基于SRK基因序列分析的甘藍(lán)自交不親和系單倍型鑒定及驗(yàn)證

鄭 敏 朱陳曾 劉夢(mèng)慈 徐冰冰 馬存發(fā) 李勤菲 任雪松 司 軍 宋洪元

（西南大學(xué)園藝園林學(xué)院，南方山地園藝學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶市蔬菜學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，重慶 400715）

甘藍(lán)（Brassica oleraceaL. var.capitataL.）為十字花科蕓薹屬甘藍(lán)種的一個(gè)變種，由不結(jié)球的野生甘藍(lán)經(jīng)長(zhǎng)期栽培演化而來(lái)，是世界各地廣泛栽培的蔬菜種類之一。甘藍(lán)作為典型的異花授粉作物，具有花期自交不親和的特性，屬于孢子體自交不親和性植物（sporophytic SI，SSI）（Tantikanjana et al.，2010）。自交不親和系在遺傳上由多個(gè)復(fù)等位基因高度多態(tài)性的S位點(diǎn)控制（Takasaki et al.，2000）。S位點(diǎn)基因通常以一個(gè)單位遺傳給后代，幾乎不會(huì)發(fā)生重組現(xiàn)象，因此S等位基因又稱作S單倍型。目前，已經(jīng)分離到3類與該位點(diǎn)連鎖的基因：SRK受體激酶基因（S-locus receptor kinase）（Nasrallah et al.，1985）、SLG糖蛋白基因（S-locus glycoprotein）（Stein et al.，1991）、SCR（S 富 含 半胱氨酸蛋白基因，S-locus cysteine rich）/SP11（S蛋白 11基因，S-locus protein11）（Schopfer et al.，1999）。SLG基因和SRK基因在雌蕊柱頭中表達(dá)，SCR/SP11基因在雄蕊花藥中表達(dá)，這3個(gè)基因緊密連鎖，在花粉、柱頭識(shí)別過(guò)程中起重要作用（Kusaba et al.，2000；Takasaki et al.，2000； 盧軍 等，2007），其中SRK基因與SLG基因均呈高度多態(tài)性，同一S等位基因系中的SLG基因與SRK基因在序列上協(xié)同進(jìn)化，因此將這兩個(gè)基因及其連鎖序列合稱為一種S單倍型（S-haplotype）（Boyes & Nasrallah，1993；Okamoto et al.，2004）。迄今，蕓薹屬中已有逾100個(gè)S單倍型被確定，在甘藍(lán)中已經(jīng)找到了逾50個(gè)S單倍型（Ockendon，2000）。不同S單倍型自交不親和系之間花期授粉能正常結(jié)籽，相同S單倍型之間花期授粉不能結(jié)籽或結(jié)籽率極低。因此，利用不同單倍型的自交不親和系進(jìn)行雜種一代配制是目前甘藍(lán)雜種優(yōu)勢(shì)利用的重要途徑之一。

目前，甘藍(lán)育種家通過(guò)連續(xù)自交、小孢子培養(yǎng)等途徑育成大量的自交不親和系，這些在球形、熟性、抗病性等農(nóng)藝性狀表型不同的自交不親和系存在相同的S單倍型情況。在育種實(shí)踐中，不同自交不親和系之間雜交組合配制時(shí)除了進(jìn)行蕾期徹底去雄外，還需同時(shí)進(jìn)行花期雜交，確認(rèn)參與配組的兩個(gè)自交不親和系是否屬于同一個(gè)單倍型。該方式在一定程度上降低了雜交組合設(shè)計(jì)的針對(duì)性，且田間工作量大。因此，在甘藍(lán)雜交育種工作中進(jìn)行不同自交不親和系的單倍型鑒定和分析是非常重要的。早期的自交不親和系單倍型鑒定和分析方法，如花期親和指數(shù)法（方智遠(yuǎn) 等，1983）、熒光顯微法（張恩慧，1989；陳世儒 等，1990）、免疫測(cè)定 法（Kandasamy et al.，1989；Chen & Nasrallah，1990）、等電聚焦電泳法（Nishio & Hinata，1978）等方法存在易受環(huán)境條件影響、操作過(guò)程繁瑣復(fù)雜、應(yīng)用難度較大等問(wèn)題（高啟國(guó) 等，2011）；基于DNA分子的PCR-RFLP（restriction fragment length polymorphism-polymerase chain reaction，限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性－聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）鑒定法受酶切片段多態(tài)性的限制難以準(zhǔn)確進(jìn)行多個(gè)單倍型的區(qū)分（Nasrallah & Nasrallah，1989；朱利泉和王小佳，2000；張愛(ài)芬 等，2008）；根據(jù)SRK激酶區(qū)序列設(shè)計(jì)ClassⅠ型以及ClassⅡ型引物僅能將不同自交不親和系分為ClassⅠ型和ClassⅡ型，無(wú)法確定相應(yīng)的S單倍型（田磊 等，2011）。隨著蕓薹屬植物自交不親和性研究的深入，包括甘藍(lán)在內(nèi)的大量S單倍型所含的SLG、SRK和SCR基因序列的確定以及DNA測(cè)序技術(shù)的飛速發(fā)展，結(jié)合生物信息學(xué)分析，使得在基因序列水平上快速鑒定蕓薹屬自交不親和S單倍型成為可能（李霞 等，2015）。根據(jù)SRK基因序列比對(duì)，甘藍(lán)自交系所屬S單倍型（高啟國(guó) 等，2011；田磊 等，2011；Tian et al.，2013）以及一代雜種所屬的S單倍型可被確定（苗雯雯 等，2013）。然而，基于SRK基因序列分析的單倍型鑒定法是否與傳統(tǒng)的花粉管萌發(fā)熒光鑒定法、花期親和指數(shù)鑒定法具有一致性仍缺少相應(yīng)的報(bào)道。

本試驗(yàn)針對(duì)自交不親和雌蕊決定因子SRK基因設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物，對(duì)23個(gè)穩(wěn)定的甘藍(lán)自交不親和系SRK基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增、克隆測(cè)序，獲得的SRK基因序列進(jìn)行NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)的比對(duì)分析以及相互之間的序列比較分析，確定相應(yīng)自交不親和系的單倍型；并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行相同單倍型之間、不同單倍型之間花期雜交的熒光顯微法鑒定以及花期親和指數(shù)鑒定，以期驗(yàn)證基于SRK基因序列分析可否快速確定相應(yīng)甘藍(lán)自交不親和系所屬單倍型，從而實(shí)現(xiàn)有計(jì)劃地設(shè)計(jì)甘藍(lán)雜交組合，提高育種效率。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試材料為23份穩(wěn)定的甘藍(lán)自交不親和系（表1），均由西南大學(xué)十字花科蔬菜研究所保存提供。2016年7月育苗，8月定植于西南大學(xué)十字花科蔬菜研究所歇馬基地。

表1 參試甘藍(lán)自交不親和系來(lái)源及特征特性

1.2 甘藍(lán)基因組DNA的提取

分別取甘藍(lán)自交不親和系植株幼嫩葉片，利用改良的CTAB法（王關(guān)林 等，2014）提取基因組DNA，用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)DNA濃度和純度，電泳條帶單一且分光光度計(jì)檢測(cè)D260/D280比值在1.8～2.0范圍內(nèi)的DNA樣品為合格樣品，置于-20℃冰箱備用。

1.3 SRK基因引物設(shè)計(jì)及PCR擴(kuò)增

根據(jù)甘藍(lán)SRK基因序列保守區(qū)域設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物：SRK-F：5′-TCAAVCAAYAGAACACTT-3′和SRK-R：5′-CTTYATCCTKGTAAAACCAT-3′（引物中V=A/C/G、Y=C/T、K=G/T），由北京六合華大基因科技有限公司合成。利用該簡(jiǎn)并引物，以23份甘藍(lán)自交不親和系DNA為模板，擴(kuò)增SRK基因片段。PCR擴(kuò)增體系（25 μL）：10×Buffer（含Mg2+）2.5 μL，dNTPs（10 mmol·L-1）0.5 μL，上下游引物（50 μmol·L-1）各 0.1 μL，TaqDNA polymerase（5 U·μL-1）0.2 μL， 模 板 DNA 1.0 μL，ddH2O補(bǔ)齊25 μL。PCR反應(yīng)程序：95 ℃5 min；95 ℃ 30 s，45 ℃ 30 s，72 ℃ 1 min，30 個(gè)循環(huán)；72 ℃7 min。獲得預(yù)期大小的PCR產(chǎn)物，用1.2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，紫外凝膠成像儀系統(tǒng)進(jìn)行拍照。

1.4 目的片段的回收、克隆及測(cè)序分析

利用OMEGA瓊脂糖凝膠回收試劑盒，回收目的片段，連接到TRKARA公司的pMD?19-T載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞DH5α，將獲得的克隆進(jìn)行PCR鑒定。鑒定后的陽(yáng)性克隆送北京六合華大基因科技有限公司測(cè)序。每份自交不親和系的SRK基因片段測(cè)定2～3個(gè)克隆。

1.5 甘藍(lán)自交不親和系S單倍型的確定

將獲得的各自交不親和系的SRK基因序列在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast比對(duì)，確定相應(yīng)的單倍型。在此基礎(chǔ)上利用在線軟件Multialin進(jìn)行相同單倍型以及不同單倍型之間的SRK序列比較分析。根據(jù)Tian等（2013）的報(bào)道，設(shè)計(jì)PK1/PK4和KD4/KD7兩對(duì)引物，進(jìn)一步對(duì)23份自交不親和系的單倍型（ClassⅠ型、ClassⅡ型）進(jìn)行鑒定。

1.6 單倍型的驗(yàn)證分析

2017年4月，在西南大學(xué)園藝園林學(xué)院甘藍(lán)育種基地，根據(jù)不同甘藍(lán)自交不親和系SRK基因序列比較確定的S單倍型，設(shè)計(jì)20個(gè)雜交組合，含相同單倍型、不同單倍型甘藍(lán)自交不親和系之間的花期、蕾期雜交授粉，并以各自交不親和系花期和蕾期自交授粉為對(duì)照，3次重復(fù)，每重復(fù)至少50朵花/蕾。

1.6.1 花粉原位萌發(fā)的熒光顯微鏡觀察 不同甘藍(lán)自交不親和系之間花期和蕾期授粉3～5 h后，取其柱頭于固定液（冰乙酸∶無(wú)水乙醇=9V∶1V的混合液）中固定，24 h后轉(zhuǎn)移至70%的乙醇中保存。固定后的柱頭在2 mol·L-1NaOH溶液中55 ℃軟化至透明（約2 h），再用50 mmol·L-1偏磷酸鉀溶液清洗3～5次，置于0.1%苯胺藍(lán)染液中染色2 h，取出柱頭并用50%甘油壓片于Leica DM6000B熒光顯微鏡380 nm激發(fā)光下進(jìn)行花粉管萌發(fā)情況觀察。每個(gè)組合調(diào)查至少3個(gè)柱頭。

1.6.2 親和指數(shù)的測(cè)定 完成全部授粉后統(tǒng)計(jì)授粉的花朵數(shù)，待種莢成熟后逐一考種，計(jì)算花期和蕾期雜交親和指數(shù)。3次生物學(xué)重復(fù)，采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

親和指數(shù)=種子數(shù)/授粉的花朵數(shù)

2 結(jié)果與分析

2.1 SRK基因的PCR擴(kuò)增

利用SRK基因簡(jiǎn)并引物SRK-F和SRK-R，分別從23份甘藍(lán)自交不親和系中擴(kuò)增出預(yù)期約

1.0 kb大小的目的片段（圖1）。目的片段進(jìn)行回收，克隆于pMD?19-T載體上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α，對(duì)PCR鑒定呈陽(yáng)性的克隆進(jìn)行測(cè)序分析。

圖1 23份甘藍(lán)自交不親和系SRK基因片段的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物

2.2 甘藍(lán)自交不親和系單倍型的確定

從表2可以看出，23份甘藍(lán)自交不親和系的SRK序列均在NCBI庫(kù)中找到對(duì)應(yīng)的單倍型，其序列一致性在95%～99%之間。如自交不親和系E3的SRK基因?qū)?yīng)NCBI中已知的SRK36單倍型，其序列覆蓋率達(dá)到99%，序列相似度達(dá)到98%，因此將甘藍(lán)自交不親和系E3確定為SRK36單倍型。其他的自交不親和系單倍型的確定按類似的方法進(jìn)行，23份甘藍(lán)自交不親和系分屬10個(gè)不同的單倍型，其中屬于SRK36單倍型的有5份，占參試甘藍(lán)自交不親和系的22%；SRK7、SRK16和SRK583種單倍型均只在1份材料中發(fā)現(xiàn)。

將屬于相同S單倍型的自交不親和系SRK基因序列以及分屬于不同S單倍型的自交不親和系SRK基因序列進(jìn)行比較。結(jié)果表明：屬于同一S單倍型（SRK36）的5個(gè)自交不親和系（282、K1、G1、P1、E3）SRK基因序列同源性極高，僅個(gè)別堿基存在差異或個(gè)別自交不親和系發(fā)生片段缺失現(xiàn)象，如G1材料的SRK36缺失45 b p序列（圖2-a）；而分屬不同S單倍型自交不親和系F416（SRK3）、B1（SRK28）、P1（SRK36）、H2（SRK45） 的SRK基因序列差異較大（圖2-b）。

進(jìn)一步針對(duì)23份甘藍(lán)自交不親和系所屬的ClassⅠ型以及ClassⅡ型自交不親性進(jìn)行鑒定，其中PK1/PK4引物在23份甘藍(lán)自交不親和系中均擴(kuò)增獲得大小為950 bp的條帶，KD4/KD7引物在7 份材料（B3、G1、H2、K1、282、301、339）中擴(kuò)增獲得大小為1 100 bp的條帶（圖3）。說(shuō)明除B3、G1、H2、K1、282、301、339外的其他材料屬于ClassⅠ型自交不親和，而7份含1 100 bp條帶的材料屬于ClassⅠ型和ClassⅡ型雜合材料。

表2 不同甘藍(lán)自交不親和系所屬單倍型

圖2 相同單倍型SRK基因序列以及不同單倍型SRK基因序列的多重 比較

2.3 單倍型的驗(yàn)證分析

2.3.1 花粉原位萌發(fā)的熒光顯微觀察 蕓薹屬作物自交不親和性表現(xiàn)為開(kāi)花后自花花粉或相同S單倍型花粉在其柱頭上萌發(fā)受阻或雖然萌發(fā)但花粉管不能正常伸長(zhǎng)穿過(guò)柱頭完成受精。如甘藍(lán)自交不親和系F416（SRK3單倍型）花期自交授粉后可明顯看到花粉粒被吸附在柱頭表面但是未形成花粉管束穿過(guò)柱頭乳突細(xì)胞（圖4-a），但其蕾期自交授粉后可觀察到大量花粉在柱頭表面萌發(fā)且有部分形成花粉管穿過(guò)柱頭乳突細(xì)胞（圖4-b）。相同S單倍型自交不親和系花期雜交授粉，如F416（SRK3）×H1（SRK3）、G1（SRK36）×P1（SRK36）可見(jiàn)大量花粉被吸附在柱頭表面，但是幾乎看不到萌發(fā)的花粉形成花粉管穿過(guò)柱頭乳突細(xì)胞（圖4-c、d）。然而，屬于不同S單倍型的自交不親和系花期雜交授粉后，如F416（SRK3）×E3（SRK36）、H1（SRK3）×H2（SRK45）則可以觀察到大量的花粉被吸附在柱頭表面萌發(fā)并形成花粉管穿過(guò)柱頭乳突細(xì)胞進(jìn)入花柱組織（圖4-e、f）。上述花粉管萌發(fā)的熒光檢測(cè)結(jié)果支持了根據(jù)SRK序列所確定的不同甘藍(lán)自交不親和性的單倍型劃分結(jié)果。

圖3 23份甘藍(lán)自交不親和系ClassⅠ型以及ClassⅡ型自交不親性鑒定

圖4 相同S單倍型以及不同S單倍型甘藍(lán)自交不親和系花期雜交花粉原位萌發(fā)熒光顯微觀察結(jié)果

2.3.2 相同S單倍型以及不同S單倍型甘藍(lán)自交不親和系花期雜交結(jié)莢結(jié)籽情況 田間花期授粉35 d后，F(xiàn)416花期自交授粉結(jié)莢結(jié)籽情況（圖5-a～c）與 相 同 S單 倍 型 G1（SRK36）×P1（SRK36）、F416（SRK3）×H1（SRK3）自交不親和系花期雜交授粉后結(jié)莢結(jié)籽情況一致，表現(xiàn)為所結(jié)種莢短小、干癟，幾乎看不見(jiàn)籽粒突起，空莢占大多數(shù)且掉莢現(xiàn)象較為普遍（圖5-g～l）。而不同S單倍型F416（SRK3）×E3（SRK36）、H1（SRK3）×H2（SRK45）自交不親 和系花期雜交授粉后所結(jié)種莢長(zhǎng)、飽滿，籽粒突起明顯且種子發(fā)育飽滿，空莢、死莢極少（圖5-m～r），最多種莢結(jié)籽數(shù)達(dá)到34粒，且結(jié)籽數(shù)量明顯優(yōu)于各S單倍型蕾期自交授粉結(jié)莢結(jié)籽情況（圖5-d～f）。上述結(jié)果表明，根據(jù)SRK基因序列確定的相同S單倍型自交不親和系之間花期授粉后不能結(jié)籽，表現(xiàn)不親和；而不同S單倍型自交不親和系之間花期授粉后結(jié)籽量多且飽滿，親和性高。

2.3.3 相同S單倍型以及不同S單倍型甘藍(lán)自交不親和系雜交組合的花期親和指數(shù) 一般認(rèn)為，花期親和指數(shù)小于0.5或1的材料屬于強(qiáng)自交不親和系；介于1～3之間為弱自交不親和系；而大于10的被認(rèn)定為自交親和系（方智遠(yuǎn) 等，1983）。從表3可以看出，自交不親和系F416花期自交雜交親和指數(shù)為0.09，而蕾期自交平均親和指數(shù)為1.73，屬于嚴(yán)格的自交不親和系。20個(gè)雜交組合中，相同S單倍型自交不親 和系共配制8個(gè)雜交組合， 花期雜交親和指數(shù)均小于0.5，其中E3（SRK36）×G1（SRK36）親和指數(shù)最高，但也僅為0.26；且相同S單倍型自交不親和系之間花期正反交不影響其親和指數(shù)，如E3（SRK36）和G1（SRK36）正反交親和指數(shù)無(wú)顯著差異。而分屬12個(gè)不同S單倍型自交不親和系之間花期雜交結(jié)籽多，親和指數(shù)高，最低親和指數(shù)為8.10〔E3（SRK36）×H1（SRK3）〕，最高親和指數(shù)達(dá)到21.76〔F1（SRK7）×E3（SRK36）〕。 另 外， 不同S單倍型自交不親和系之間花期雜交親和指數(shù)差異較大，如H1（SRK3）作為母本分別與H2（SRK45）、E3（SRK36）雜交時(shí)，花期親和指數(shù)差異不顯著；但E3（SRK36）作為母本分別與H1（SRK3）、F1（SRK7）、N1（SRK8） 雜 交 時(shí)，E3（SRK36）×H1（SRK3）的親和指數(shù)顯著低于另外兩個(gè)組合；F1（SRK7）作為母本分別與H2（SRK45）、E3（SRK36）雜交時(shí)，親和指數(shù)差異達(dá)顯著水平。同一自交不親和系作為母 本與不同單倍型材料雜交后出現(xiàn)結(jié)籽數(shù)量差異大的現(xiàn)象，可能與來(lái)自父本中花粉決定因子SCR/SP11的親和性有關(guān)。上述結(jié)果顯示，根據(jù)SRK基因序列確定的相同S單倍型自 交不親和系之間花期雜交確實(shí)不親和，而不同S單倍型自交不親和系之間的花期雜交是親和的，表明基于SRK基因序列分析確定單倍型可以用于指導(dǎo)不同甘藍(lán)自交不親和系的雜交組合設(shè)計(jì)。

圖5 相同S單倍型以及不同S單倍型甘藍(lán)自交不親和系花期雜交結(jié)莢結(jié)籽情況

表3 不同甘藍(lán)自交不親和系雜交組合的花期親和指數(shù)

3 結(jié)論與討論

蕓薹屬自交不親和性可分為ClassⅠ型和ClassⅡ型兩大類，其中ClassⅠ型為花粉顯性，表現(xiàn)強(qiáng)自交不親和；ClassⅡ型為花粉隱性，表現(xiàn)弱自交不親和（Nasrallah & Nasrallah，1993）。利用SRK基因特異引物，Tian等（2013）對(duì)111份結(jié)球甘藍(lán)自交系的單倍型進(jìn)行鑒定，發(fā)現(xiàn)56份屬于ClassⅠ型（PK1/PK4引物對(duì)），55份屬于ClassⅡ型（KD4/KD7引物對(duì)）；然而，基于花粉管熒光染色鑒定，僅4份屬于SRK15單倍型的ClassⅡ型材料表現(xiàn)為花期親和。在甘藍(lán)育種中，兩種類型自交不親和系均被廣泛用于雜種配制（苗雯雯 等，2013）。本試驗(yàn)中，PK1/PK4引物在23份甘藍(lán)自交不親和系中均擴(kuò)增獲得大小為950 bp的條帶，KD4/KD7引物在7份材料（B3、G1、H2、K1、282、301、339）中擴(kuò)增獲得大小為1 100 bp的條帶，顯示這7份材料在S位點(diǎn)上是雜合的，屬于雜合體。甘藍(lán)自交不親和系存在S位點(diǎn)雜合現(xiàn)象在早期的研究中也曾報(bào)道（田磊 等，2011）。然而，通過(guò)SRK基因序列分析，未能在這7份雜合材料中鑒定出屬于ClassⅡ型的SRK2、SRK5以及SRK15單倍型序列（Tian et al.，2013）。另外，本試驗(yàn)將S位點(diǎn)雜合的G1（鑒定為SRK36單倍型）分別作為父本和母本與同一S單倍型的E3以及P1花期雜交后均表現(xiàn)為典型的自交不親和特性。說(shuō)明，即使在S位點(diǎn)上出現(xiàn)ClassⅠ型和ClassⅡ型雜合，仍不影響其花期雜交的不親和性。

通過(guò)特異引物擴(kuò)增僅能將甘藍(lán)自交不親和系分為ClassⅠ型和ClassⅡ型兩大類，但不能確定其所屬單倍型（田磊 等，2011）。李霞等（2015）對(duì)4份不結(jié)球白菜的SRK及SLG基因序列進(jìn)行克隆分析，初步確定了其所屬單倍型，但未進(jìn)行相應(yīng)的親和性試驗(yàn)?；赟RK基因序列分析，Tian等 （2013）對(duì)111份結(jié)球甘藍(lán)單倍型進(jìn)行了鑒定，并利用柱頭花粉管熒光鑒定法重點(diǎn)驗(yàn)證了歸屬于相同S單倍型材料之間親和性。本試驗(yàn)中，23份甘藍(lán)自交不親和系分屬于10個(gè)不同的單倍型，未檢測(cè)到屬于ClassⅡ型的SRK2、SRK5以及SRK15單倍型，但不同單倍型的分布頻率與Tian 等（2013）在111個(gè)結(jié)球甘藍(lán)自交系上的鑒定結(jié)果接近；F1材料被鑒定為SRK7單倍型，與高啟國(guó)等（2011）針對(duì)該材料SRK基因和SCR基因同時(shí)鑒定結(jié)果一致。說(shuō)明利用本試驗(yàn)中的簡(jiǎn)并引物擴(kuò)增SRK基因序列進(jìn)行單倍型的確定是可靠的。本試驗(yàn)還對(duì)歸屬于相同S單倍型材料以及不同S單倍型材料之間的親和性，同時(shí)采用柱頭花粉管熒光鑒定法以及親和指數(shù)測(cè)定法進(jìn)行了驗(yàn)證，獲得了基于SRK基因序列鑒定相應(yīng)自交不親和系所屬單倍型與田間鑒定相吻合的直接證據(jù)。這些結(jié)果支持基于SRK基因序列分析確定對(duì)應(yīng)甘藍(lán)自交不親和系所屬單倍型是一種簡(jiǎn)單可靠的鑒定方法，可用于指導(dǎo)甘藍(lán)自交不親和系之間的雜交組合設(shè)計(jì)。

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