雒誠(chéng)龍，邵 偉,，任萬(wàn)平，趙艷坤，王東海，余 雄

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，烏魯木齊　830052；2.新疆肉乳用草食動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊　830052)

0　引 言

【研究意義】生物素是動(dòng)物體內(nèi)一種重要的羧化酶，由于其可通過(guò)機(jī)體內(nèi)源合成，因此生物素缺乏現(xiàn)象極為罕見，這也造成了對(duì)生物素的研究相對(duì)較少。隨著研究的推進(jìn)，近來(lái)發(fā)現(xiàn)生物素有助于機(jī)體促進(jìn)正常糖脂代謝，并改善機(jī)體內(nèi)環(huán)境。但就細(xì)胞層面而言，生物素在糖脂代謝過(guò)程中對(duì)相關(guān)物質(zhì)究竟有何影響仍處在摸索階段。【前人研究進(jìn)展】在脂肪細(xì)胞中，細(xì)胞會(huì)將多余的葡萄糖經(jīng)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體4(glucose transporter 4，GLUT-4)加速轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)[1]，并在己糖激酶(hexokinase，HK)、磷酸果糖激酶(phosphofructokinase，PFK)、丙酮酸激酶(pyruvate kinase，PK)等酶催化下轉(zhuǎn)化為丙酮酸，再經(jīng)轉(zhuǎn)化生成合成甘油三酯(triacylglyceride，TG)的前體物質(zhì)乙酰CoA[2]。乙酰CoA在經(jīng)過(guò)乙酰輔酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase，ACC)、脂肪合成酶(fatty acid synthase，F(xiàn)AS)等一些列酶的催化下合成TG[2]，TG再經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞脂滴儲(chǔ)存[3]。生物素是機(jī)體內(nèi)必不可少的輔酶因子[4]，可參與或間接調(diào)控機(jī)體內(nèi)多項(xiàng)脂合成反應(yīng)[5]。已有研究證明，在奶牛日糧中添喂生物素可提高乳脂、乳糖含量[6]，生物素還可通過(guò)調(diào)節(jié)固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白調(diào)節(jié)細(xì)胞脂合成相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)[7]，生物素亦可通過(guò)改善細(xì)胞狀態(tài)[8]，促細(xì)胞糖利用并向脂質(zhì)轉(zhuǎn)化?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】前人對(duì)生物素的研究多集中于動(dòng)物整體水平，而于細(xì)胞層面研究較少。研究在體外培養(yǎng)糖脂代謝活躍的3T3-L1脂肪細(xì)胞，并添加生物素進(jìn)行干預(yù)，探究生物素對(duì)脂肪細(xì)胞中脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)間的影響?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】研究不同生物素濃度對(duì)脂肪細(xì)胞中脂肪合成相關(guān)基因表達(dá)的影響，為更好的利用生物素調(diào)控脂肪細(xì)胞發(fā)育提供理論基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1　材 料

1.1.1主要儀器

倒置顯微鏡、二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱、酶標(biāo)儀、低速離心機(jī)、實(shí)時(shí)定量PCR儀。

1.1.2主要試劑

高糖DMEM培養(yǎng)基、油紅O染料、胰島素、地塞米松(DEX)、3-異丁基-1-甲基黃嘌呤(IBMX)，吲哚美辛，胰蛋白酶、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、qPCR試劑盒、引物由上海博谷生物科技公司合成。

1.2　方 法

1.2.1試驗(yàn)設(shè)計(jì)

按單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)，在細(xì)胞培養(yǎng)液中加入不同劑量的生物素為試驗(yàn)組，使培養(yǎng)基內(nèi)生物素濃度分別達(dá)0 μmol/L、0.2 μmol/L、0.5 μmol/L、1 μmol/L，每組試驗(yàn)3個(gè)平行樣，每個(gè)平行樣3次重復(fù)，分別在12 h、24 h、48 h時(shí)，檢測(cè)細(xì)胞上清液中甘油釋放量及細(xì)胞內(nèi)GLUT-4、PK、FAS及ACC1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.2.23T3-L1前脂肪細(xì)胞株的培養(yǎng)與分化[9]

將3T3-L1前脂肪細(xì)胞株用含10% FBS的高糖DMEM培養(yǎng)基在37℃、5% CO2條件下培養(yǎng)。待細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶底壁時(shí)，將細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板中，待細(xì)胞長(zhǎng)滿2 d后，加入含10% FBS的DMEM培養(yǎng)基及含0.5 mmol/L IBMX、0.25 μmol/L DEX、10 mg/L胰島素的分化液，培養(yǎng)48 h，再以含10 mg/L胰島素的培養(yǎng)液培養(yǎng)48 h，然后用含10% FBS的DMEM培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，每隔2 d換液1次，誘導(dǎo)分化8～12 d后，待90%以上的3T3-L1細(xì)胞呈脂肪細(xì)胞表型再進(jìn)行下一步處理。

1.2.3添加不同濃度生物素干預(yù)

將誘導(dǎo)分化好的脂肪細(xì)胞以1×105/mL接種于24孔板，用完全培養(yǎng)液培養(yǎng)12 h，待細(xì)胞完全貼壁后，換不同濃度生物素培養(yǎng)基孵化。各組培養(yǎng)基中生物素濃度為0(對(duì)照組)、0.2、0.5、1 μmol/L，每組設(shè)3個(gè)平行復(fù)孔，每孔設(shè)3個(gè)平行。

1.2.4實(shí)時(shí)熒光定量方法[10]

參照試劑盒說(shuō)明書提取各組細(xì)胞總RNA，全自動(dòng)酶聯(lián)免疫分析儀測(cè)出RNA濃度以及OD260nm/OD280nm，以提取的總RNA為模板，按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(10 μL，37℃ 15 min，85℃ 5 s)合成cDNA。RCR按20 μL反應(yīng)體系進(jìn)行，反應(yīng)條件：95℃ 30 s變性，95℃ 5 s，60℃ 31 s，50個(gè)循環(huán)，上機(jī)自動(dòng)分析熒光信號(hào)，并將其轉(zhuǎn)換Ct值，采用ΔΔCt法分析，以磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)為內(nèi)參基因計(jì)算GLUT-4、PK、FAS、ACC1 mRNA相對(duì)定量值(2-ΔΔCt)?；蛐蛄芯鶑腉enbank中獲取，引物用Primer 5.0軟件進(jìn)行設(shè)計(jì)，由上海博谷生物科技有限公司合成。表1

1.2.5熒光定量PCR引物(表1)

1.3　數(shù)據(jù)處理

所有原始數(shù)據(jù)先用Excel 2016進(jìn)行整理，用SPSS 22軟件進(jìn)行單因素方差分析，并用Duncan法進(jìn)行多重比較。以P<0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，P<0.01作為差異極顯著判斷標(biāo)準(zhǔn)。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)的最終結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

表1定量PCR 引物信息
Table1Primer sequences of Real-time fluorescent quantitative PCR

基因名稱Genename引物序列Primersequences(5’-3’)擴(kuò)增長(zhǎng)度Amplificationlength(bp)退火溫度Annealingtemperature(℃)GLUT-4F：CACCGGCAGCCTCTGATCR：TAAGAGCACCGAGACCAACG18059PKF：TGGATGGGGCTGACTGTATCR：CGTAGCTCCTCAAACAACTGG13958ACC1F：CATCGATAACCCTTCAGCAGAGR：GCCTCGGTTTTGTCGTCC15959FASF：GGGCTACAGAGATGGACTTCGR：AGGCAGCCACTCCAACAAG19059GAPDHF：GAGAAACCTGCCAAGTATGATGR：AGAGTGGGAGTTGCTGTTGAAG12959

2　結(jié)果與分析

2.1　生物素濃度對(duì)細(xì)胞GLUT-4 mRNA表達(dá)量的影響

研究表明，在試驗(yàn)12 h時(shí)，各試驗(yàn)組GLUT-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著(P<0.05)高于對(duì)照組；在試驗(yàn)24 h時(shí)，1 μmol/L組GLUT-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著(P<0.05)高于0.2 μmol/L與對(duì)照組；在試驗(yàn)48 h時(shí)，1 μmol/L組GLUT-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著(P<0.05)高于對(duì)照組。圖1

注：同列數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)；肩標(biāo)不同大寫字母表示差異極顯著(P<0.01)；肩標(biāo)相同字母或無(wú)字母標(biāo)注表示差異不顯著(P>0.05)[10]，下同

Note: data in the same column of the shoulder mark different lowercase letters indicate a significant difference (P< 0.05); shoulder standard different capital letters show very significant difference (P< 0.01); shoulder standard the same letter or letter annotation denotes the difference was not significant (P> 0.05).The same as below

圖1不同生物素濃度下細(xì)胞GLUT-4 mRNA表達(dá)量變化
Fig.1The Impact of Various Biotin Concentrations on GLUT-4 mRNA Expression Quantity of Cells

2.2　生物素濃度對(duì)細(xì)胞PK mRNA表達(dá)量的影響

研究表明，在試驗(yàn)12 h時(shí)，各試驗(yàn)組PK mRNA相對(duì)表達(dá)量均顯著高(P<0.05)于對(duì)照組，其中1 μmol/L組PK mRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組、0.2 μmol/L組及0.5 μmol/L組，與之相比分別提升了58.9%、39.1%與29.9%；在試驗(yàn)24 h時(shí)，1 μmol/L組PK mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著(P<0.05)高于對(duì)照組；在試驗(yàn)48 h時(shí)，1 μmol/L 組PK mRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組。圖2

圖2不同生物素濃度下細(xì)胞PK mRNA表達(dá)量變化
Fig.2The Impact of Various Biotin Concentrations on PK mRNA Expression Quantity of Cells

2.3　生物素濃度對(duì)細(xì)胞FAS mRNA表達(dá)量的影響

研究表明，在試驗(yàn)12 h時(shí)，1 μmol/L組與0.5 μmol/L組FAS mRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著(P<0.01)高于于對(duì)照組與0.2 μmol/L組；在試驗(yàn)24 h時(shí)，各試驗(yàn)組FAS mRNA相對(duì)表達(dá)量與對(duì)照組間差異不顯著；在試驗(yàn)48 h時(shí)，0.5 μmol/L組FAS mRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組，并顯著(P<0.05)高于1 μmol/L組。圖3

圖3不同生物素濃度下細(xì)胞FAS mRNA表達(dá)量變化
Fig.3The Impact of Various Biotin Concentrations on FAS mRNA Expression Quantity of Cells

2.4　生物素濃度對(duì)細(xì)胞ACC1 mRNA表達(dá)量的影響

研究表明，在試驗(yàn)12 h時(shí)，1 μmol/L組、0.5 μmol/L組與0.2 μmol/L組ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組；在試驗(yàn)24 h時(shí)，1 μmol/L組ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著(P<0.01)高于對(duì)照組，0.2 μmol/L組與0.5 μmol/L組ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著(P<0.05)高于對(duì)照組；在試驗(yàn)48 h時(shí)，1 μmol/L組ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量極顯著高于對(duì)照組與0.2 μmol/L組，0.5 μmol/L組ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著(P<0.05)高于對(duì)照組與0.2 μmol/L組。圖4

圖4不同生物素濃度下細(xì)胞ACC1 mRNA表達(dá)量變化
Fig.4The Impact of Various Biotin Concentrations on ACC1 mRNA Expression Quantity of Cells

3　討 論

葡萄糖跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)是脂肪細(xì)胞吸收利用葡萄糖的主要限速步驟之一[11]。研究表明，這一步驟是依靠細(xì)胞膜上的特殊轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白來(lái)完成的[12]，這種特殊的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白便是葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。而脂肪細(xì)胞中的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白主要以GLUT-4為主[13]。該試驗(yàn)結(jié)果中：添加生物素的試驗(yàn)組在12、24、48 h時(shí)GLUT-4 mRNA 相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組，這表明生物素的添加可以提高GLUT-4 mRNA的表達(dá)。而三個(gè)生物素試驗(yàn)組中，1 μmol/L組在24 h及48 h時(shí)的GLUT-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量高于0.2 μmol/L組及0.5 μmol/L組，其中24 h時(shí)極顯著(P<0.05)高于0.5 μmol/L組，雖然在12 h時(shí)GLUT-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量低于0.5 μmol/L，但差異并不顯著。這就表明在48 h內(nèi)以1 μmol/L濃度作用脂肪細(xì)胞對(duì)提升細(xì)胞中GLUT-4的相對(duì)表達(dá)效果最佳。GLUT-4作為葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的主要蛋白，其表達(dá)量地提升可以細(xì)胞對(duì)葡萄糖地吸收[14]并可改善脂肪細(xì)胞的胰島素抵抗現(xiàn)象[15]。推測(cè)當(dāng)進(jìn)入胞內(nèi)的葡萄糖越多，用于合成TG的前體物質(zhì)可能會(huì)隨之增加，使TG沉積量提升。而當(dāng)細(xì)胞胰島素抵抗得到緩解時(shí)，細(xì)胞對(duì)相應(yīng)細(xì)胞因子的感受可能會(huì)得到提升，加速細(xì)胞內(nèi)TG沉積。以1 μmol/L濃度生物素作用脂肪細(xì)胞時(shí)，可通過(guò)提升GLUT-4的表達(dá)進(jìn)而達(dá)到促TG沉積的目的。

當(dāng)葡萄糖進(jìn)入細(xì)胞后經(jīng)糖酵解產(chǎn)生丙酮酸，再經(jīng)各類酶催化逐步轉(zhuǎn)變?yōu)楦视腿ゴ鎯?chǔ)于細(xì)胞當(dāng)中[2]。PK作為糖酵解過(guò)程中關(guān)鍵酶，也是整個(gè)過(guò)程的關(guān)鍵限速酶之一[2]。在試驗(yàn)結(jié)果中：添加了生物素的試驗(yàn)組在12、24及48 h時(shí)PK mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組，這說(shuō)明生物素的添加會(huì)提高細(xì)胞中PK mRNA相對(duì)表達(dá)量。而在添加了生物素的三個(gè)試驗(yàn)組中，1 μmol/L組在12、24及48 h時(shí)PK mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于0.2 μmol/L組及0.5 μmol/L組，尤其是在12 h時(shí)差異極顯著(P<0.01)，這就說(shuō)明在48 h內(nèi)以1 μmol/L濃度生物素作用脂肪細(xì)胞對(duì)提升細(xì)胞內(nèi)PK的相對(duì)表達(dá)，且以12 h時(shí)提升效果最為顯著。王彥等[16]發(fā)現(xiàn)當(dāng)PK蛋白濃度上升時(shí)，細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取與轉(zhuǎn)化能力都得到了提升，滕翠琴[17]發(fā)現(xiàn)當(dāng)PK含量呈上升趨勢(shì)時(shí)，葡萄糖利用亦趨于穩(wěn)定。當(dāng)葡萄糖吸收量上升時(shí)，TG的沉積亦會(huì)增長(zhǎng)[18]。推斷PK相對(duì)表達(dá)的提升可能加速了糖酵解進(jìn)程，使脂合成原料丙酮酸的快速合成，進(jìn)而使TG含量有所提升。以1 μmol/L濃度生物素作用脂肪細(xì)胞時(shí)，可通過(guò)提升PK的表達(dá)進(jìn)而達(dá)到促TG沉積的目的。

ACC1在脂肪酸的代謝過(guò)程中起了重要作用，其可以催化乙酰輔酶A生成丙二酸單酰輔酶A[2]，并被證實(shí)可以通過(guò)多種機(jī)制調(diào)控脂肪代謝過(guò)程[18]。在試驗(yàn)結(jié)果中，添加生物素的試驗(yàn)組在12、24及48 h時(shí)ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組，這表明生物素的添加能促進(jìn)ACC1的表達(dá)。而三個(gè)試驗(yàn)組中，1 μmol/L組在12 h、24 h及48 h時(shí)ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于0.2 μmol/L組與0.5 μmol/L組。這表明在48 h內(nèi)以1 μmol/L濃度生物素作用脂肪細(xì)胞對(duì)提升細(xì)胞內(nèi)ACC1的相對(duì)表達(dá)效果最佳。生物素的缺乏將大幅降低羧化全酶合成酶的mRNA表達(dá)量[19]，而ACC作為生物素依賴性羧化酶其表達(dá)亦會(huì)受到影響。以1 μmol/L濃度生物素作用脂肪細(xì)胞可能會(huì)有效提升羧化全酶mRNA表達(dá)量進(jìn)而促進(jìn)ACC mRNA的表達(dá)。周紅宇等[20]試驗(yàn)利用瘦素抑制ACC mRNA表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)當(dāng)ACC mRNA表達(dá)下降時(shí)，脂肪酸合成亦受到了影響。劉莉莉等[21]試驗(yàn)證實(shí)，當(dāng)ACC表達(dá)量提升時(shí)，乳腺上皮細(xì)胞的乳脂合成增加。這說(shuō)明生物素可以通過(guò)提升ACC1 mRNA的相對(duì)表達(dá)來(lái)促進(jìn)脂肪酸合成，以達(dá)到促脂合成的目的。

動(dòng)物的體脂沉積所需要的脂肪酸大多是來(lái)自脂肪酸的從頭合成[2]，即由FAS催化下乙酰輔酶A和丙二酸單酰輔酶A合成甘油三酯的過(guò)程。在試驗(yàn)結(jié)果中，添加生物素的試驗(yàn)組在12、24及48 h時(shí)FAS mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于對(duì)照組，這表明生物素的添加能促進(jìn)FAS的表達(dá)。而在三個(gè)試驗(yàn)組中，0.5 μmol/L組在12、24及48 h時(shí)FAS mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于0.2 μmol/L組與1 μmol/L組。這表明在48 h內(nèi)以0.5 μmol/L濃度生物素作用脂肪細(xì)胞對(duì)提升細(xì)胞內(nèi)FAS的相對(duì)表達(dá)效果最佳。FAS的表達(dá)受到轉(zhuǎn)錄因子固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白(SREBP1c)調(diào)控[22-23]，而Ortega-Cuellar試驗(yàn)[24]指出生物素可以激活SREBP1c。以0.5 μmol/L濃度生物素作用脂肪細(xì)胞可能會(huì)有效提升SREBP1c活化程度，進(jìn)而促進(jìn)FAS mRNA的表達(dá)。舒常平等[25]等研究表明，F(xiàn)AS mRNA的表達(dá)可使脂肪快速沉積。這說(shuō)明生物素可以通過(guò)提升FAS mRNA的相對(duì)表達(dá)來(lái)促進(jìn)脂肪酸合成，以達(dá)到促脂合成的目的。

4　結(jié) 論

生物素可提升脂肪細(xì)胞GLUT-4、PK、FAS與ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量；當(dāng)以1 μmol/L生物素作用時(shí)，細(xì)胞GLUT-4、PK與ACC1 mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于其它試驗(yàn)組并顯著(P<0.05)高于對(duì)照組；當(dāng)以0.5 μmol/L生物素作用時(shí)，細(xì)胞FAS mRNA相對(duì)表達(dá)量均高于其它組。通過(guò)不同組間的比較，以1 μmol/L生物素作用脂肪細(xì)胞時(shí)對(duì)GLUT-4、PK與ACC1 mRNA提升效果最佳，以0.5 μmol/L生物素作用時(shí)對(duì)FAS mRNA提升效果最佳。

參考文獻(xiàn)(References)

[1] Huang, S., & Czech, M. P. (2007). The glut4 glucose transporter.CellMetabolism, 5(4): 237-252.

[2] 王鏡巖.生物化學(xué).上冊(cè)[M]. 北京：高等教育出版社, 2002.

WANG Jing-yan. (2002).Biochemistry(VolumeOne) [M]. Beijing: Higher Education Press. (in Chinese)

[3] 張淑妍，杜雅蘭，汪洋，等.脂滴-細(xì)胞脂類代謝的細(xì)胞器[J]. 生物物理學(xué)報(bào), 2010, 26(2):97-105.

ZHANG Shu-yan, DU Ya-lan, WANG Yang, et al. (2010). Lipid droplet - A cellular orangelle for lipid metabolism [J].ActaBiophysicaSinica, 26(2):97-105.(in Chinese)

[4] 鄭巍振.生物素高產(chǎn)菌種選育的研究[D]. 杭州：浙江工業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2010.

ZHENG Wei-zhen. (2010).Studyonstrainscreeningofhighbiotin-producing[D]. Master Dissertation. Zhejiang University of Technology，Hangzhou. (in Chinese)

[5] Fernandez-Mejia, C. (2011). Biological effects of pharmacological concentrations of biotin.JournalofEvidence-BasedComplementary&AlternativeMedicine, 16(1): 40-48.

[6] 張旭暉，王恬.生物素營(yíng)養(yǎng)生理作用及其應(yīng)用研究進(jìn)展[J].中國(guó)飼料, 2010,(8):5-8.

ZHANG Xu-hui, WANG Tian. (2010). Biophysical nutrient physiological function and its application research progress [J].ChinaFeed, (8):5-8. (in Chinese)

[7] Foufelle, F. F. P. (2002). New perspectives in the regulation of hepatic glycolytic and lipogenic genes by insulin and glucose: a role for the transcription factor sterol regulatory element binding protein-1c [review].BiochemicalJournal, 366(2): 377-91.

[8] 朱曉波，閆智宏，徐志偉，等.生物素對(duì)高糖狀態(tài)下大鼠胰島β細(xì)胞功能的影響[J].華西藥學(xué)雜志，2010，25(1)：29-31.

ZHU Xiao-bo, YAN Zhi-hong, XU Zhi-wei, et al. (2010). The effect of biotin on the function of rat islet β cell cultured with high glucose [J].WestChinaJournalofPharmaceuticalSciences, 25(1)：29-31. (in Chinese)

[9] 李萍，岳晶晶, 張達(dá)，等.小檗堿對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞炎癥因子、脂肪因子及脂肪酸代謝的影響[J]. 天津醫(yī)藥, 2014, 42(6):513-516.

LI Ping, YUE Jing-jing, ZHANG Da, et al. (2014). Effects of berberine on inflammatory factors, Adipokines and Fatty Acid Metabolism in 3T3-L1 adipocytes [J].TianjinMedicalJournal, 42(6):513-516. (in Chinese)

[10] 趙艷坤, 邵偉, 王立文,等.移植臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)荷斯坦公犢生長(zhǎng)性能的影響[J]. 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué), 2015, 52(2):354-359.

ZHAO Yan-kun, SHAO Wei, WANG Li-wen, et al. (2015). Transplantation of umbilical cord mesenchymal stem cells on the growth performance of Holstein male calves [J].XinjiangAgriculturalSciences, 52(2):354-359. (in Chinese)

[11] 蔡琳婷，陳文新.心肌細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4的轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)控及與心肌活力關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 國(guó)際放射醫(yī)學(xué)核醫(yī)學(xué)雜志, 2016, 37(1):47-51.

CAI Lin-ting, CHEN Wen-xin. (2016). Recent advances on the regulation ofghcose transporter 4 transport and its relationship with myocardial viability in cardiomyocytes [J].InternationalJournalofRadiationMedicineandNuclearMedicine, 37(1):47-51. (in Chinese)

[12] Bryant, N. J., Govers, R., & James, D. E. (2002). Regulated transport of the glucose transporter glut4.NatRevMolCellBiol, 3(4): 267-277.

[13] Al-Hasani, H. (2004). Regulated transport of the glucose transporter glut4.NatureReviewsMolecularCellBiology, 3(4): 291-313.

[14] 岳晶晶.小檗堿對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞炎癥因子、脂肪因子和脂肪酸代謝的影響[D]. 天津: 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2012.

YUE Jing-jing. (2012).Effectsofberberineoninflammatoryfactors,adipokinesandmetabolismODfattyacidin3T3-L1adipocytes[D]. Master Dissertation. Tianjin Medical University, Tianjin. (in Chinese)

[15] Fujiwara, Y., Tsukahara, C., Ikeda, N., Sone, Y., Ishikawa, T., & Ichi, I., et al. (2017). Oleuropein improves insulin resistance in skeletal muscle by promoting the translocation of glut4.JournalofClinicalBiochemistry&Nutrition, 61(3): 196-202.

[16] 王彥，高婷婷，廉如，等.脂聯(lián)素球狀結(jié)構(gòu)域?qū)?型糖尿病大鼠己糖激酶和丙酮酸激酶活力影響的研究[J]. 中國(guó)糖尿病雜志, 2013, 21(3):271-273.

WANG Yan, GAO Ting-ting, LIAN Ru, et al. (2013). Effect of globular domain of adiponectin on hexokinase and pyruvate kinase vitality in T2DM rat [J].ChineseJournalofDiabetes, 21(3):271-273. (in Chinese)

[17] 滕翠琴. 六堡茶對(duì)3T3-L1脂肪細(xì)胞糖脂代謝的影響[D]. 長(zhǎng)沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文, 2014.

TENG Cui-qin. (2014).EffectofLiupaoTeaonglucolipidmetabolismin3T3-L1adipocytes[D]. Master Dissertation. Hunan Agricultural University, Changsha. (in Chinese)

[18] Kaneto, H., Obata, A., Kimura, T., Shimoda, M., Okauchi, S., & Shimo, N., et al. (2017). Beneficial effects of sodium-glucose cotransporter 2 inhibitors for preservation of pancreatic β‐cell function and reduction of insulin resistance.JournalofDiabetes, 9(3): 219-225.

[19] Larrieta, E., Velasco, F., Vital, P., López-Aceves, T., Lazo-De-La-Vega-Monroy, M. L., & Rojas, A., et al. (2010). Pharmacological concentrations of biotin reduce serum triglycerides and the expression of lipogenic genes.EuropeanJournalofPharmacology, 644(1-3): 263-268.

[20] 周紅宇，陽(yáng)學(xué)風(fēng).瘦素對(duì)L-02肝細(xì)胞甘油三酯沉積及乙酰輔酶A羧化酶表達(dá)的影響[J]. 實(shí)用藥物與臨床, 2011, 14(5):373-375.

ZHOU Hong-yu, YANG Xue-feng. (2011). Effects of leptin on disposition of triglyceride in L-02 fatty liver cells [J].PracticalPharmacyandClinicalRemedies, 14(5):373-375. (in Chinese)

[21] 劉莉莉，曹玲，李慧玲,等.辛酸鈉對(duì)奶牛乳腺上皮細(xì)胞脂肪酸合成相關(guān)酶表達(dá)的影響[J]. 河南農(nóng)業(yè)科學(xué), 2014, 43(5):160-163.

LIU Li-li, CAO Ling, LI Hui-ling, et al. (2014). Effects of sodium octanoate on key fatty acid synthesis enzyme in mammary epithelial cells of dairy cows [J].HenanAgriculturalSciences, 43(5):160-163. (in Chinese)

[22] You, M., Fischer, M., Deeg, M. A., & Crabb, D. W. (2002). Ethanol induces fatty acid synthesis pathways by activation of sterol regulatory element-binding protein (srebp).JournalofBiologicalChemistry, 277(32): 29,342-29,347.

[23] Foufelle, F., & Ferré, P. (2001). regulation of carbohydrate metabolism by insulin: role of transcription factor srebp-1c in the hepatic transcriptional effects of the hormone.JournalDeLaSociétéDeBiologie, 195(3): 243-248.

[24] Ortega-Cuellar, D., Hernandez-Mendoza, A., Moreno-Arriola, E., Carvajal-Aguilera, K., Perez-Vazquez, V., & Gonzalez-Alvarez, R., et al. (2010). Biotin starvation with adequate glucose provision causes paradoxical changes in fuel metabolism gene expression similar in rat (rattus norvegicus), nematode (caenorhabditis elegans) and yeast (saccharomyces cerevisiae).JournalofNutrigenetics&Nutrigenomics,3(1): 18-30.

[25] 舒常平，王寶維，李楨，等.填飼鵝肝臟組織中脂肪酸沉積與FAS基因mRNA的表達(dá)豐度[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 45(10):2 002-2 011.

SHU Chang-ping, WANG Bao-wei, LI Zhen, et al. (2012). Fatty acids deposition and FAS mRNA expression abundance in liver tissue of overfeeding goose [J].ScientiaAgriculturaSinica, 45(10): 2,002-2,011. (in Chinese)