Caspase—3在不同分期翼狀胬肉上皮細(xì)胞中表達的研究

唐彥慧　彭子春　唐琪

摘 要：目的 探討Caspase-3在不同臨床分期的翼狀胬肉中的表達和意義。方法 采用免疫組化Elibision法檢測20例靜止期翼狀胬肉、20例活動期翼狀胬肉、10例正常結(jié)膜中上皮細(xì)胞中Caspase-3的表達。結(jié)果 Caspase-3在翼狀胬肉上皮細(xì)胞中為低表達，和正常對照組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），靜止期和活動期翼狀胬肉組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 Caspase-3在翼狀胬肉上皮細(xì)胞中為低表達，提示翼狀胬肉的發(fā)生、發(fā)展有可能和上皮細(xì)胞凋亡和增殖異常有關(guān)。

關(guān)鍵詞：Caspase-3；翼狀胬肉；臨床分期；免疫組織化學(xué)

中圖分類號：R777.33 文獻標(biāo)識碼：A DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2018.03.022

文章編號：1006-1959（2018）03-0071-02

Abstract：Objective To investigate the expression and significance of Caspase-3 in pterygium at different clinical stages.Methods 20 cases of quiescent pterygium and 20 cases of active pterygium were detected by immunohistochemical Elibision method. Expression of Caspase-3 in epithelial cells of 10 cases of normal conjunctiva.Results The expression of Caspase-3 was low in pterygium epithelial cells.There was significant difference between pterygium group and normal control group（P<0.05），but there was no significant difference in pterygium between static and active stage（P>0.05）.Conclusion The low expression of Caspase-3 in pterygium epithelial cells suggests that the occurrence and development of pterygium may be related to the abnormal apoptosis and proliferation of pterygium cells.

Key words：Caspase-3；Pterygium；Clinical staging；Immunohistochemistry

翼狀胬肉（pterygium）是一種只發(fā)生在人類的常見眼表疾病，是臨床上最為常見的眼科疾病之一[1]。研究表明，翼狀胬肉的發(fā)生發(fā)展在一定程度上來說與腫瘤的病因——異常增生與凋亡的失衡有相近之處[2]，過度增殖和凋亡的減弱導(dǎo)致了結(jié)膜上皮細(xì)胞的增生和翼狀胬肉的生長。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測翼狀胬肉組織中凋亡相關(guān)基因Caspases-3表達，旨在探討凋亡基因產(chǎn)物在翼狀胬肉發(fā)病機理中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇本院2015年1月～2017年6月住院的20例靜止期翼狀胬肉和20例活動期翼狀胬肉患者的手術(shù)標(biāo)本。本研究課題已經(jīng)過醫(yī)院倫理委員會審核?；顒悠跒榻M織肥大并充血，血管增粗增大，頭部區(qū)隆起，角膜有浸潤；靜止期為組織菲薄，無充血，無或存在少許纖維血管，頭部平坦，角膜透明。對照組為10例正常結(jié)膜組織，采集于視網(wǎng)膜脫離、外傷等患者，年齡40～60歲，所有病例均無其他角膜、結(jié)膜疾患。

1.2方法 標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋。取組織蠟塊制成3～5 μm的切片。以PBS代替一抗作為陰性對照，陽性對照購自公司。

1.3結(jié)果判斷 陽性細(xì)胞為呈棕黃色顆粒的陽性反應(yīng)產(chǎn)物。每例標(biāo)本光鏡下任取5個視野進行細(xì)胞計數(shù)，至少計數(shù)500個細(xì)胞，以陽性細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的百分比表示陽性表達程度。0%～5%為陰性（-），6%～10%為弱陽性（+），>10%為陽性（++）。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法 所有統(tǒng)計學(xué)資料使用SPSS16.0軟件統(tǒng)計，計數(shù)資料采用χ2檢驗，等級資料采用非參數(shù)檢驗中的Mann-Whitney U法，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 HE染色 正常結(jié)膜的上皮層由非角化復(fù)層鱗狀上皮構(gòu)成，上皮下見疏松的結(jié)締組織，可見排列規(guī)整的毛細(xì)血管組織、淋巴組織和散在少量的炎性細(xì)胞。翼狀胬肉的上皮層鱗狀上皮增生明顯，纖維結(jié)締組織、新生血管組織增多且排列紊亂，這些特征在活動期翼狀胬肉組織中表現(xiàn)得更加明顯。

2.2 Caspase-3在翼狀胬肉及正常結(jié)膜中的表達 光鏡下，棕黃色陽性顆粒位于細(xì)胞核，陽性細(xì)胞呈隨機分布。片狀分布于上皮層及上皮下纖維層，但主要見于上皮基底層。正常結(jié)膜中未見到表達，見圖1。圖2為翼狀胬肉細(xì)胞上皮中低表達Caspase-3的典型樣本。靜止期組和活動期組中，Caspases-3表達與正常對照組對比差異有顯著性，蛋白表達在兩組組間對比則差異無顯著性，表明翼狀胬肉中存在Caspases-3表達失衡，見表1。

3討論

翼狀胬肉是一種慢性增生性眼病。翼狀胬肉在臨床上分為活動期和靜止期[3]，越來越多研究表明，翼狀胬肉的發(fā)生發(fā)展在一定程度上來說與腫瘤的病因——異常增生與凋亡的失衡有相近之處。我們通過對Caspases-3在冀狀胬肉上表達的觀察，旨在進一步探討其發(fā)病機制。作為凋亡機制中重要的效應(yīng)子成分，Caspase家族參與多種與凋亡有關(guān)的生理和病理過程[4-6]，這是一個一旦被激活便不可逆的啟動細(xì)胞程序性死亡程序的執(zhí)行階段，所以說Caspase蛋白家族是細(xì)胞程序性死亡的主要“執(zhí)行者”。