任曉麗，常宏建，趙冰冰，肖 敏，劉 云

(東北農業(yè)大學動物醫(yī)學學院黑龍江省重點實驗室/實驗動物與比較醫(yī)學重點實驗室，黑龍江哈爾濱 150030)

乳腺腫瘤是全世界范圍內嚴重威脅女性生命和健康的最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率呈逐漸升高的趨勢。據國際癌癥研究機構(http://www.iarc.fr/)報道，在2012年，170萬婦女被診斷患有乳腺癌，在過去5年中630萬女性被診斷患有乳腺癌，2012年因乳腺瘤死亡522 000人[1]。犬乳腺腫瘤是一種發(fā)生于母犬的自發(fā)性腫瘤，其發(fā)病率約是女性的3倍，病理組織學診斷約50%為惡性腫瘤，其分子表型和生物學特征與人類乳腺腫瘤相似，適合作為研究人類乳腺腫瘤的模型[2]。乳腺腫瘤具有異質性，基于不同的基因表達譜，分為不同亞型，腫瘤轉移擴散是造成患者死亡的主要原因。microRNA(miRNA)是正常和異常生物過程(包括癌癥)中調控機體mRNA表達的關鍵調節(jié)劑，miRNA的失調發(fā)生在各種類型的癌癥中，與腫瘤發(fā)生、耐藥性和轉移有關[3]。因此，基于調節(jié)miRNA表達水平和鑒定其靶標是乳腺癌早期診斷的有力依據。本文主要總結miRNA在乳腺腫瘤發(fā)展中的主要功能，并討論調控miRNA表達和檢測miRNAs水平的臨床應用。

1 miRNA的生物合成和功能

miRNA是一類進化上高度保守的非編碼單鏈小分子RNA，大小為18 nt～23 nt，轉錄后調節(jié)基因表達。大部分的miRNA主要通過RNA聚合酶Ⅱ作用被轉錄成莖環(huán)樣結構的pri-miRNA，很少一部分由RNA聚合酶Ⅲ轉錄。細胞核內的初級pri-miRNA在Drosha酶(RNase Ⅲ酶)及其輔助因子DGCR8作用下被剪接，修飾成70 nt～100 nt的pre-miRNAs(pre-miRNAs也可以通過mirtron途徑產生；通過核轉運受體(Exportin-5：Ran依賴性核轉運受體家族的成員)將Pre-miRNA轉運到細胞質，在Dicer和TRBP或ADR1作用下，將Pre-miRNA進一步切割成大約22 nt的不完全互補配對的雙鏈RNA；成熟miRNA的功能鏈被并入含有GW182和AGO蛋白的RNA誘導的沉默復合物(RISC)中，作為該復合物的一部分，成熟的miRNA調節(jié)基因表達通過與靶mRNA的3′UTR或5′UTR中的部分互補序列結合，導致mRNA降解，翻譯抑制或轉錄激活[4-5]；例如，Liu M等[6]發(fā)現(xiàn)嵌入基因的miR-483-5p直接與胰島素樣生長因子2(IGF2)基因的5′UTR結合并誘導其在人腎母腫瘤中的轉錄，導致mRNA降解或翻譯抑制。

2 miRNA常用的檢測方法及驗證方法

2.1 miRNA的檢測方法

2.1.1 RT-qPCR RT-qPCR方法是目前臨床上檢測腫瘤樣本miRNA表達量最常用的方法，分為莖環(huán)法、polyA加尾法。其主要差別在于RT-qPCR之前的cDNA制備過程，兩步法是通過獨特設計的莖環(huán)結構引物進行反轉錄將miRNA反轉錄成cDNA。而polyA加尾法是利用反轉錄過程將miRNA反轉錄成cDNA并加上獨特設計的尾部序列。莖環(huán)法的優(yōu)勢是特異性高，miRNA 3′序列易出現(xiàn)多樣化現(xiàn)象，影響檢測準確性。而polyA加尾法則不受這一現(xiàn)象的影響，polyA加尾法的特異性如今已經可以和莖環(huán)法媲美，成本低[7]。

2.1.2 Northern blot Northern blot是被譽為檢測miRNA的經典方法，其原理是通過尿素變性凝膠電泳的方法，根據大小進行片段分離，將與目的miRNA互補的標記的探針雜交到硝酸纖維素膜或尼龍膜上顯影檢測。檢測結果可同時用于miRNA表達水平的定量檢測和用于區(qū)分miRNA前體與成熟體的位置。地高辛和鎖核苷酸是常用的探針標記，其優(yōu)點是鑒定miRNA的分子量大小，并可以顯示多個miRNA的分子量大小及濃度；缺點是操作繁瑣，靈敏度低；同時miRNA不易結合于固相雜交膜上，耗費大量RNA樣本，敏感性低；還會增加RNA酶容易降解的風險[7]。

2.1.3 高通量技術 基因芯片技術興起于20世紀90年代，其優(yōu)勢是具有極高的檢測通量，檢測成本較低，但是基因芯片只能顯示出2倍以內的表達差異，屬于定性半定量檢測技術。Small RNA測序是一種最新的高通量測序技術，采用膠分離技術，收集樣品中18 nt～30 nt RNA片段，利用高通量測序技術，一次性獲得單堿基分辨率的數百萬條小RNA序列信息，依托生物學信息分析技術，鑒定已知小miRNA并預測新的miRNA及其靶基因，增加了新miRNA發(fā)現(xiàn)率。技術優(yōu)勢包括：①通量高。一次測序得到500萬條以上的序列；②分辨率高?？梢詸z測小 RNA單個堿基的差異；③精準度高。從幾個到數十萬個拷貝精確計數；④不依賴已知信息。既能鑒定已知小RNA，又能發(fā)現(xiàn)新小RNA；⑤可重復性高。深度測序保證了抽樣隨機性，重復性非常好。但該技術價格昂貴，對miRNA樣本處理要求較高，且隨著讀長增加，熒光信號逐漸減弱，堿基準確性會逐漸降低，使得深度測序讀長受到一定限制[8]。

2.2 miRNA-靶標相互作用驗證

目前，已經開發(fā)了許多驗證miRNA-mRNA相互作用的實驗技術。一般來說，使用miRNA模擬物或miRNA抑制劑寡核苷酸或構建載體轉染，在蛋白質水平上通過蛋白質印跡和mRNA水平通過RT-qPCR(攜帶具有靶基因的特異性探針)方法獲得靶基因的差異miRNA表達的影響，缺點是不能區(qū)分miRNA靶標直接和間接相互作用。

2.2.1 螢光素酶測定 熒光素酶測定通常用于研究與其他細胞事件相關的基因表達，例如受體活性或蛋白質-蛋白質相互作用的細胞內信號轉導。螢火蟲熒光素酶測定被廣泛用于分析miRNA-mRNA直接的相互作用，原理是利用熒光素酶與底物結合發(fā)生化學發(fā)光反應的特性，把感興趣的基因轉錄的調控元件克隆在螢火蟲熒光素酶基因的上游，構建成熒光素酶報告質粒，轉染細胞，將模擬物miRNA或抑制劑miRNA轉入細胞中，檢測熒光素酶活性的高低判斷miRNA和靶基因的3′UTR的之間的作用程度，通常將Renilla(REN)熒光素酶用作發(fā)光標準化的參考基因。該方法優(yōu)勢在于報告物活性在翻譯后立即產生，測定非?？焖俸挽`敏，并且在宿主細胞及檢測試劑中沒有熒光背景。缺點是費時，價格昂貴，僅對于選擇用于克隆的3′UTR敏感，并且難以用于轉染[9]。

2.2.2 RISC免疫沉淀 RISC的免疫沉淀反應(如AGO和TNRC6)能直接識別和分離miRNA靶標復合物的生物化學方法。該方法能獲得低豐度和短暫的miRNA-mRNA對。miRNA調控的靶mRNA與RISC一起進行免疫沉淀反應，并通過RT-qPCR、微陣列或深度測序等方法進行分析。整個復合體的連續(xù)斷開依賴于miRNA靶標復合物和RISC之間的強相互作用以及所用抗體能沉淀AGO2(核心RISC蛋白通常用于復合免疫沉淀反應)。一些公司已經開發(fā)出RISC蛋白亞基的顯性負突變體，以將miRNA靶標復合體捕獲到RISC中，從而限制進一步的處理，這種方法可以恢復瞬時和低豐度mRNA靶標，否則會丟失，然后使用FLAG表位捕獲整個復合物，使用RT-qPCR或新一代測序技術來鑒定miRNA和靶mRNA之間的相互作用[10]。

3 miRNA與乳腺腫瘤

miRNA表達的時序性和組織特異性提示可能靶向人類中的任何mRNA。miRNA在細胞分化、生物發(fā)育及疾病發(fā)展過程(癌癥)中發(fā)揮巨大的作用。關于乳腺癌診斷和治療取得了進展，但仍不樂觀。Bertoli G等[3]研究表明，miRNA在乳腺癌中發(fā)揮腫瘤抑癌基因或癌基因或同時具有兩者的雙重作用，超過50%的人類miRNA基因位于腫瘤相關基因組缺失和擴增區(qū)域染色體脆性位點，提示miRNA不僅有助于乳腺腫瘤早期診斷、預后評估和療效預測，而且還起到新的治療靶點和替代療法的作用。下面討論幾種常見的miRNA 在乳腺腫瘤中作為癌基因或抑癌基因的功能。

3.1 miRNA-200家族

miR-200家族由miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141和miR-429組成?；谌旧w位置分為兩個簇，其中簇1由miR-200b、miR-200a和miR-429組成，位于人類染色體1上，由miR-200c和miR-141組成的簇2，位于人類染色體12上。兩個簇之間的基因序列僅由單個核苷酸區(qū)別，這表明miR-200的成員可能潛在地靶向相似的生理效應基因的共同亞群，由于兩組間目標基因重疊程度相對較高，miR-200家族的所有成員適合作為靶向共同基因亞基的良好候選者。Noman M Z等[11]研究顯示miR-200家族參與癌癥干細胞(CSCs)和正常干細胞的自我更新的調控。miR-200c在胚胎癌細胞中的異位過度表達導致體內神經分化和抑制乳腺CSCs的致瘤性。Lutful K F等[12]通過犬CMT-12、CMT-27、CMT-28對miRNA RT-qPCR分析發(fā)現(xiàn)，miR-200a/b在3株細胞系中高度表達；而miR-200c不同的犬乳腺癌細胞系表達不同，CMT-12和CMT-27細胞系中高度上調，CMT-28細胞系表達下調。Damiano V 等[13]發(fā)現(xiàn)miR-200b / c通過抑制ZEB2表達促進間充質細胞向上皮細胞轉化(MET)，促進乳腺癌細胞系中的宏觀轉移。miR-200家族暴露于轉化生長因子-β(TGF-β)后下調，TGF-β可以作為誘導EMT表型的細胞因子，miR-200家族的重新表達顯著抑制TGF-β誘導的EMT，而抑制miR-200家族的導致EMT表型的誘導，此外，在誘導EMT后，ZEB1和ZEB2的水平升高，這表明miR-200家族是間充質標記ZEB1和ZEB2的負調節(jié)因子。因此，這些研究表明miR-200家族在乳腺癌轉移和侵襲性的調節(jié)中起關鍵作用。

3.2 let-7家族

let-7家族是哺乳動物第1個被確定的miRNAs，發(fā)現(xiàn)于秀麗隱桿線蟲，在整個動物類群中保守，為公認的抑癌基因。let-7族由12個成員組成，包括let-7-a1、let-7-a2、let-7-a3、let-7-b、let-7-c、let-7-d、let-7-e、let-7-f1、let-7-f2、let-7-g、let-7-i和miR-98。Yu F等研究表明，let-7通常在分化程度較低的細胞中缺失，表現(xiàn)出間質表型并代表晚期癌，相反，let-7在分化程度高的細胞中高表達，表現(xiàn)出上皮表型并代表較早期癌。進一步研究發(fā)現(xiàn)使用let-7在BT-ICs中降低其增殖能力，形成乳腺球體和腫瘤形成和轉移。相反，體外敲除let-7增強非BT-IC的自我更新；過表達let-7下調致癌靶標如H-RAS和HMGA2。在富含BT-IC的細胞系中沉默H-RAS減少自我更新，但不影響分化，同時敲除HMGA2增強分化，但沒有影響自我更新，結果表明，let-7調節(jié)多種BT-IC干細胞樣特性，因此通過靶向let-7在乳腺癌患者中的癌癥治療可能是有益的，可以作為新的治療方案[14]。Dangi-Garimella S等[15]研究發(fā)現(xiàn)，RKIP蛋白(Raf激酶抑制蛋白)和let-7與乳腺癌轉移相關，RKIP是抑制人類乳腺癌中的MAPK，G蛋白偶聯(lián)受體激酶-2和NF-κB信號級聯(lián)的抑癌基因，RKIP通過信號級聯(lián)抑制侵襲和轉移，其涉及MAPK、MYC、LIN28、et-7和下游let-7靶標，如HMGA2，與癌細胞轉移相關。雌二醇(E2)可能會增強let-7家族的8個成員的水平增加。E2也作為雌激素受體α(ER-α)和雌激素受體β(ER-β)的配體，ER-α和let-7家族的各種成員之間的表達存在逆關聯(lián)。與良性腫瘤相比，let-7家族miRNA在人乳腺癌細胞的原位導管癌和侵襲性導管癌的階段中下調，let-7家族成員在ER陽性細胞中過表達導致ER-α活性下調，細胞增殖減少，誘導細胞凋亡。關于let-7的研究結果表明它可以用作未來的癌癥治療劑。目前普遍公認的是let-7水平在正常細胞中高表達，而在侵襲性癌細胞系中表達量降低。然而，let-7異常調控機制及其在腫瘤發(fā)生中的作用尚未完全了解，進一步研究癌癥中l(wèi)et-7活性背后的分子機制將改善治療應用的治療計劃。

3.3 miR-145

miR-145作為一種抑癌基因，在特異性階段中通過沉默不同的靶基因發(fā)揮腫瘤抑制功能。Osaki T等[16]對SNP(犬乳腺癌細胞系)和犬的正常乳腺組織miRNA 分析結果顯示，與正常相比，miR-145在SNP細胞中高表達，表達差異933.499倍，而Boggs R M等[17]研究顯示犬乳腺腫瘤中miR-145表達差異不顯著，在人乳腺癌也證明有不同的表達[3]。Ding Y等[18]通過RT-qPCR對乳腺癌和癌旁組織檢測，同時發(fā)現(xiàn)miR-145過表達降低乳腺癌細胞增殖活力及抑制TGF-G1的表達，沉默miR-145反而增強。Zhao H等[19]已經證明，BT-IC分化所必需的胰島素受體底物-1(IRS-1)是miR-145的直接靶標，miR-145顯著性降低RTKN蛋白表達，從而抑制細胞生長和誘導細胞凋亡。miR-145在乳腺癌作為抑癌基因，直接靶向FSCN-1，阻斷Oct4的表達，抑制EMT的轉移。

3.4 miR-34a

miR-34a是多種類型癌癥中表達下調的若干種miRNA之一，已被證明由p53轉錄調控。Kato M等[20]發(fā)現(xiàn)與正常上皮細胞系和HER2+細胞系相比，三陰性和間充質乳腺癌細胞系的miR-34a水平較低，結果表明乳腺癌亞型中的p53突變可能有助于低miR-34a表達。為了進一步闡明這些細胞中miR-34a和放射敏感性之間的關系，比較正常乳腺上皮細胞系(HMEC)，HER2+(UACC812)和間充質細胞系(MDA-MB-231)的敏感度，發(fā)現(xiàn)與HMECs或UACC-812(具有高miR-34a水平)相比，MDA-MB-231細胞系(具有低miR-34a水平)對輻射誘導更敏感，增加miR-34a的水平能保護MDA-MB-231細胞免受輻射誘導的細胞死亡，下調miR-34a具有相反的作用，由于miR-34a水平能影響乳腺癌細胞的輻射敏感性，因此miR-34a可能具有很大的乳腺癌治療潛力。Li L等[21]研究發(fā)現(xiàn)與正常上皮細胞系184A1相比，其miR-34a表達水平在5種不同的乳腺癌細胞系中下調，miR-34a能夠通過下調Bcl-2和SIRT1抑制乳腺癌細胞增殖、遷移和誘導細胞凋亡。Losiewicz K等[22]發(fā)現(xiàn)與正常的犬乳腺組織相比，RT-qPCR結果顯示miR-34a在乳腺癌中下降2.5倍，在肉瘤、良性腫瘤和非腫瘤病變中下降5倍，miR-34a異常表達與乳腺腫瘤的早期診斷相關。

3.5 miRNA-125

miR-125有2種已知的同種亞型，即miR-125a和miR-125b。Iorio M V等[4]和Osaki T等[16]研究發(fā)現(xiàn)與正常乳腺組織相比，在犬和人類乳腺癌患者中發(fā)現(xiàn)miR-125a和miR-125b均明顯下調。Guo X等[23]研究表明miRNA-125a與各種乳腺癌細胞系中的HuR表達呈負相關，過表達miR-125a導致HuR蛋白水平降低，抑制細胞生長，并減少細胞遷移和增殖，miR-125a可以通過利用HuR作為直接和功能靶標潛在協(xié)助抑制乳腺癌。進一步的研究表明，miR-125a和miR-125b在HER2的擴增或HER2過表達的乳腺癌中顯示下調。miR-125a和miR-125b作為抑癌基因，在SKBR3細胞(HER2過表達的人類乳腺癌細胞系)中過表達，抑制HER2 mRNA和蛋白質水平，導致減少細胞生長、運動和侵襲，然而，這種影響在非轉化的HER2非依賴性乳腺癌細胞(MCF10A)中是微妙的。Sun Y 等[24]發(fā)現(xiàn)TSTA3在乳腺癌細胞和組織中高表達，與TNM分期、患者的生存期密切相關，miR-125b和miR-125a-5p在3′UTR區(qū)域共同調節(jié)TSTA3的表達，miR-125b和miR-125a-5p與腫瘤的生長、侵襲、轉移相關。

3.6 miRNA-10b

miR-10b作為一種抑癌基因，阻止乳腺癌的發(fā)展，以及作為一個癌基因，引起乳腺癌的侵襲和轉移，Osaki T等[16]和Losiewicz K等[22]發(fā)現(xiàn)miR-10b表達在犬乳腺腫瘤中增加。Ma L等[25]miR-10b在轉移性乳腺癌細胞中高度表達，在體外miR-10b被twist轉錄因子激活，引起HOXD10mRNA翻譯的中斷，這導致RhoC的表達增加，其促進細胞侵襲和轉移；與幾乎不具有轉移能力的MCF-7細胞系相比，轉移性MDA-MB-231乳腺癌細胞系miR-10b表達水平明顯更高；與非轉移性對照SUM149細胞的腫瘤相比，將miR-10b轉導入非轉移性SUM149和SUM159原位植入小鼠乳腺，顯示miR-10b表達組表現(xiàn)出更多的癌細胞侵襲和一些呈現(xiàn)肺轉移；miR-10b拮抗劑組癌細胞侵襲轉移顯著抑制。Bahena O I等[26]發(fā)現(xiàn)miR-10b在乳腺癌細胞中的過表達可以抑制PTEN的表達，激活AKT信號的活性，促進細胞中EMT和干細胞標志物的表達，從而促進乳腺癌侵襲和轉移。Han X等[27]研究發(fā)現(xiàn)miR-10b表達的靶基因TGF-β1可促進TGF-β1誘導乳腺癌細胞EMT的發(fā)生，miR-10b表達的抑制可以部分逆轉EMT，并減弱癌細胞的增殖和侵襲能力。

3.7 miR-21

miR-21是與乳腺癌細胞侵襲和轉移相關的重要miRNA，在包括乳腺癌在內的各種實體腫瘤中表達上調，它在促進腫瘤發(fā)展中發(fā)揮作用。Iorio M V等[4]、Osaki T等[16]和Losiewicz K等[22]研究發(fā)現(xiàn)與正常乳腺組織相比，已經發(fā)現(xiàn)miR-21在乳腺腫瘤中顯著過度表達，并且與晚期階段，淋巴結陽性和存活時間減少有關；隨后的研究也證明miR-21的作用不僅在其作為生物標志物的活性中起重要作用，而且作為功能靶標。Zhao H等[19]進一步探索miR-21在乳腺癌發(fā)展和進展中的作用，用anti-miR-21寡核苷酸轉染MCF-7乳腺癌細胞的研究發(fā)現(xiàn)體外細胞生長減少和在異種移植小鼠模型中體內腫瘤生長被抑制。Chen Z等[28]和Fang H等[29]研究已經證實miR-21影響多個靶點，包括PDCD4，TPM1，maspin和PTEN基因。然而，盡管miR-21的上調與侵襲性腫瘤相關，但仍然沒有靶標基因如PTEN和PDCD4的明確模型。miR-21是一種致癌miRNA，不僅在腫瘤生長中發(fā)揮作用，而且在靶向多種抗轉移基因的侵襲和轉移中起作用，進一步的研究應該探討miR-21靶標，以利于更好的乳腺癌的靶向治療。

3.8 miRNA-155

miR-155是表現(xiàn)出癌基因性質的miRNA，在乳腺癌細胞中的表達明顯增加。Kong W等報道m(xù)iR-155通過RhoA基因可以激活TGF-β/ Smad4信號，從而促進EMT。相反，miR-155的敲除可以顯著抑制TGF-β/ Smad4誘導的EMT。在乳腺癌細胞系中SOCS1已被確定為miR-155的靶標，SOCS1的表達與miR-155的表達呈負相關。miR-155過表達增強乳腺癌細胞的增殖和體內腫瘤的發(fā)展。此外，在乳腺癌細胞中沉默SOCS1重新建立了miR-155的致癌作用，而恢復SOCS1表達促進了miR-155的促腫瘤生長功能，表明miR-155負調節(jié)SOCS1[30]。Kong W等[31]研究發(fā)現(xiàn)乳腺癌中miR-155負調控靶向FOXO3a，miR-155過表達導致抑制FOXO3a表達以誘導EMT，激活絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)信號，并下調RhoA表達，從而誘導細胞存活和增強癌細胞的耐藥性，并且miR-155的敲除，導致FOXO3a增加，誘導細胞凋亡和化學敏感性的增加，這項研究表明，乳腺癌細胞系miR-155與FOXO3a之間存在逆向相關性，提示miR-155是乳腺癌中必不可少的治療靶點。

3.9 miRNA-221和miRNA-222

miR-221和miR-222都被鑒定為基底樣乳腺癌亞型特異性miRNA，兩種miRNA作為EMT的調節(jié)因子，引起細胞遷移和侵襲增加。Hwang M S 等[32]研究發(fā)現(xiàn)，miR-221和miR-222抑制靶標TRPS1表達，相反增加ZEB2表達。Alamolhodaei N S等[33]進一步的研究顯示，miR-221和miR-222差異表達，兩種miRNA在雌激素受體陰性(ER-)乳腺癌中過表達，而這些miRNA在乳腺癌中的過表達有助于侵襲性的基底樣乳腺癌的進展，抑制細胞周期抑制蛋白p27/Kip1和p57，導致細胞增殖增加，這些特征也有助于他莫昔芬在基底型乳腺癌中的耐藥；將miR-221和miR-222合成模擬物轉染到非轉化乳腺細胞系MCF10A中導致誘導的EMT樣表型，增加侵襲和遷移，并增加間充質標志物vimentin表達。此外，抑制轉移性MDA-MB-231乳腺癌細胞系中的miR-221和miR-222出現(xiàn)反向表型，因此，兩種miRNA在促進臨床侵襲性基底樣乳腺癌中起著重要作用。

3.10 其他miRNA

Hannafon B N等[34]發(fā)現(xiàn)致癌基因miR-182和miR-183在導管原位癌(DCIS)中過表達，抑制miR-182和miR-183導致其4種靶基因(CBX7、DOK4、NMT2和EGR1)的上調，同時又導致E鈣黏蛋白表達的上調，這表明敲除這2種miRNA可能對乳腺癌恢復正常的上皮細胞形態(tài)具有重要的意義。Rybicka A 等[35]發(fā)現(xiàn)miR-214在犬乳腺細胞系(CMT-12、CMT-27、CMT-128)中下調但是與正常乳腺組織相比，miRNA基因芯片分析顯示miRNA-183在犬乳腺腫瘤SNP細胞低表達，下降比率為0.190 3。Wang F等[36]研究發(fā)現(xiàn)與其在非惡性乳腺上皮細胞系MCF-10A中的表達水平相比，在4種人乳腺癌細胞系(MCF-7、MDA-MB-231、 MDA-MB-453 和T47D)miR-214的表達上調。此外，miR-214的過表達顯著增加了細胞活力，并消除了血清饑餓引發(fā)的凋亡，表明miR-214在乳腺癌細胞生長中起關鍵作用。此外，通過生物信息學分析和雙螢火蟲熒光素酶報告基因測定，PTEN被證實作為miR-214的直接靶標；重要的是，缺乏3′非翻譯區(qū)(3′UTR)的PTEN cDNA的引入顯著抑制miR-214誘導的PI3K/Akt信號通路的激活，并且消除了miR-214對細胞存活和抗凋亡的保護作用，這些發(fā)現(xiàn)表明miR-214具有致癌活性，其作用是通過靶向PTEN-PI3K/Akt途徑促進細胞生長而介導的。因此，針對miR-124的藥物干預可為乳腺癌的治療提供有希望的治療策略。

4 miRNA在腫瘤診斷中的研究前景

腫瘤標志物在乳腺腫瘤早期診斷、預防、藥效評價及預后評價等方面發(fā)揮著極其重要的作用。但miRNA在犬乳腺腫瘤的早期診斷研究還處于起步階段，同時在人類乳腺癌中還有很多復雜的機制尚未完全清楚。隨著miRNA作用機制及與腫瘤之間關系的進一步深入研究，對腫瘤特異的miRNA表達譜的分析、確立，以及miRNA臨床檢測方法的不斷完善，以實現(xiàn)miRNA對人類及犬乳腺腫瘤的早期診斷和預后評估，從而為人類和犬乳腺腫瘤帶來新的預防、診斷和治療手段。

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