譚光明 唐云姣 林麗娟 黃彩霞

（1.德?？h動物疫病預(yù)防控制中心，廣西德保 533700；2.百色市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西百色 533000）

豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病是近年來危害養(yǎng)豬業(yè)的三大主要動物疫病。我國將其都列為一類動物疫病，并且列入政府重點防控的重大動物疫病強制免疫病種。雖然2017年1月1日起，豬瘟、高致病性豬藍耳病國家退出強制免疫，但是這兩種疫病及豬口蹄疫的免疫注射依然是豬病防控工作的重點，特別在農(nóng)村條件落后的散養(yǎng)戶免疫注射工作仍然是防控的首要條件，然而豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病這三種疫病的傳統(tǒng)免疫方式每頭豬免疫次數(shù)多，對基層獸醫(yī)人員的工作量大，免疫工作落實難。為了進一步做好生豬這三種疫病的防控工作，探索合理有效的免疫方式，既減輕工作量，提高工作效率，又能確保免疫效果，尋找適合德保縣農(nóng)村養(yǎng)殖模式的生豬免疫程序，2017年春防期間，我們進行了兩種不同免疫方式的對比試驗，第一種是傳統(tǒng)的免疫方式即先同時經(jīng)雙側(cè)頸部肌肉注射豬口蹄疫和豬瘟疫苗，14d后再經(jīng)頸部肌肉注射高致病性豬藍耳病疫苗，簡稱“三苗三針兩免”；第二種是新的免疫方式即將豬瘟疫苗和高致病性豬藍耳病疫苗分別等量稀釋后混合為1針，注射到豬耳后頸部一側(cè)，另一側(cè)同時注射豬口蹄疫疫苗，簡稱“三苗兩針一免”。本對比試驗采用這兩種不同免疫方試免疫后的豬，通過免疫副反應(yīng)觀察以及兩次抗體檢測效果比較分析，得出“三苗兩針一免”新的免疫方式既省時省力，又能使免疫抗體水平達到國家規(guī)定的群體保護標準，可在農(nóng)村散養(yǎng)戶推廣應(yīng)用，現(xiàn)將情況報告如下。

1 實驗材料

1.1 試驗動物

在巴頭鄉(xiāng)念印村李某豬場、敬德鎮(zhèn)扶平村黃某豬場、都安鄉(xiāng)凌雷村許某豬場各選擇45～60日齡未免疫過豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病疫苗的健康仔豬各20頭，共60頭。

1.2 疫苗

（1）豬口蹄疫O型滅活疫苗，中牧實業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：1610002；生產(chǎn)日期：20161013；有效期至：20171014。

（2）豬瘟活疫苗，中博生物股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：20160607；生產(chǎn)日期：20160622；有效期至：20180623。

（3）高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗（TJM-F92株），吉林特研生物技術(shù)股份有限責(zé)任公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：20161004；生產(chǎn)日期：20160405；有效期至：20180404。

1.3 診斷試劑

（1）口蹄疫病毒O型抗體液相阻斷ELISA檢測試劑盒，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號20170307101-6；有效期至：20170906。

（2）豬瘟病毒阻斷ELISA抗體檢測試劑盒，武漢科前生物股份有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號：160812；有效期至：170621。

（3）豬繁殖與呼吸綜合征病毒ELISA抗體檢測試劑盒，武漢科前生物股份有限公司生產(chǎn)，批號：170302；有效期至：180122。

1.4 試驗主要儀器

（1）小型通用離心機TGL-16GB，上海安亭科學(xué)儀器廠制造。

（2）生化培養(yǎng)箱spx-1508-z型，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠。

（3）酶標分析儀Rt-6100，深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司。

（4）單道微量加樣器20～200μl，多道微量加樣器20～200μl，德國公司生產(chǎn)。

2 實驗方法

2.1 試驗分組與免疫方案

在巴頭鄉(xiāng)念印村李某豬場選擇20頭分成A組和B組、敬德鎮(zhèn)扶平村黃某豬場選擇20頭分成C組和D組、都安鄉(xiāng)凌雷村許某豬場選擇20頭分成E組和F組，實驗豬每組10頭，總共6個組。所選擇的豬均為健康狀況良好，飼養(yǎng)條件相當，45～60日齡，并且未經(jīng)過豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病免疫仔豬。其中A、C、E組采用“三苗三針兩免”免疫方式，即先同時經(jīng)雙側(cè)頸部肌肉注射豬口蹄疫和豬瘟疫苗，14d后再經(jīng)頸部肌肉注射高致病性豬藍耳病疫苗，接種疫苗劑量嚴格按說明書使用，豬瘟、高致病性豬藍耳病疫苗按每頭份加1ml生理鹽水稀釋，每頭1ml，豬口蹄疫每頭2ml；B、D、F組采用“三苗兩針一免”免疫方式，即將豬瘟疫苗和高致病性豬藍耳病疫苗分別等量稀釋后混合為1針，注射到豬耳后頸部一側(cè)，另一側(cè)同時注射豬口蹄疫疫苗。接種疫苗劑量嚴格按說明書使用，豬瘟、高致病性豬藍耳病疫苗各按每頭份加1ml生理鹽水稀釋后混合，每頭2ml，豬口蹄疫每頭2ml。

2.2 采樣方案

對6個實驗組的豬在免疫后28d、35d經(jīng)前腔靜脈各采集血清樣品一次，兩次采集血清樣品共120份，樣品采集由縣動物疫病預(yù)防控制中心和鄉(xiāng)鎮(zhèn)站技術(shù)員共同完成，縣動物疫病預(yù)防控制中心負責(zé)對血清樣品進行抗體檢測。

2.3 抗體檢測方法

O型口蹄疫抗體檢測方法為液相阻斷ELISA試驗，具體操作按試劑盒說明書進行，判定標準：抗體效價≥1：128判為抗體陽性，抗體效價<1：64判為抗體陰性；豬瘟抗體檢測方法為阻斷ELISA試驗，具體操作按試劑盒說明書進行，判定標準為：陰性對照的平均OD630nm大于0.500，陽性對照的阻斷率均大于50%，被檢樣品的阻斷率≤30%，該樣品判為抗體陰性，被檢樣品的阻斷率≥40%，該樣品判為抗體陽性；高致病性豬藍耳抗體檢測方法為血清學(xué)ELISA試驗，具體操作按試劑盒說明書進行，判定標準為：陽性對照OD630nm值均≥0.8，陰性對照OD630nm值均<0.3，KQ≥20判為陽性，KQ<20判為陰性。試驗檢測過程和結(jié)果判定嚴格按照ELISA檢測試劑說明操作。

3 結(jié)果分析

3.1 免疫副反應(yīng)觀察結(jié)果

各組試驗豬經(jīng)疫苗注射后加掛免疫標識，做好登記，并且注射后48h內(nèi)逐頭觀察精神、食欲、呼吸、體溫、口吐白沫、抽搐、休克死亡等免疫副反應(yīng)情況。經(jīng)免疫后觀察統(tǒng)計，應(yīng)用“三苗三針兩免”免疫方式的有都安鄉(xiāng)凌雷村許某豬場1頭免疫后第1d食欲減退，第3d恢復(fù)正常，其余的實驗豬無異常；應(yīng)用“三苗兩針一免”免疫方式的有巴頭鄉(xiāng)念印村李某豬場1頭免疫后第1d食欲減退，第2d恢復(fù)正常，其余的實驗豬無異常。兩種免疫方式的副反應(yīng)差異不顯著。

3.2 免疫抗體檢測結(jié)果

應(yīng)用“三苗三針兩免”傳統(tǒng)免疫方式與“三苗兩針一免”新的免疫方式免疫后的6個實驗組的豬進行抗體檢測陽性率相比。結(jié)果，豬口蹄抗體檢測陽性率應(yīng)用“三苗兩針一免”的比“三苗三針兩免”一樣，差異不顯著；豬瘟抗體檢測陽性率應(yīng)用“三苗兩針一免”的比“三苗三針兩免”高1.7個百分點，差異不顯著；高致病性豬藍耳抗體檢測陽性率應(yīng)用“三苗兩針一免”的比“三苗三針兩免”低1.7個百分點，差異不顯著。試驗結(jié)果兩種免疫方式的豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳病免疫抗體群體合格率都高于75%以上（見表1、2）。

4 小結(jié)與討論

（1）本試驗免疫后只進行兩次抗體監(jiān)測，對于抗體達到高峰時間、消長時間規(guī)律還要進一步的實驗和研究。

（2）從本對比試驗看應(yīng)用兩種不同免疫方式免疫后的豬，免疫副反應(yīng)無明顯的差異，免疫抗體水平都達到國家規(guī)定的群體保護標準70%以上。

（3）從本對比試驗看應(yīng)用兩種不同免疫方式免疫后的豬，通過兩次抗體監(jiān)測結(jié)果比較分析表明，兩種免疫方式在免疫28d后免疫抗體水平均達到國家規(guī)定的群體免疫合格標準，并且免疫抗體陽性數(shù)和陽性率逐漸增高，35d后采樣監(jiān)測抗體都達到了較高。

（4）從本對比試驗看應(yīng)用兩種不同免疫方式免疫后結(jié)果分析，“三苗三針兩免”免疫方式在同等的情況下高致病性豬藍耳病還存在一段時間的抗體空白。并且所用的時間、人力、財力都相對高；“三苗兩針一免” 免疫方式既省時、省力，可減少基層獸醫(yī)人員防疫工作量，又能確保免疫效果，進一步提高了工作效率。相比，新的“三苗兩針一免”免疫方式優(yōu)于傳統(tǒng)的“三苗三針兩免”免疫方式。

表1 豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳三種疫苗應(yīng)用不同免疫程式抗體檢測結(jié)果統(tǒng)計表

表2 豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍耳三種疫苗應(yīng)用不同免疫程式抗體檢測陽性率匯總表

（5）從本試驗免疫效果檢測結(jié)果分析，巴頭鄉(xiāng)念印村李某豬場應(yīng)用“三苗兩針一免”免疫方式的B組高致病性豬藍耳病免疫合格數(shù)和免疫抗體群體合格率低于其他組，可能是因為免疫注射4d后畜主自行進行閹割造成應(yīng)激反應(yīng)。德保縣的部分動物防疫員平時習(xí)慣在免疫注射疫苗時同時進行閹割，導(dǎo)致抗體效價相對較低，因此，建議免疫注射疫苗不應(yīng)與閹割同時進行。

（6）從本試驗看，在防疫人員在進行豬瘟、高致病性豬藍耳病疫苗的等量稀釋時，會存在一定的差異，可能會對免疫效果造成一定的影響。如果能研制出一種豬瘟和高致病性豬藍耳二聯(lián)苗，這將對豬瘟和高致病性豬藍耳病的防控有著重要作用。

綜上所述，“三苗兩針一免”免疫方式，既減少免疫次數(shù)，又能確保免疫抗體水平達到國家規(guī)定的群體保護標準，是一項可行的免疫新技術(shù)，可在農(nóng)村散養(yǎng)戶推廣應(yīng)用。

[1]胡杰，張步嫻.不同免疫方式對仔豬高致病性豬藍耳病、豬瘟、豬 口蹄疫三種疫苗抗體水平的影響[J].中國動物傳染病學(xué)報，2014，22（5）：61-67.

[2]黃崇元，白春蘭.西雙版納州“321”免疫新技術(shù)與傳統(tǒng)免疫抗體水平的比較[J].云南畜牧獸醫(yī)，2015，（4）：41.