阮海華，胡雙艷，張春晨，曹 婳，張 真

表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）/蛋白激酶B（protein kinase B，PKB，也稱Akt）信號通路是生物體內(nèi)一條非常重要的生存信號通路[1-2]。EGFR主要是通過二聚化后刺激Ras蛋白，導致磷酸化級聯(lián)反應(yīng)激活A(yù)kt信號通路，故有學者將其稱為EGFR/Akt信號傳導通路[3]。EGFR/Akt信號傳導通路在實體腫瘤，如黑色素瘤、肝癌、結(jié)腸癌、胃癌、乳腺癌和白血病中發(fā)揮重要的作用，促進細胞侵襲遷移、加速細胞周期進程、促進細胞增殖[4]。明確該信號通路在腫瘤細胞中的作用機制，尋找阻斷該信號通路的靶向藥物是國內(nèi)外的研究熱點之一。

植物多酚是來源于植物的次級代謝產(chǎn)物，大量的研究表明植物多酚具有抗突變[5]、抗氧化[6]、抗腫瘤[7]、抗菌[8]等生物學活性。單寧酸屬于易溶于水的植物多酚類化合物，在紅葡萄酒、茶葉、水果中均含量較多[9]。最新的研究發(fā)現(xiàn)，單寧酸能夠作用于乳腺癌細胞EGFR，誘導乳腺癌細胞發(fā)生凋亡[10]。在本實驗室前期研究中，通過檢測EGFR全酪氨酸位點的磷酸化發(fā)現(xiàn)，單寧酸處理顯著抑制了由表皮生長因子誘導的EGFR的磷酸化，而且具有位點特異性。例如，單寧酸能夠抑制EGFR Y1068和Y1045的磷酸化，進而抑制受這些特異位點磷酸化調(diào)控的信號傳導與轉(zhuǎn)錄激活因子（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）信號通路，阻斷受STAT3信號通路調(diào)控的基因表達，促進細胞凋亡。實際中眾多研究表明，腫瘤的發(fā)生與發(fā)展是多因素、多基因、多途徑的結(jié)果。除了STAT3信號通路，在大部分人惡性膠質(zhì)瘤細胞以及頭頸癌細胞中，EGFR/Akt信號通路均存在不同程度的失調(diào)。然而，單寧酸對EGFR/Akt信號通路的調(diào)節(jié)作用仍不清楚。本研究發(fā)現(xiàn)單寧酸抑制EGFR的磷酸化，改變腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6（tumor necrosis receptor-associated factor 6，TRAF6）蛋白的亞細胞定位，而TRAF6亞細胞定位的改變介導了單寧酸對Akt信號通路的調(diào)控，抑制人膠質(zhì)瘤U87細胞的增殖。

1 材料與方法

1.1 材料、培養(yǎng)基與試劑

人膠質(zhì)瘤U87細胞由東京大學醫(yī)學院Jun-Ichiro Inoue教授提供。

單寧酸（CAS號1401-55-4，相對分子質(zhì)量為1 701.20） 美國Sigma-Aldrich公司；Gibco胎牛血清、Protein A/G免疫沉淀磁珠 美國Thermo Fisher Scientific公司；HyClone? DMEM高糖培養(yǎng)基 美國GE Healthcare公司；磷酸化EGFR（Tyr1068）抗體、EGFR抗體、磷酸化Akt（S473）抗體、Akt抗體（鼠源）、TRAF6抗體（鼠源）、磷酸化真核細胞翻譯起始因子4E結(jié)合蛋白1（eukaryotic translation initiation fator 4E-binding protein 1，4EBP-1）抗體、磷酸化S6抗體 美國Cell Signaling Technology公司；微管蛋白、小窩蛋白1、辣根過氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）偶聯(lián)二抗 美國Santa Cruz Technology公司；TRAF6抗體（兔源）、Akt（兔源） 美國Millipore公司；電化學發(fā)光（electrochemiluminescence，ECL）試劑盒、VigoFect轉(zhuǎn)染試劑 威格拉斯生物技術(shù)（北京）有限公司；3-（4,5-二甲基吡啶-2-基）-5-（3-羧基甲氧基苯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四唑（3-（4,5-dimethylthiazol-2-yl）-5-（3-carboxymethoxyphenyl）-2-（4-sulfophenyl）-2H-tetrazolium，MTS）細胞增殖試劑盒（G3850） 美國Promega公司。

pcDNA3質(zhì)粒由西南大學李洪濤博士惠贈；編碼EGFR vIII突變體的基因序列為從EGFR cDNA序列（GenBank：BC094761.1）中去除編碼第2～7位外顯子間，即去除第241～870位核苷酸的序列。進行全基因合成后，克隆至pcDNA3質(zhì)粒中。

其他化學試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

細胞培養(yǎng)皿 美國Corning公司；HERACELL 150i CO2培養(yǎng)箱 美國Thermo Fisher公司；SpectraMax M5多功能讀板機 美國Molecular Device公司；Trans-Blot SD半干轉(zhuǎn)印槽、聚合酶鏈式反應(yīng)（polymerase chain reaction，PCR）儀 美國Bio-Rad公司；Alpha Imager Mini凝膠成像系統(tǒng) 美國Protein Simple公司；5430R小型臺式高速冷凍離心機 德國Eppendorf公司。

1.3 方法

1.3.1 細胞培養(yǎng)

人膠質(zhì)瘤U87細胞培養(yǎng)于含體積分數(shù)10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基（完全培養(yǎng)基）中，并置于37 ℃、5% CO2飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，以質(zhì)量分數(shù)0.25%胰蛋白酶消化傳代。當單層細胞融合度達到70%～80%時進行單寧酸處理。處理培養(yǎng)基為完全培養(yǎng)基內(nèi)含80 μmol/L單寧酸，每組3 個復(fù)孔，培養(yǎng)24、48、72 h后，用細胞刮刀刮取細胞，并收集至離心管中。

1.3.2 MTS法檢測單寧酸對U87細胞增殖的影響

U87細胞以6×104個/mL的濃度接種于96 孔板內(nèi)，每孔100 μL培養(yǎng)基。24 h后棄培養(yǎng)基，分別加入100 μL含80 μmol/L單寧酸的完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)24、48、72 h，每組3 個復(fù)孔。采用MTS細胞增殖試劑盒測定OD490nm值。

1.3.3 蛋白質(zhì)印記法檢測U87細胞蛋白質(zhì)的表達和磷酸化

均采用蛋白質(zhì)印記法。細胞處理方法同1.3.1節(jié)，收集細胞，參照文獻[11]制備蛋白，進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE）后轉(zhuǎn)膜，用5%脫脂乳粉封閉。將一抗按照體積比1∶1 000稀釋后于4 ℃孵育過夜。以TBST（tris buffered saline with Tween）溶液洗滌3 次后加入體積比1∶2 000稀釋的二抗，室溫孵育1 h。采用ECL化學發(fā)光試劑顯影曝光后洗X光片，利用Alpha Imager Mini凝膠成像系統(tǒng)測定條帶的灰度值，利用灰度值表征條帶的強度。

1.3.4 免疫共沉淀

收集單寧酸處理后細胞，利用裂解緩沖液（50 mmol/L Tris溶液（pH 7.6）、1 mol/L NaCl、1% NP-40、0.5% Triton X-100、5%脫氧膽酸鈉、1 mmol/L苯甲基磺酰氟、蛋白酶抑制劑Cocktail）按照干細胞與裂解液1∶3的比例加入裂解液。冰浴30 min，用勻漿器反復(fù)勻漿100 次。于15 000×g低溫離心30 min，收集上清液，在上清液中加入Protein A/G免疫沉淀磁珠于4 ℃混懸30 min。將混懸液置于磁力收集器上，棄沉淀，收集上清液。將上清液中加入兔源抗TRAF6抗體于4 ℃混懸過夜，次日在混懸液中加入Protein A/G免疫沉淀磁珠于室溫混懸1 h，收集Protein A/G 免疫沉淀磁珠沉淀，并用10 倍體積裂解液反復(fù)潤洗沉淀3 次，用SDS-PAGE 1×上樣緩沖液溶解沉淀Protein A/G免疫沉淀磁珠后，進行抗鼠源TRAF6以及抗鼠源Akt的蛋白質(zhì)印跡檢測。以全細胞裂解液（whole cell lysate，WCE）作為上樣參照，微管蛋白作為內(nèi)參。

1.3.5 細胞轉(zhuǎn)染實驗

人膠質(zhì)瘤U87細胞培養(yǎng)至2×106個/10 cm2細胞培養(yǎng)板的密度后，按照Vigofect轉(zhuǎn)染試劑說明書進行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24 h后進行單寧酸處理后收集細胞，進行免疫共沉淀以及蛋白質(zhì)印跡分析。

1.3.6 細胞亞組分分離

單寧酸處理人膠質(zhì)瘤U87細胞后，細胞亞組分分離參照文獻[12]的方法。利用超速離心機于80 000×g低溫離心2 h后，上清液部分即為細胞胞漿組分；將收集的沉淀繼續(xù)用10 倍體積緩沖液重懸后，再次利用超速離心機進行上述操作，獲得的沉淀部分即為質(zhì)膜部分。

1.4 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS V18.0軟件進行單因素方差分析，同時通過Student’s t檢驗進行組間比較，以P＜0.05為差異顯著。所有實驗結(jié)果至少重復(fù)3 次，用 ±s表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 單寧酸處理抑制人膠質(zhì)瘤U87細胞的增殖

通過MTS細胞增殖檢測試劑盒研究單寧酸對人膠質(zhì)瘤U87細胞增殖的影響，結(jié)果如圖1所示。

圖1 單寧酸處理對人膠質(zhì)瘤U87細胞增殖活性的影響Fig. 1 Effect of tannic acid on the proliferation of human glioma U87 cells

由圖1可知，與對照組細胞相比，80 μmol/L單寧酸處理24 h顯著抑制人膠質(zhì)瘤U87細胞的增殖（P＜0.05），并且細胞增殖抑制率隨著單寧酸處理時間的延長（48～72 h）而升高。80 μmol/L單寧酸處理48、72 h后，發(fā)生細胞死亡的比率分別達到27.9%和45.8%，這與Darvin等[10]發(fā)現(xiàn)單寧酸能夠抑制乳腺癌細胞增殖的結(jié)果相類似。實驗結(jié)果表明，單寧酸能夠顯著抑制人膠質(zhì)瘤細胞的增殖，抗腫瘤效果顯著。

2.2 單寧酸抑制人膠質(zhì)瘤U87細胞Akt信號通路的磷酸化

為了進一步研究單寧酸對EGFR/Akt信號通路的影響，用80 μmol/L單寧酸處理人膠質(zhì)瘤U87細胞，并檢測Akt的磷酸化情況。由圖2可知，80 μmol/L單寧酸處理對Akt蛋白的整體表達未見明顯影響，但顯著抑制了Akt絲氨酸473位點的磷酸化（pS473）。一般來講，磷酸化激活的Akt可磷酸化激活其下游2 個效應(yīng)蛋白靶點：4EBP-1[13]和核糖體S6蛋白[14]的磷酸化。其中，4EBP-1蛋白在不同信號因子的刺激下（例如紫外照射、生長因子、胰島素等）被磷酸化激活而從4EBP上分離下來，結(jié)合并促進帽結(jié)構(gòu)依賴性（cap-dependent）mRNA翻譯蛋白的起始[15]；核糖體S6蛋白被磷酸化后，促進5’ TOP（5’terminal oligopyrimidine tract）mRNA翻譯蛋白的起始，進而促進翻譯起始和許多翻譯元件成分如核糖體蛋白、延伸因子等的翻譯，促進腫瘤細胞增殖[16]。通過檢測單寧酸對4EBP-1以及核糖體S6蛋白磷酸化的影響發(fā)現(xiàn)，與單寧酸抑制Akt pS473的結(jié)果相一致，單寧酸顯著抑制了4EBP-1絲氨酸65（Ser65）位點的磷酸化以及核糖體S6蛋白絲氨酸235和236（Ser235/236）位點的磷酸化。利用凝膠成像系統(tǒng)對Akt pS473的條帶進行灰度掃描，結(jié)果如圖3所示。

圖2 單寧酸處理對人膠質(zhì)瘤U87細胞Akt及其下游效應(yīng)蛋白磷酸化的影響Fig. 2 Effect of tannic acid on the phosphorylation of Akt and its downstream effector proteins in human glioma U87 cells

圖3 Western blot灰度掃描定量分析單寧酸對人膠質(zhì)瘤U87細胞Akt及其下游效應(yīng)蛋白磷酸化水平的影響Fig. 3 Quantitative analysis of tannic acid on phosphorylated Akt and its downstream effector proteins in human glioma U87 cells by Western blot

由圖3可知，以對照組設(shè)定值為100%，發(fā)現(xiàn)80 μmol/L單寧酸處理24 h后，對Akt pS473的抑制率達到25.3%；而處理48 h后，抑制率接近50%。通過蛋白條帶灰度掃描計算抑制率發(fā)現(xiàn)，當處理72 h時，單寧酸對4EBP-1蛋白pSer65的抑制率達到88.4%，對核糖體S6蛋白pSer235/236的抑制率達到74.7%。綜上所述，表明單寧酸處理抑制Akt信號分子的磷酸化，并抑制了受Akt信號通路調(diào)控的4EBP-1和核糖體S6蛋白的磷酸化，抑制蛋白質(zhì)的翻譯合成，誘導人惡性膠質(zhì)瘤U87細胞凋亡。

2.3 單寧酸處理抑制TRAF6與Akt蛋白間的相互作用

圖4 單寧酸對人膠質(zhì)瘤U87細胞Akt與TRAF6間相互作用的影響Fig. 4 Effect of tannic acid on interaction between Akt and TRAF6 in human glioma U87 cells

TRAF6是細胞中介導EGFR/Akt信號通路的重要中間分子，EGFR的過度激活能夠招募TRAF6至細胞膜，TRAF6與Akt結(jié)合并通過其自身的RING型泛素連接酶活性催化Akt的泛素化修飾，進而介導泛素依賴的Akt磷酸化激活[17]。基于此，本研究利用TRAF6抗體免疫沉淀TRAF6蛋白，分析單寧酸對TRAF6和Akt間相互作用的影響。由圖4可知，在沉淀的TRAF6蛋白中成功檢測到Akt蛋白，然而與對照組相比，經(jīng)單寧酸處理的細胞中與TRAF6共沉淀的Akt蛋白的數(shù)量明顯減少。實驗結(jié)果表明，經(jīng)單寧酸處理后，細胞中與TRAF6結(jié)合的Akt蛋白明顯減少，進而導致依賴TRAF6的Akt磷酸化受到抑制。綜上所述，表明單寧酸對Akt信號通路的抑制作用是通過TRAF6的介導實現(xiàn)的。

2.4 單寧酸抑制TRAF6向細胞質(zhì)膜的招募

由于TRAF6介導的Akt磷酸化主要發(fā)生在細胞質(zhì)膜[17]，為了研究TRAF6的作用機制，本研究檢測了單寧酸對TRAF6亞細胞定位的影響。由圖5、6可知，單寧酸對人惡性膠質(zhì)瘤U87細胞胞漿中TRAF6蛋白量影響不大，卻顯著減少了細胞質(zhì)膜上的TRAF6蛋白的數(shù)量。通過蛋白條帶灰度掃描發(fā)現(xiàn)，單寧酸處理24、48、72 h后，質(zhì)膜上TRAF6蛋白分別減少了43.7%、50.0%和76.7%。實驗結(jié)果表明，單寧酸處理抑制TRAF6蛋白向細胞質(zhì)膜的招募。結(jié)合圖4中單寧酸減少了與TRAF6互作的Akt蛋白的數(shù)量，可推測單寧酸通過降低TRAF6向細胞質(zhì)膜的招募導致與TRAF6結(jié)合的Akt蛋白減少，進而抑制Akt的磷酸化。

圖5 單寧酸對人膠質(zhì)瘤U87細胞TRAF6亞細胞定位的影響Fig. 5 Effect of tannic acid on the subcellular localization of TRAF6 in human glioma U87 cells

圖6 Western blot灰度掃描定量分析單寧酸對人膠質(zhì)瘤U87細胞TRAF6亞細胞定位的影響Fig. 6 Quantitative analysis of tannic acid on TRAF6 subcellular localization in human glioma U87 cells by Western blot

2.5 單寧酸抑制TRAF6向細胞質(zhì)膜的招募與EGFR的磷酸化的相關(guān)性

EGFR是一種糖蛋白，主要由3 個部分組成：第一部分是胞外配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域，包括N端621 個氨基酸殘基，這些殘基富含半胱氨酸，并形成多對二硫鍵，其上結(jié)合有糖基，是表皮生長因子結(jié)合的位點；第二部分是跨膜結(jié)構(gòu)域，由23 個氨基酸殘基組成；第三部分是胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域，由542 個氨基酸殘基組成，含有酪氨酸激酶和幾個酪氨酸磷酸化的位點[18]。為了研究單寧酸調(diào)控TRAF6質(zhì)膜招募是否與EGFR的磷酸化有關(guān)，在人膠質(zhì)瘤U87細胞中表達EGFR組成型激活突變體EGFR vIII。EGFR vIII突變體中編碼EGFR胞外區(qū)的第2～7位間外顯子丟失，導致EGFR蛋白胞外配體響應(yīng)區(qū)缺失，形成分子質(zhì)量為155 kDa左右的突變蛋白[19]。與野生型EGFR的激活受胞外配體，例如表皮生長因子（epidernal growth factor，EGF）、胰島素樣生長因子（insulin-like growth factor，IGF）等的激活不同，EGFR vIII能夠在沒有配體存在的條件下組成型激活[20]。因此，在人膠質(zhì)瘤U87細胞中利用pcDNA3質(zhì)粒載體異位表達EGFR vIII突變體，轉(zhuǎn)染24 h后檢測EGFRvⅢ突變體的磷酸化，結(jié)果如圖7所示。

圖7 單寧酸對過表達EGFRvⅢ突變體細胞中TRAF6細胞質(zhì)膜招募的影響Fig. 7 Effect of tannic acid on TRAF6 recruitment to plasma membrane after ectopic expression of EGFRv III mutant in human glioma U87 cells

由圖7可知，利用EGFR抗體成功檢測到EGFR vⅢ突變體蛋白的表達，其分子質(zhì)量略小于野生型EGFR蛋白的分子質(zhì)量。進一步檢測EGFR的磷酸化（Y1068）發(fā)現(xiàn)在沒有任何配體（EGF）存在的條件下，檢測到EGFR vⅢ突變體的組成型激活。但是，與對照組相比，單寧酸處理48 h后雖然對野生型EGFR的磷酸化有抑制作用，但是對EGFR vIII突變體的磷酸化未表現(xiàn)抑制作用。實驗結(jié)果表明，單寧酸對EGFR磷酸化的抑制作用需要EGFR胞外區(qū)第2～7位外顯子間的區(qū)域，該區(qū)域的丟失導致EGFR的磷酸化對單寧酸不敏感，該區(qū)域是單寧酸調(diào)控EGFR的關(guān)鍵區(qū)。同時，在EGFR vIII突變體過表達的細胞中，Akt和TRAF6招募至細胞質(zhì)膜上的數(shù)量未受到單寧酸的影響，即EGFR vIII磷酸化激活不受單寧酸影響后，招募至細胞質(zhì)膜上TRAF6和Akt的數(shù)量也不受單寧酸影響，表明單寧酸通過調(diào)控EGFR磷酸化抑制TRAF6向細胞質(zhì)膜的招募，而質(zhì)膜TRAF6的減少介導了Akt磷酸化信號的抑制，誘導細胞發(fā)生凋亡。綜上所述，EGFR可能是單寧酸的受體，單寧酸通過EGFR實現(xiàn)跨膜信號傳遞，調(diào)控腫瘤細胞的增殖和細胞周期，誘導腫瘤細胞發(fā)生凋亡，發(fā)揮抗腫瘤功效。

3 討 論

TRAF6是腫瘤壞死因子超家族（tumor necrosis factor，TNF）和Toll樣/白細胞介素-1受體（Toll/IL-1 receptor，TIR）超家族重要的接頭分子[21]，在天然免疫和獲得性免疫中發(fā)揮多重的作用[22]。同時TRAF6是細胞中介導EGFR/Akt信號通路的重要中間分子[17]。TRAF6具有泛素連接酶活性[23]，其可泛素化修飾Akt進而介導泛素途徑依賴的Akt磷酸化激活[24]。TRAF6通常作為一個開關(guān)，決定在細胞內(nèi)開啟何種信號[17]。本研究結(jié)果表明，細胞經(jīng)單寧酸處理后，招募至質(zhì)膜上的TRAF6蛋白減少，進而介導了單寧酸對EGFR/Akt信號通路的抑制作用，抑制腫瘤細胞的增殖。其中，質(zhì)膜招募TRAF6蛋白的減少可以通過兩個方面抑制Akt的磷酸化激活：一方面與TRAF6直接相互作用的Akt蛋白數(shù)量減少，該推論已經(jīng)被圖4的結(jié)果證實，導致Akt磷酸化被抑制；另一方面，TRAF6是激活轉(zhuǎn)化生長因子激酶1（transform growth factor kinase，TAK1）的關(guān)鍵蛋白[25]，例如，轉(zhuǎn)化生長因子（transform growth factor，TGF）通過TRAF6激活TAK1[26]，而TAK1是磷酸化Akt的蛋白激酶[27]。因此，單寧酸抑制質(zhì)膜TRAF6的招募，進而抑制TAK1的激活，導致Akt磷酸化抑制的可能性也不能排除。

單寧酸對EGFR磷酸化的調(diào)節(jié)作用依賴于EGFR胞外區(qū)第2～7位外顯子所在片段，即從第81～290位氨基酸殘基間的片段，該片段恰好為EGF結(jié)合區(qū)[19]，推測單寧酸可能通過和EGF競爭與EGFR結(jié)合，發(fā)揮其抗腫瘤作用。另外，單寧酸與EGFR結(jié)合后，可能誘導EGFR或其二聚體發(fā)生特定的構(gòu)象變化，使部分位點的磷酸化受到空間限制，不易于發(fā)生磷酸化激活，但對有的位點影響不大，其原因還需要進一步深入研究。因為單寧酸屬于植物多酚類物質(zhì)[28]，分子質(zhì)量偏大，易溶于水，其化學結(jié)構(gòu)導致單寧酸很難穿過細胞膜進入細胞內(nèi)部，因此，單寧酸通過作用于EGFR胞外區(qū)，抑制腫瘤細胞中異常激活的EGFR磷酸化，進而實現(xiàn)單寧酸信號的跨膜傳遞。已有研究發(fā)現(xiàn)，EGFR是單寧酸的受體蛋白[10]，單寧酸對腫瘤細胞增殖的抑制作用主要通過調(diào)控EGFR進行，而EGFR的磷酸化位點有多個，每個位點的磷酸化都與相應(yīng)的信號轉(zhuǎn)導通路相偶聯(lián)[29]。本實驗室前期研究中發(fā)現(xiàn)單寧酸對Janus激酶（Janus kinase，Jak）/STAT3信號通路也存在抑制作用。結(jié)合本研究中單寧酸通過抑制TRAF6向質(zhì)膜招募抑制EGFR/Akt信號通路，推測單寧酸對腫瘤細胞增殖的抑制作用與EGFR的功能類似，可能存在多條信號通路的共同作用。是否除了這2 條信號通路，單寧酸對其他信號轉(zhuǎn)導途徑，例如絲裂原活化蛋白激酶（mitogenactivated protein kinase，MAPK）以及核轉(zhuǎn)錄因子-κB（nuclear factor kappa B，NF-κB）信號途徑，是否存在調(diào)控作用還需要進一步研究。進一步比較不同信號通路在單寧酸抑制腫瘤細胞增殖中的作用對于闡述單寧酸的功能是非常重要的。

綜上所述，食品中的單寧酸能夠通過TRAF6介導抑制腫瘤細胞中過度激活的EGFR/Akt信號通路，抑制腫瘤細胞的增殖，為新型抗癌食品甚至藥物的開發(fā)提供了理論基礎(chǔ)。這與很多研究人員利用TRAF6作為靶點開發(fā)新的對抗晚期癌癥的策略相類似，例如乳腺癌和前列腺癌[30]，為富含單寧的食物或者在藥物中添加單寧進行腫瘤的預(yù)防和治療提供理論依據(jù)。

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