血液病患者反復(fù)輸血對配血相合率的影響分析

林玉蓓 李曉榮（通訊作者） 詹曉燕 魯思文

（江蘇省中醫(yī)院血庫 江蘇 南京 210029）

輸血是血液病重要的治療手段，該院50%的輸血治療應(yīng)用于血液科。血液病患者長期反復(fù)輸血，存在嚴(yán)重的輸血安全隱患，但卻未引起臨床足夠的重視。輸血工作者應(yīng)該致力于如何防范和減少其輸血不良反應(yīng)，檢測患者血清中的不規(guī)則抗體或確認患者紅細胞的致敏狀態(tài)是關(guān)鍵?？谷饲虻鞍自囼炇禽斞霸囼灥慕?jīng)典方法，但在臨床上卻極少被開展為輸血前常規(guī)篩查項目，尤其是針對反復(fù)輸血患者。直接抗人球蛋白試驗（DAT）：是利用抗人球蛋白血清與體內(nèi)已被不完全抗體或補體致敏的紅細胞產(chǎn)生凝集反應(yīng)，檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致敏。間接抗人球蛋白試驗（IAT）：是利用已知抗原的紅細胞測定受檢者血清中相應(yīng)的不完全抗體或補體。該研究對176例血液科患者根據(jù)輸血次數(shù)進行分組，分別進行直接/間接抗人球蛋白試驗，旨在分析其相關(guān)性，研究過程如下。

1.材料與方法

1.1 標(biāo)本

來源于該院血液科2013年1月—2014年5月申請輸血的血液病患者176例。涉及淋巴瘤、骨髓增生異常綜合征、再生障礙性貧血、白血病、自身免疫性溶血性貧血等15個病種。輸血次數(shù)從1次到80次不等。根據(jù)輸血治療次數(shù)分為輸血1-3次組和輸血 4次以上組，其中輸血1～3次患者共77例。輸血4次以上患者99例。

1.2 儀器

Diana Incubator孵育器、Dianafuge離心機

1.3 試劑

抗人球蛋白檢測卡anti-IgG+C3d型（批號13183.01.1）由戴安娜Grifols公司提供；抗體篩選細胞（批號20145609）由上海血液生物醫(yī)藥公司提供；不規(guī)則抗體質(zhì)控品（批號：20140422）由北京金豪制藥公司提供。

1.4 方法

按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》的方法及結(jié)果判定。

DAT：取1張coomb’s卡，在受檢者孔中加入受檢者1%紅細胞懸液50ul，立即用Dianafuge離心機離心9分鐘（1100轉(zhuǎn)/分），判定結(jié)果：受檢者紅細胞凝集者為直接抗人球蛋白試驗陽性，不凝集者為陰性。

IAT：取1張coomb’s卡，標(biāo)注1、2、3號柱，分別加入Ⅰ號Ⅱ號Ⅲ號篩選紅細胞50ul，再分別加入患者血漿25ul，孵育15分鐘，用Dianafuge離心機離心9分鐘（1100轉(zhuǎn)/分），判定結(jié)果：1、2、3號柱中有一柱凝集，間接抗人球蛋白試驗陽性。1、2、3號柱全部不凝集，間接抗人球蛋白試驗陰性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P＜0.05具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 輸血1～3次組與輸血4次以上組直接抗人球蛋白試驗結(jié)果比較

經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析，直接抗人球蛋白試驗兩組之間陽性率差別有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05。（表1）

表1 輸血1～3次組與輸血4次以上組直接抗人球蛋白試驗陽性率統(tǒng)計

2.2 輸血1～3次組與輸血4次以上組間接抗人球蛋白試驗結(jié)果比較

經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析，間接抗人球蛋白試驗，兩組之間陽性率差別有統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.01。（表2）

表2 輸血1～3次組與輸血4次以上組間接抗人球蛋白試驗陽性率統(tǒng)計

2.3 各型血液病直抗/間抗陽性例數(shù)的分布比較（表3）

表3 直抗/間抗陽性率在各型血液病中的分布情況

3.討論

本研究數(shù)據(jù)表明輸血4次以上的血液病患者DAT/IAT陽性率明顯高于輸血1～3次的患者。隨著輸血次數(shù)和輸血量的增加，紅細胞的致敏率、不規(guī)則抗體的產(chǎn)生率都隨之升高，將直接導(dǎo)致配血困難，從而拖延治療。在血液病漫長的治療過程中，輸血是主要的支持手段之一，長期反復(fù)輸血不可避免。免疫因素和血液病的發(fā)生密不可分，人體免疫功能異常是血細胞病變的重要原因之一，而輸入患者體內(nèi)的異源則加劇了免疫功能的紊亂。由于反復(fù)輸血引起機體進行性的免疫功能抑制[1]，輸入患者血液中的IgG與其體內(nèi)的血型物質(zhì)結(jié)合，或者患者本身的IgG與輸入的血型物質(zhì)結(jié)合，從而形成循環(huán)免疫復(fù)合物，當(dāng)機體未能及時清除此種免疫復(fù)合物，其攜帶補體結(jié)合紅細胞上的補體受體[2]，在血液中持續(xù)存在，導(dǎo)致DAT陽性。有研究報道反復(fù)輸血DAT陽性率為16.7%[3]，明顯高于一般人群（0.37%）[4]。輸血過程中的免疫刺激更能導(dǎo)致不規(guī)則抗體的出現(xiàn)，引起IAT陽性。一般人群不規(guī)則抗體檢出率為0.2%～2%[5]。有文獻報道大量多次輸血產(chǎn)生不規(guī)則抗體的頻率為15%～20%[6]，本研究數(shù)據(jù)則達到均數(shù)30%以上。更有研究顯示受血者產(chǎn)生抗紅細胞的自身抗體與輸血次數(shù)相關(guān)，輸血次數(shù)達到6次以上，其抗體產(chǎn)生率高達87.9%[7]。在本研究中，反復(fù)輸血“4次以上組”有16例因抗體篩查陽性造成配血困難，經(jīng)江蘇省血液中心進一步檢驗，確認其中4例為抗-E。E抗原的抗原性僅次于D抗原，由于目前臨床并未開展E抗原的普篩，所以輸血產(chǎn)生抗-E幾率較高，為69.7%[8]。

本統(tǒng)計顯示Coomb’s試驗陽性患者多分布于淋巴瘤和自身免疫性溶血性貧血。自身免疫性溶血性貧血（AIHA）是由于患者自身免疫功能調(diào)節(jié)紊亂，不能正確識別自身和外來抗原，從而使體內(nèi)產(chǎn)生了自身抗體和活化補體，這些抗體和（或）補體吸附于紅細胞表面或游離于血清中，導(dǎo)致紅細胞破壞加速、壽命縮短而引起溶血性貧血。AIHA包括原發(fā)性和繼發(fā)性兩大類，繼發(fā)性自身免疫性溶血性貧血中淋巴系統(tǒng)腫瘤最常見，約占50%，而通常繼發(fā)于B淋巴細胞來源的淋巴瘤[9]。這可能與惡性淋巴瘤患者免疫功能紊亂導(dǎo)致的血漿中產(chǎn)生自身抗體及針對紅系生成的某些體液抑制因子有關(guān)。在AIHA的輸血問題上，臨床醫(yī)生與實驗室人員的意見往往相左。臨床常為AIHA患者反復(fù)申請輸血，而輸血的免疫學(xué)風(fēng)險很大，除了＞1/3的患者有不規(guī)則抗體，部分患者血清中的自身抗體具有血型特異性以外，輸血本身也可能加重溶血[10]。

綜上所述，應(yīng)對血液科反復(fù)受血患者進行常規(guī)輸血前Coomb’s試驗，檢測不規(guī)則抗體，監(jiān)測機體被致敏的情況。對AIHA患者必須認識到輸血的危險性，嚴(yán)格把控輸血指征。不規(guī)則抗體篩查陽性患者應(yīng)進一步檢測其特異性，選擇缺乏相應(yīng)抗原的血液進行交叉配血，這對保證臨床輸血安全有很重要的意義。

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