(duì)發(fā)酵飼料霉變的影響[J].飼料研究， 2016（7）：1-4，9。

[6]?陳小旭.儲(chǔ)藏條件對(duì)魚粉、麥麩和膨化全脂大豆儲(chǔ)藏品質(zhì)的影響[D].鄭州：河南工業(yè)大學(xué)，2011.

[7]?盛清凱，趙紅波，張伶燕，等. 貯藏時(shí)間及溫度對(duì)全株青綠玉米低溫制粒顆粒料的影響[J]. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，50（8）：157-160.

[8]?盛清凱，姜富貴，張明花，等.一種全價(jià)飼料顆粒飼料生產(chǎn)方法：中國，201710224090[P].2017-04-07.

[9]?連凱霞，蔣國政，李繼昌.復(fù)合酸化劑對(duì)飼料的防霉及酸化作用[J].中國飼料，2013（13）：8-10.

[10]Selwet M.Effect of organic acids on numbers of yeasts and mould fungi and aerobic stability in the silage of corn[J].Polish Journal of Veterinary Sciences，2008，11（2）：119-123.

[11]陸文清，胡起源.豬用無抗生素飼料呼吸膜厭氧發(fā)酵生產(chǎn)技術(shù)[J].中國牧業(yè)通訊，2008（14）：39-40.

[12][JP3]Chaudhary P R，Yu X， Patil B S. Influence of storage temperature and low-temperature conditioning on the levels of health-promoting compounds in Rio Red grapefruit[J].Food Science & Nutrition， 2017，5（3）：545-553.

[13]Komosinska-Vassev K，Olczyk P，Ramos P，et al. The influence of storage temperature and UV-irradiation on free radical scavenging properties of ethanolic extracts of propolis[J].Acta Poloniae Pharmaceutica，2017，74（6）：1833-1840.

[14]Razali S M，Lee H Y， Jinap S，et al. Characterization of fungi from palm kernel cake （PKC） and the effect of storage temperature on fungi growth[J].Pertanika Journal of Tropical Agricultural Science，2018，41（1）：115-128.

[15]Pearubia O R，Raposo M F D J，Rui M S C D M.Beeswax- and candelilla wax-coconut oil edible coatings extend the shelf life of strawberry fruit at refrigeration temperatures[J]. International Journal of Postharvest Technology & Innovation， 2014，4（2/3/4）：221-234.

[16]Yano M，Hayashi T，Namiki M. Formation of free-radical products by the reaction of dehydroascorbic acid with amino acids[J].Journal of Agricultural & Food Chemistry，1976，24（4）： 815-819.

[17]Halliwell B，Murcia M A，Chirico S，et al.Free radicals and antioxidants in food and in vivo： what they do and how they work[J].Crit.Rev.Food Sci.Nutr.，1995，35（1/2）：7-20.

[18]Mannaa M，Kim K D.Influence of temperature and water activity on deleterious fungi and mycotoxin production during grain storage[J].Mycobiology，2017，45（4）：240-254.

[19]Mondal K，Sharma N S，Malhotra S P，et al.Oxidative stress and antioxidant systems in tomato fruits during storage[J].Journal of Food Biochemistry，2010，27（6）：515-527.