三種魚類嗜水氣單胞菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

邱燕

(海安市水產(chǎn)技術(shù)推廣站，江蘇海安 226600)

烏鱧、草魚、鳊魚是我國(guó)重要的淡水養(yǎng)殖魚類，養(yǎng)殖過程中極易發(fā)生細(xì)菌性疾病，其中嗜水氣單胞菌對(duì)淡水魚類有廣泛的致病性，該菌屬于弧菌科氣單胞菌屬，常會(huì)引起魚類出血性敗血癥的暴發(fā)性流行，危害嚴(yán)重[1]。大量使用抗生素容易導(dǎo)致病菌產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致抗生素失效[2]。本文就以三種魚類分離的嗜水氣單胞菌為例，通過藥敏試驗(yàn)的研究，旨在為嗜水氣單胞菌的防治和進(jìn)一步研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 病料的采集

取病體烏鱧2個(gè)樣，2017年8月24日在江蘇省海安市雅周鎮(zhèn)烏鱧養(yǎng)殖基地采集。

取病體鳊魚2個(gè)樣，2017年9月2日在江蘇省海安市高新區(qū)隆政村鳊魚養(yǎng)殖基地采集。

取病體草魚2個(gè)樣，2017年9月8日在江蘇省海安市墩頭鎮(zhèn)仇湖村草魚養(yǎng)殖基地采集。

1.1.2 主要試劑

培養(yǎng)基、BD Crystal陰性板條及藥敏試驗(yàn)板條均購(gòu)自南京菲恩醫(yī)療科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病魚的剖檢

肉眼檢查病魚解剖前后體表病癥，以及主要臟器的病變，顯微鏡觀察主要器官細(xì)胞破壞、出血、溶血情況。

1.2.2 病原菌的分離培養(yǎng)

無菌采取魚體表面和內(nèi)臟組織，分別接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，28℃恒溫培養(yǎng)24h，挑取單個(gè)菌落進(jìn)一步純化。

1.2.3 病原菌的鑒定

根據(jù)革蘭氏染色結(jié)果，使用BD Crystal陰性板條來鑒定其生化特性，從而確定鑒定菌種。

1.2.4 藥敏試驗(yàn)

對(duì)分離的三株嗜水氣單胞菌進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，將分離菌株制成0.5麥?zhǔn)系木鷳乙?，?.1mL注入藥敏板條，28℃恒溫培養(yǎng)24h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。使用藥物為：硫酸新霉素、氟苯尼考、恩諾沙星、甲砜霉素、鹽酸環(huán)丙沙星、紅霉素、鹽酸土霉素和強(qiáng)力霉素。

2 結(jié)果

2.1 病魚的體征與病變

患病魚的肉眼病變以魚體多處發(fā)紅出血或充血，呈創(chuàng)傷樣；鰓蒼白或紫色，鰓絲腫脹，多黏液。解剖后出現(xiàn)腸壁充血且半透明，腹腔內(nèi)積黃色或血紅色腹水，腸道有炎癥，肛門紅腫，肝臟、脾臟、腎臟腫大，脾呈紫黑色，膽囊膨大，腸系膜、腹膜充血為主要體征；顯微病變以全身各主要器官的細(xì)胞廣泛性破壞，出血，溶血為特征。

2.2 病原菌鑒定結(jié)果

共分離3種菌株，鑒定結(jié)果均為嗜水氣單胞菌。

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果如表1所示，鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)三種魚類嗜水氣單胞菌顯示出較強(qiáng)的抑菌效果，硫酸新霉素次之，紅霉素和甲砜霉素抑菌效果不明顯。

表1 各種抗菌藥物對(duì)嗜水氣單胞菌的

3 討論

本試驗(yàn)通過不同魚類病原菌分離培養(yǎng)，分離出3種菌株，生化鑒定初步鑒定為嗜水氣單胞菌，但是在判定嗜水氣單孢菌種屬時(shí)還應(yīng)結(jié)合分子生物學(xué)等方面的特性進(jìn)行綜合判斷[3]。

通過對(duì)3個(gè)菌株的藥敏試驗(yàn)，鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)3種魚類的嗜水氣單胞菌有較強(qiáng)的抑菌效果，硫酸新霉素次之。由于鹽酸環(huán)丙沙星屬于禁用魚藥，本次治療中可采用硫酸新霉素治療，同時(shí)應(yīng)加強(qiáng)對(duì)水質(zhì)的管理調(diào)控。

由于不同的養(yǎng)殖區(qū)域、養(yǎng)殖品種、用藥方法都會(huì)使病原菌因藥物環(huán)境不同而產(chǎn)生耐藥性差異，給疾病的預(yù)防帶來困難，因此對(duì)嗜水氣單胞菌等引起的細(xì)菌性疾病的防治既要考慮病原菌對(duì)藥物的敏感性，也要根據(jù)水產(chǎn)用藥的相關(guān)規(guī)定合理用藥，還應(yīng)做好平時(shí)的預(yù)防工作。建立健康的養(yǎng)殖模式，科學(xué)投餌，做好魚塘、魚種的消毒以及水質(zhì)的管理。