張玉香 王藝霖 王鵬珍 劉玉偉 王雅娟 楊文秀

[摘 要]目的 探討萬壽菊中葉黃素的測定方法，為葉黃素產(chǎn)品的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供依據(jù)。方法 選取高效液相色譜法以萬壽菊為原料提取葉黃素，利用watersC18色譜柱；將甲醇：乙腈=40：60為流動相；流速控制在1mL·min-1；柱溫30℃；檢驗波長445nm；體積5μL；外標法定量，測定萬壽菊中葉黃素的含量。結(jié)果 葉黃素含量在8.99-44.68μg·mL-1范圍內(nèi)，葉黃素濃度和峰面積存在良好線性關(guān)系；樣本總體回收率為99.35%；萬壽菊干花葉黃素含量顯著高于顆粒中的含量。結(jié)論 高效液相色譜法在測定萬壽菊中葉黃素含量當(dāng)中有著顯著作用，該方法準確度、靈敏度以及專屬性強，能夠有效測定萬壽菊中葉黃素含量，并為工業(yè)制取提供有力支持。

[關(guān)鍵詞]萬壽菊 葉黃素 測定

中圖分類號：J514 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2018）09-0398-01

葉黃素是一種天然色素，色澤鮮艷，易于著色，營養(yǎng)價值高，而且安全無毒副作用，因此在食品、藥品、化妝品等領(lǐng)域有著十分廣泛的應(yīng)用，應(yīng)用范圍也在不斷擴大。萬壽菊當(dāng)中具有豐富的葉黃素含量，而在測定葉黃素的過程當(dāng)中也有多種方法可供選用，當(dāng)前主要包括紫外可見分光光度法和高效液相色譜法。前者只能檢測出葉黃素和衍生物的總含量，難以對游離態(tài)的葉黃素含量進行準確測定，而后者則可以有效突破這一缺陷，可以有效提高結(jié)果準確度以及特定效率。下面將對高效液相色譜法對萬壽菊中葉黃素的測定進行探討。

1、材料與方法

1.1 實驗材料

本次實驗選擇的材料是萬壽菊干花和顆粒物；葉黃素對照品（總含量在95%以上）

1.2 儀器與試劑

根據(jù)高效液相色譜法測定萬壽菊中葉黃素的實際需要需要選用以下儀器：高效液相色譜儀、多頭磁力攪拌器、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、循環(huán)水式真空泵等。需要選用的實驗試劑主要有：乙醇、乙酸乙酯等分析純；甲醇乙腈色譜純。

1.3 實驗方法

首先，對此次研究的對照品溶液進行置位，選用精密稱取儀器選取葉黃素對照品2.23mg，利用已經(jīng)將對照品進行溶解，定容到含量為25毫升的容量瓶當(dāng)中，獲得89.7μg·mL-1葉黃素儲備液。其次，對此次研究當(dāng)中的高效液相色譜條件進行調(diào)節(jié)，具體為：watersC18色譜柱；將甲醇：乙腈=40：60為流動相；流速控制在1mL·min-1；柱溫30℃；檢驗波長445nm；體積5μL。最后，制備樣品液。將萬壽菊干花/顆粒進行粉碎過篩，稱取過篩完成后的粉末5g，在其中加入100ml的四氫呋喃/無水乙醇混合液以及含量為80%的10ml KOH溶液。在40℃的溫度條件下用儀器攪拌4個小時，過濾和濾渣，用四氫氟喃洗滌濾渣，濾液通過旋蒸除去溶劑。用乙酸乙酯洗下旋蒸瓶當(dāng)中的浸膏，再一次完成過濾之后將濾液收集起來，用乙酸乙酯定容。從中精確移取1ml，利用乙腈定容到10ml容量瓶當(dāng)中，用微孔過濾，最終得到樣品液。

1.4 計算方法

利用高效液相色譜法對萬壽菊當(dāng)中的葉黃素進行含量的測定，需要先計算出提取葉黃素的質(zhì)量，之后通過葉黃素質(zhì)量/萬壽菊顆粒質(zhì)量得到萬壽菊當(dāng)中葉黃素的含量。

2、結(jié)果

葉黃素含量在8.99-44.68μg·mL-1范圍內(nèi)，葉黃素濃度和峰面積存在良好線性關(guān)系；樣本總體回收率為99.35%；萬壽菊干花葉黃素含量顯著高于顆粒中的含量。

3、討論

萬壽菊也被叫做金盞菊，是一種草本植物，含有豐富的葉黃素。葉黃素是天然色素，在水果、蔬菜、藻類生物當(dāng)中都廣泛存在，是優(yōu)質(zhì)天然色素以及抗氧化劑。天然葉黃素，有著非常突出的應(yīng)用功能，如可以保護人體視力，淡化老年斑，預(yù)防癌癥、動脈硬化等疾病，與此同時還有著提高人體免疫力，促進微循環(huán)以及延緩衰老和提高人體生命活力的價值，是優(yōu)質(zhì)抗氧化劑之一，同時也在藥品、化妝品、食品等各個領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用，可以滿足安全無毒和無副作用的要求，有著突出的研究和應(yīng)用價值。葉黃素是植物中的黃金，而且萬壽菊產(chǎn)量也在逐步提高，但是針對于在萬壽菊中測定葉黃素含量以及萬壽菊當(dāng)中開發(fā)利用葉黃素等問題還需要進行深層次的研究，特別是還與國外存在極大差距，仍然需要大量依賴進口。因此，加強對萬壽菊中葉黃素測定技術(shù)和開發(fā)利用方法的分析和研究顯得至關(guān)重要，也有著十分廣闊的前景。

通過大量的文獻報道以及實踐經(jīng)驗總結(jié)可以發(fā)現(xiàn)，高效液相色譜法是當(dāng)前測定萬壽菊中葉黃素含量的重要技術(shù)手段，當(dāng)前已經(jīng)成為了主要檢測方法，因為這一方法有著極強的選擇性和靈敏度，能夠顯著提高分離的質(zhì)量和效率，能夠滿足定量以及定性分析的需求。憑借著高效液相色譜法在萬壽菊中葉黃素含量測定當(dāng)中的諸多優(yōu)勢，這一方法得到了更多的關(guān)注。以往在利用這一技術(shù)檢測葉黃素時，將洗脫劑確定為二氯甲烷和乙酸乙酯，這樣的方法很容易造成基線漂移問題，分離效果以及分離后保存時間都得不到保障，極大程度上加大了成本和實際測定的難度。而且上面的兩種溶液會腐蝕高效液相色譜儀的管路。而在此次研究當(dāng)中有關(guān)的實驗條件進行了優(yōu)化，把常規(guī)的洗脫劑甲醇乙腈作為改進條件，并通過調(diào)整有關(guān)比例投入的方式取得了較為突出的分離效果。

綜上所述，高效液相色譜法在測定萬壽菊中葉黃素含量當(dāng)中有著顯著作用，該方法準確度、靈敏度以及專屬性強，能夠有效提高樣品回收率，降低雜質(zhì)干擾，可以成為測定萬壽菊中葉黃素含量的穩(wěn)定方法。

參考文獻

[1] 陳麗梅.萬壽菊葉黃素的提取及分析方法研究進展[J].食品科學(xué)，2015，（16）：61-63.

[2] 孟祥河.高效液相法測定萬壽菊顆粒中葉黃素的含量[J].特產(chǎn)研究，2014，（5）：82-83.

[3] 張志強.薄層掃描法測定萬壽菊中葉黃素的含量[J].化學(xué)世界，2017，（9）：536-539.