◎ 孫端方，左澤彥，田志強(qiáng)

（貴州省產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院，貴州　貴陽　550016）

當(dāng)前轉(zhuǎn)基因作物的研發(fā)和種植發(fā)展迅速，轉(zhuǎn)基因作物產(chǎn)品的利弊之爭也是全球熱點(diǎn)，而轉(zhuǎn)基因動物卻通常只見于新聞媒體刊載的一些實(shí)驗(yàn)室先進(jìn)成果報道、分子生物學(xué)科普文章等。在2015年，美國FDA批準(zhǔn)AquaBounty Technologies公司的AquAdvantage轉(zhuǎn)基因三文魚上市；2017年，該公司完成了該三文魚的首次規(guī)模銷售，由此標(biāo)志著轉(zhuǎn)基因動物產(chǎn)品已開始進(jìn)入市場；截至當(dāng)前，市售轉(zhuǎn)基因動物產(chǎn)品也僅此三文魚一種。

本文完稿時，未見我國農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)該三文魚進(jìn)入國內(nèi)市場。但目前跨國貿(mào)易蓬勃發(fā)展、進(jìn)口商品可謂海量，也常有漏網(wǎng)之魚悄然在市場銷售。為確保消費(fèi)者的知情權(quán)、了解相關(guān)產(chǎn)品情況、面向省內(nèi)開展實(shí)踐相關(guān)檢測技術(shù)，對市售進(jìn)口三文魚食品進(jìn)行轉(zhuǎn)基因成分檢測的抽樣調(diào)研。

1　材料與方法

1.1　取樣、制樣

樣品均為市場隨機(jī)抽樣，抽樣范圍為餐飲、散裝、包裝各10批次，分別編為1～10號樣品。樣品的取樣和前處理按SN/T 1194-2014執(zhí)行，進(jìn)行雙平行檢測。

1.2　DNA提取

DNA提取試劑盒為TaKaRa MiniBEST Universal Genomic DNA Extraction Kit Ver.5.0。樣品DNA提取后，用Thermofisher NanoDrop One進(jìn)行DNA純度和濃度測定，若1.6＜OD260/280＜1.8則進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，否則重新進(jìn)行DNA提取。濃度若低于20 ng/μL，則用Millipore Microcon DNA fast flow (PCR grade)濃縮DNA濃度至20 ng/μL以上，若高于50 ng/μL，用ddH2O稀釋至50 ng/μL以下。

1.3　檢測方法

熒光PCR所用引物和探針根據(jù)AquAdvantage公開序列進(jìn)行設(shè)計，包括內(nèi)源基因和外源基因各一對。熒光PCR試劑為TaKaRa Premix Ex Taq (Probe qPCR),ROX plus，熒光PCR體系配置及反應(yīng)參數(shù)按上述試劑盒說明書，用熒光PCR儀ABI One step plus檢測。

2　結(jié)果與分析

餐飲、散裝、包裝中1號樣品的內(nèi)源和外源基因的熒光信號如圖1所示，內(nèi)源基因20＜Ct值＜30，熒光信號有明顯S型曲線；外源基因Ct值≥40，熒光信號無S型曲線；其余樣品與上述示例情況相同。陽性對照、陰性對照、空白對照的檢測結(jié)果均符合要求（圖略）。由上可知，未檢出含有轉(zhuǎn)基因成分的樣品批次。

圖1　熒光PCR圖譜圖

3　討論

3.1　檢出率

本次實(shí)驗(yàn)未檢出轉(zhuǎn)基因三文魚批次，表明當(dāng)前轉(zhuǎn)基因三文魚及相關(guān)產(chǎn)品尚未流入貴陽市場。

3.2　檢測方法

隨著基因工程在食品研究中的深入運(yùn)用，轉(zhuǎn)基因食品的市場化將從微生物、植物領(lǐng)域拓展到動物方面。目前，主流PCR檢測技術(shù)以基因序列為主要檢測對象，能夠滿足未來轉(zhuǎn)基因動物產(chǎn)品的基礎(chǔ)定性檢測需求，但目前仍有標(biāo)準(zhǔn)方法更新慢、深加工產(chǎn)品難檢測等常見問題。