王志春， 孫星星

(1.江蘇省鹽城市新洋農(nóng)業(yè)試驗(yàn)站，江蘇鹽城 224049； 2.江蘇沿海地區(qū)農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，江蘇鹽城 224002)

通信作者：孫星星，碩士，助理研究員，主要從事天敵生態(tài)防治以及植物保護(hù)研究。E-mail：13921865625@ 163.com。

植物土傳病害[1-2]是發(fā)生在植物根部或莖部以土壤為媒介進(jìn)行傳播的病害的統(tǒng)稱，包括根腐病、枯萎病、猝倒病、立枯病、疫病、黃萎病等。土傳病害已經(jīng)成為嚴(yán)重制約我國設(shè)施果蔬業(yè)發(fā)展的主要因素，這類病害的病原物生活史一部分或大部分存在于土壤中，在條件適宜時(shí)病原物萌發(fā)并侵染植物根部或莖部導(dǎo)致植物發(fā)生病害。

江蘇省沿海地區(qū)設(shè)施蔬菜種植面積大，其中以茄果類、葉菜類種植為主，由于種植高度集約化、復(fù)種指數(shù)高、品種單一等原因給土傳病害病原菌提供了賴以生存的場所，造成土傳病害發(fā)生不斷加重。造成土傳病害的主要原因通常有3個方面[3]。首先是作物連作，相應(yīng)的病原菌得以連續(xù)繁殖，在土壤中大量積累，形成病土，茄科蔬菜連作，疫病、枯萎病等發(fā)生較嚴(yán)重；其次是施肥不當(dāng)，偏施氮肥可以刺激土傳病害病原菌中的鐮刀菌、輪枝菌和絲核菌生長，從而加重土傳病害的發(fā)生；再次是線蟲侵害，土壤中的線蟲侵害根系，可以造成傷口，有利于病原菌侵染，線蟲與真菌性病害往往同時(shí)發(fā)生，如棉花枯萎病與土壤線蟲密不可分，在美國棉花枯萎病被稱為“枯萎-線蟲”復(fù)合病害。

本研究以江蘇省沿海地區(qū)番茄枯萎病與根腐病為例，篩選對設(shè)施土壤中常見病原菌具有較強(qiáng)抑制作用的拮抗微生物，并研究它與農(nóng)業(yè)廢棄物的混用配方，以期減少化學(xué)農(nóng)藥的使用，保護(hù)土壤并實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

盆栽基質(zhì)：醬渣，由江蘇省鹽城市光明醬油廠提供；草炭、蛭石，均為市售。供試作物：番茄品種為金鵬1號，購自西安金鵬種苗有限公司。

PDA培養(yǎng)基：200 g馬鈴薯，20 g葡萄糖，15～20 g瓊脂，1 000 mL 超純水。NA培養(yǎng)基：10.0 g蛋白胨，3.0 g牛肉粉，5.0 g氯化鈉，15.0 g瓊脂，pH值為7.3±0.1。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 拮抗菌株的分離 于江蘇省鹽城市射陽縣(SY)、亭湖區(qū)(TH)、鹽都區(qū)(YD) 采集發(fā)生番茄土傳病害的土壤，采用稀釋法分離細(xì)菌。將分離得到的產(chǎn)物置于PDA培養(yǎng)基上，于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h，挑取單菌落純化。拮抗細(xì)菌的分離、純化和培養(yǎng)均在NA培養(yǎng)基中進(jìn)行。

1.2.2 番茄枯萎病孢子懸浮液制備方法 將尖孢鐮刀菌番茄?；蚚Fusariumoxysporumf.sp.lycopersici(Sacc) Snyder et Hansen]菌株接種于固體PDA培養(yǎng)基平板上，于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。待菌絲長滿培養(yǎng)基表面后用打孔器將其制成直徑為6 mm的菌塊。將菌塊接種于250 mL裝有液體PDA培養(yǎng)基的三角瓶中，而后置于28 ℃、120 r/min的搖床中培養(yǎng)，待培養(yǎng)基懸液長出明顯菌絲并變?yōu)樯罴t色時(shí)，將培養(yǎng)基懸浮液用滅菌紗布過濾，收集病原菌孢子懸浮液。孢子懸浮液用無菌水重懸后適當(dāng)稀釋，用血球計(jì)數(shù)板統(tǒng)計(jì)孢子濃度，將孢子懸浮液的濃度調(diào)至1×106CFU/mL備用。番茄根腐病病菌孢子懸浮液的制備方法同上。

1.2.3 拮抗菌株篩選方法 采用抑制菌絲生長法篩選拮抗菌。用接種環(huán)挑取1環(huán)PDA培養(yǎng)基上的菌株，用無菌水稀釋107倍，取2 mL 107倍稀釋液與23 mL NA培養(yǎng)基混合倒平板。在每個平板中心接種1個6 mm的菌塊，菌塊帶菌絲一面靠在培養(yǎng)基表面，于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)7 d，十字交叉法測定菌絲的直徑。每個處理重復(fù)4次，以無菌水與NA培養(yǎng)基混合作為對照。

1.2.4 拮抗菌株田間小區(qū)試驗(yàn) 接種方法采用灌根并結(jié)合自然發(fā)病方法。選取室內(nèi)篩選出的抑菌能力較強(qiáng)的菌株，每個處理4次重復(fù)，小區(qū)面積為30 m2。在番茄6～7片真葉時(shí)開始移栽，移栽時(shí)采用孢子懸浮液灌根法接種番茄枯萎病病菌和根腐病病菌。移栽10 d后，采用灌根法施用50 mL拮抗菌株107倍稀釋液，隔10 d再施用1次，以清水處理作為對照。處理10 d后調(diào)查田間發(fā)病率及防治效果。發(fā)病率=調(diào)查發(fā)病株數(shù)/調(diào)查總株數(shù)×100%；防效=[(對照區(qū)發(fā)病株數(shù)-處理區(qū)發(fā)病株數(shù))/對照區(qū)發(fā)病株數(shù)]×100%。

1.2.5 拮抗菌株與基質(zhì)混合對枯萎病、根腐病的抑制試驗(yàn) 本試驗(yàn)共設(shè)5個處理，處理A：草炭、蛭石質(zhì)量比為1 ∶1；處理B：草炭、蛭石質(zhì)量比為1 ∶1+拮抗菌株稀釋液；處理C：醬渣、草炭、蛭石比為1 ∶1 ∶1+拮抗菌株稀釋液；處理D：醬渣、草炭、蛭石質(zhì)量比為5 ∶1 ∶1 +拮抗菌株稀釋液；處理E：醬渣、草炭、蛭石質(zhì)量比為10 ∶1 ∶1+拮抗菌株稀釋液。將上述基質(zhì)按比例混合后裝入花盆中，用拮抗菌株稀釋液將基質(zhì)澆透，將番茄幼苗(6～7片真葉)移入盆內(nèi)，每盆1株，3 d后采用灌根法接種番茄枯萎病病菌和根腐病病菌。15 d 后檢查發(fā)病株數(shù)及防治效果。

2 結(jié)果與分析

2.1 室內(nèi)抑菌能力的測定結(jié)果

從江蘇省鹽城市射陽縣(SY)、亭湖區(qū)(TH)、鹽都區(qū)(YD)發(fā)生番茄土傳病害的根際土壤中共分離到7株細(xì)菌，其中，7株菌株對番茄枯萎病病菌表現(xiàn)出抑菌活性(表1)，4株菌株對番茄根腐病病菌表現(xiàn)出抑菌活性(表2)。由表1、表2可知，YD11菌株對番茄枯萎病病菌的抑菌活性最高，抑制率高達(dá)82.4%，TH2、TH14菌株次之，抑制率分別為73.4%、72.4%。TH2菌株對番茄根腐病病菌的抑制能力最好，抑制率為76.5%，其次為YD11菌株，抑制率為73.3%。綜上所述，YD11菌株對番茄枯萎病病菌和根腐病病菌均表現(xiàn)出較好的抑制能力。

表1 7株菌株對番茄枯萎病抑菌活性測定

表2 4種菌株對番茄根腐病抑菌活性測定

2.2 拮抗菌株對番茄枯萎病、根腐病的田間防效

由表3可知，處理10 d后，YD11菌株對番茄枯萎病及根腐病的田間防效較好，分別為58.8%、52.2%；TH2菌株對番茄根腐病的防效次之，達(dá)到52.0%，但對番茄枯萎病的防效僅為39.2%；TH6菌株對番茄枯萎病的防效為47.2%，但對番茄根腐病的防效僅為37.3%。綜上所述， YD11菌株對番茄枯萎病及根腐病的防治效果較為突出。

表3 拮抗菌株對番茄枯萎病、根腐病的田間防效

注：數(shù)據(jù)后不同大寫、小寫字母分別表示與對照相比在0.01、0.05水平上差異顯著。下表同。

2.3 拮抗菌株YD11與基質(zhì)混合對枯萎病和根腐病抑制試驗(yàn)

通過室內(nèi)篩選及田間藥效試驗(yàn)確定YD11菌株對番茄枯萎病及根腐病的防治效果較好，將YD11菌株與不同基質(zhì)混合后，由表4可知，基質(zhì)配方中醬渣、草炭、蛭石的質(zhì)量比為 5 ∶1 ∶1 時(shí)，與拮抗菌株YD11稀釋液混合對番茄枯萎病和根腐病的防治效果最好，其對番茄枯萎病的防治效果極顯著高于其他處理(P<0.01)；處理D與處理E對番茄根腐病的防治效果無顯著性差異，但極顯著高于其他(P<0.01)。不含醬渣的基質(zhì)配方混合拮抗菌株稀釋液對番茄枯萎病與根腐病防治效果最差，分別僅為34.0%、21.8%。

表4 YD11拮抗菌株與基質(zhì)混合對枯萎病和根腐病抑制試驗(yàn)

3 結(jié)論與討論

當(dāng)前設(shè)施蔬菜土傳病害的防治主要依賴化學(xué)藥劑(阿維菌素、噻唑磷等)，長期使用化學(xué)藥劑導(dǎo)致病株菌的抗藥性迅速上升，同時(shí)對環(huán)境造成較大的壓力。有研究表明，作物發(fā)生土傳病害的關(guān)鍵因素是土壤微生物區(qū)系的改變，即有益細(xì)菌優(yōu)勢群落嚴(yán)重降低，而引起病害的真菌群落明顯增加[4]。目前，報(bào)道對設(shè)施蔬菜造成危害的土傳病害病原菌主要有疫病病菌(Phytophthoracactorum)、根腐病病菌(Fusariumsolani)、黑斑病病菌(Alternariapanax)、菌核病病菌(Seclerotiniasp.)、軟腐歐文氏菌(Erwinniacarotovora)、立枯絲核病病菌(Rhizoctoniasolani)、腐霉病病菌 (Pythumsp.)，不同地區(qū)由于栽培管理方式之間的差異，土傳病害優(yōu)勢種群有一定的差異，江蘇省沿海地區(qū)設(shè)施蔬菜上主要以枯萎病、黃萎病、青枯病、疫病發(fā)生為主，對當(dāng)?shù)厥卟似焚|(zhì)與產(chǎn)量造成嚴(yán)重的危害[5]。據(jù)報(bào)道，對土傳病害作用顯著的微生物主要有枯草芽孢桿菌、放射形土壤桿菌、淀粉液化芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌等。

關(guān)于基質(zhì)中添加農(nóng)用廢棄物的報(bào)道[6-7]已有很多，包括醋糟、菌糠發(fā)酵物、雞糞、豬糞等， 但關(guān)于醬渣的報(bào)道不多，本

研究的結(jié)果為農(nóng)業(yè)廢棄物的處理提供了一條新的思路，并為防治植物土傳病害提供了新的理論依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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