微生物酯酶的性質(zhì)及其應(yīng)用

李曉如，白 晶，張 劍

（1. 山西大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，山西太原，030006；2. 山西勇寧記科技有限公司，山西太原，030006）

酯酶是一類既可催化酯鍵水解又可催化酯鍵合成的酶的總稱。其催化酯鍵水解時(shí)，使酯鍵斷裂，產(chǎn)物為醇和酸；催化酯鍵合成時(shí)，使酸的羧基和醇的羥基脫水縮合，產(chǎn)物為酯類及其他香味物質(zhì)[1]。酯酶廣泛存在動(dòng)物、植物、微生物中[2]，且微生物中細(xì)菌、真菌和酵母中的酯酶含量較為豐富，因此微生物發(fā)酵是酯酶的主要來源。由于微生物種類多、繁殖快，具有比動(dòng)植物更廣的作用pH、作用溫度以及底物專一性[3]、便于工業(yè)生產(chǎn)等優(yōu)點(diǎn)，故微生物發(fā)酵酯酶得到了研究人員的關(guān)注，并且已經(jīng)將其廣泛應(yīng)用于食品加工、醫(yī)藥化學(xué)品、洗滌行業(yè)和環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域[4]。除此之外，酯酶的酶促反應(yīng)具有較高的底物專一性、區(qū)域選擇性或者對(duì)映選擇性，酯酶是合成手性化合物（如手性藥物、農(nóng)藥等）的高效生物催化劑[5]。近年來微生物發(fā)酵的酯酶已成為研究熱點(diǎn)[6]。本文從酯酶的來源、產(chǎn)酯酶菌株的篩選以及發(fā)酵條件和培養(yǎng)方法進(jìn)行了綜述，并結(jié)合酯酶的分子結(jié)構(gòu)，對(duì)酯酶的催化特性和應(yīng)用做了總結(jié)，以期今后對(duì)酯酶的研究提供有益的借鑒。

1 酯酶

1.1 酯酶的來源

自然界中能產(chǎn)酯酶的微生物種類非常豐富，主要有真菌、酵母菌和細(xì)菌，其中真菌有曲酶菌、青霉菌、根霉菌、毛霉菌、鏈孢霉菌、犁頭霉菌、須霉菌、白地霉菌等12屬23種[7]；酵母類有假絲酵母、畢赤酵母、紅酵母等；而產(chǎn)酯酶的細(xì)菌種類特別多，包括芽孢桿菌、微球菌、假單孢菌、乳酸菌等。這些產(chǎn)酯酶微生物的分布環(huán)境也是多種多樣的，如工廠廢棄物、植物油加工廠、油脂污染的土壤等。

1.2 酯酶的特性

1.2.1 酯酶的結(jié)構(gòu)及催化特性

酯酶是 a / b 水解酶，具有典型的 a / b 水解酶的結(jié)構(gòu)特征[8]，由8個(gè)平行的 b 折疊和6個(gè) a 螺旋組成[9]，其中疏水的 b 折疊排列在酶分子的結(jié)構(gòu)中央，親水的 a 螺旋則分布在兩側(cè)，a 螺旋和 b 折疊之間則由Loop環(huán)連接[10-11]（如圖1）。

圖1 α/β水解酶折疊示意圖[12]

酯酶結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)絲氨酸-天冬氨酸-組氨酸的催化三聯(lián)體（Ser-Asp-His），使其具有催化活性[13]。催化過程一般為[8]：①酶分子活性中心絲氨酸殘基的羥基被組氨酸殘基活化后，絲氨酸殘基的羥基氧形成親核基團(tuán)對(duì)底物羰基碳原子進(jìn)行親核攻擊，發(fā)生親核加成反應(yīng)；②親核加成反應(yīng)后形成四面體化合物，四面體中間物的氧負(fù)離子與酶分子中氧陰離子的兩個(gè)氨基酸殘基酰胺鍵上的-NH-形成氫鍵以穩(wěn)定中間態(tài)；③底物酯鍵發(fā)生斷裂生成酰化酶，同時(shí)釋放底物醇。水分子繼而被組氨酸殘基激活，水分子中的羥基對(duì)?；干系聂驶荚影l(fā)生親核攻擊；④組氨酸將質(zhì)子傳遞給絲氨酸殘基的氧原子導(dǎo)致?；铬ユI斷裂，同時(shí)釋放出羧基產(chǎn)物，完成催化過程[14]。

在含水量低的條件下，反應(yīng)體系由液-液雙相、液-固雙相、反膠團(tuán)和微水相體系組成。一般情況酯酶溶解在反膠團(tuán)或雙相體系中的水相里，還可以以不溶性粉?；蛞怨潭ɑ傅男问酱嬖谟谟袡C(jī)相中。大量的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，酯酶在有機(jī)相中的催化優(yōu)于在水相中的催化，這是由于有機(jī)介質(zhì)可以增加酯酶的熱穩(wěn)定性，增加非極性底物的溶解度，減少反應(yīng)的副產(chǎn)物，增加合成反應(yīng)的速率。及時(shí)移出反應(yīng)產(chǎn)物，有利于酯催化反應(yīng)的進(jìn)行。另外酶的用量、反應(yīng)溫度和pH值也對(duì)酯酶催化有一定的影響[15]（圖2）。

圖2 酯酶水解Estera醋酸甲酯的典型機(jī)理示意圖[12]

1.2.2 酯酶與脂肪酶的差異

微生物酯酶和微生物脂肪酶的定義和分類在文獻(xiàn)報(bào)道中并沒有加以嚴(yán)格區(qū)分，但實(shí)際上還是存在一些差異：①酯酶與脂肪酶的差異主要在于作用底物碳鏈長短的不同，脂肪酶優(yōu)先水解長鏈酯類，酯酶則優(yōu)先水解短鏈酯類[16]。對(duì)于酯酶和脂肪酶催化酯類化合物分子的水解，酯酶作用于I型酯，脂肪酶作用于II型酯（如圖3），對(duì)于由較大基團(tuán)的手性羧酸和較小基團(tuán)的醇形成的酯，其水解或酯交換選擇酯酶催化較為適宜；而對(duì)于由較小基團(tuán)的羧酸和較大基團(tuán)的手性醇形成的酯，進(jìn)行水解和轉(zhuǎn)酯化反應(yīng)時(shí)則選擇脂肪酶催化較為適宜。②兩者作用底物的物理狀態(tài)不同，即脂肪酶主要在兩相體系（油-水界面）上作用，而酯酶只作用于水溶性的底物或者只能分解已溶解的底物[17]。③脂肪酶催化的反應(yīng)存在界面激活現(xiàn)象，而酯酶的反應(yīng)遵循經(jīng)典的米氏動(dòng)力學(xué)過程。酯酶和脂肪酶都能穩(wěn)定存在于有機(jī)溶劑中并表現(xiàn)出活性，但脂肪酶的這一特征更為突出。④雖然酯酶和脂肪酶結(jié)構(gòu)大多都是 a / b 的水解酶的典型特征，但是脂肪酶存在一個(gè)疏水的蓋子結(jié)構(gòu)，對(duì)催化反應(yīng)有一定的選擇性[18]。

圖3 酯酶/脂肪酶催化多數(shù)底物特征

1.3 酯酶的分類

1.3.1 Alridge分類

1953年，Alridge通過對(duì)硝基苯酯的鑒別，把從兔的血清中提取的酯酶命名A酯酶和B酯酶，因此，后來的學(xué)者習(xí)慣就把Alridge對(duì)酯酶的分類定義為Alridge分類[19]。根據(jù)Alridge的分類，酯酶可以分為三類：A類酯酶，B類酯酶，C類酯酶。A類酯酶以有機(jī)磷化合物為作用底物，包括：①異丙基氟磷酸酯酶，這類酯酶水解化合物梭曼、沙林，一般需要金屬Co2+、Mg2+、Mn2+作輔助因子。②對(duì)氧磷酶水解對(duì)氧磷一類的有機(jī)膦化合物。這類酯酶以Ca2+為輔基。而B類酯酶卻被有機(jī)膦化合物所抑制，B類酯酶是一類廣泛分布于組織、器官的絲氨酸類，能水解許多含有羧酯鍵、硫酯鍵、酰胺鍵的內(nèi)源性和外源性物質(zhì)。其主要功能可能是參與藥物和毒物等的生物轉(zhuǎn)化、脂質(zhì)代謝、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及維持生物膜結(jié)構(gòu)的完整性，包括脂族酯酶和膽堿酯酶。其他不與有機(jī)膦化合物作用的酯酶稱為C類酯酶。Alridge分類不夠精確，各種酯酶不能逐一系統(tǒng)地進(jìn)行分類，比較混亂。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)分類

依據(jù)國際酶學(xué)委員會(huì)的標(biāo)準(zhǔn)，每一個(gè)酶的分類由4個(gè)數(shù)字組成，數(shù)字之前加上“E.C”。目前按這種分類的酯酶有31種大類[20]，包括羧酸酯酶（EC3.1.1)、硫酯酶（EC3.1.2)、磷酸單酯酶（EC3.1.3）、磷酸二酯酶（EC3.1.4）、三磷酸單酯酶（EC3.1.5）、硫酸酯酶（EC3.1.6）、二磷酸單酯酶（EC.3.1.7）、磷酸三酯酶（EC3.1.8）等。這種分類方法比較明確，但是目前對(duì)于酯酶的系統(tǒng)分類標(biāo)準(zhǔn)還不能滿足要求，經(jīng)常有新鑒定和命名的酯酶需要調(diào)整分類地位和系統(tǒng)名稱。

1.3.3 其他分類

Walk[21]等根據(jù)酯酶對(duì)作用底物的特異性和等電點(diǎn)也進(jìn)行了分類，這種分類方法也不夠精確，因?yàn)轷ッ缸饔玫孜飶?fù)雜多樣，并且有重疊性，難以逐一區(qū)分，且各種底物的等電點(diǎn)數(shù)值差異微小。

2 微生物酯酶的發(fā)酵

2.1 產(chǎn)酯酶菌株的篩選

產(chǎn)酯酶菌種的篩選一般有兩個(gè)步驟：初篩和復(fù)篩。初篩多是采用平板培養(yǎng)透明圈法，一般是將篩選到的菌種進(jìn)行富集，然后用無菌水稀釋，涂布在含有酯酶的合適底物的平板上，通過培養(yǎng)一段時(shí)間后，平板上菌落周圍會(huì)形成透明水解圈，并根據(jù)透明圈的大小初篩合適的菌種。Guillermo[22]等利用透明圈變色法來篩選產(chǎn)酯酶的菌種，相比較傳統(tǒng)的篩選方法，篩選結(jié)果更為清晰可見，變色透明圈更為直觀。復(fù)篩是將初篩得到的產(chǎn)酯酶能力較強(qiáng)的菌株移入三角瓶內(nèi)振蕩培養(yǎng)，然后通過較為精確的熒光比色法（乙酸萘酯或?qū)ο趸椒訖z測(cè)法）對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行分析檢定，從中找出產(chǎn)酶量最高、性能上更符合要求的菌株。

“公司早期以把產(chǎn)品按照客戶的需求做出來為目標(biāo)，注重成品是否滿足客戶的設(shè)計(jì)與需求”，吳重蔚坦言，而隨著時(shí)間的推移，栢科富翔嘗試為客戶提出建議，剛開始偏重于實(shí)物的建議，后來介入更高層次的設(shè)計(jì)環(huán)節(jié)?！肮緦ｉT成立了設(shè)計(jì)部，幫助客戶做出更加合理的設(shè)計(jì)。有的客戶甚至把整個(gè)項(xiàng)目交給我們來做，客戶給出預(yù)算，公司則按照預(yù)算金額完成設(shè)計(jì)和制作。” 吳重蔚也表示，有時(shí)候客戶描述得比較抽象，而使其具體化、圖像化確是件不容易的事，但換個(gè)角度來看，設(shè)計(jì)師的理想與現(xiàn)實(shí)的差距就是企業(yè)生存的空間。

2.2 微生物酯酶的發(fā)酵過程

通過改變培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件來提高酯酶的發(fā)酵產(chǎn)量已有許多相關(guān)報(bào)道[23]。培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件對(duì)菌種的生長以及酶的生產(chǎn)有著最直接的影響。

2.2.1 培養(yǎng)基成分

(1) 碳源

碳源是菌體細(xì)胞組成的原料，也是菌體生長發(fā)育必需的能源物質(zhì)。某些碳源是酶的誘導(dǎo)劑，選擇適宜的碳源既可提高相應(yīng)酶的產(chǎn)量，也有利于定向地促進(jìn)某些酶的合成。如干酪乳桿菌產(chǎn)生的一種耐熱酯酶，需要三丁酸甘油酯的誘導(dǎo)；假單胞菌產(chǎn)生的磷酸三酯酶，需要磷酸鹽或者相應(yīng)特殊碳源的誘導(dǎo)。Wang[24]等利用三乙酸甘油酯為底物，從自然發(fā)酵的黃皮果汁中篩選產(chǎn)酯酶優(yōu)良的菌種進(jìn)行研究，三乙酸甘油酯為唯一碳源，且對(duì)酯酶的篩選有一定的促進(jìn)作用，結(jié)果從樣品中篩選出一株產(chǎn)酯酶菌種C10，通過酶學(xué)特性分析，該菌種所產(chǎn)酯酶為堿性酯酶，最適條件為60℃，pH9，并且該酯酶有較好的耐熱性和穩(wěn)定性。

(2) 氮源

氮源是菌體蛋白質(zhì)和核酸的重要組成原料。各種微生物對(duì)氮源的利用情況相當(dāng)復(fù)雜。焦云鵬[25]等對(duì)黑曲霉產(chǎn)果膠酯酶發(fā)酵條件進(jìn)行探討，發(fā)現(xiàn)以蛋白胨為氮源的液體發(fā)酵產(chǎn)生的果膠酯酶比以無機(jī)氮發(fā)酵產(chǎn)生的酯酶的量比高。

2.2.2 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)條件對(duì)酯酶產(chǎn)量也有影響，例如培養(yǎng)溫度。培養(yǎng)溫度不僅能影響酯酶菌體的生長，也影響酯酶的合成以及合成后的穩(wěn)定性，特別是耐熱性菌。 Thermurs sp.FD3041是國內(nèi)溫泉分離得到的一株棲熱菌[26]，培養(yǎng)溫度為70℃，得到的胞內(nèi)堿性磷酸酯酶FD2TAP，最適溫度是70℃；Pyrococcusabyssi是從深?；鹕街蟹蛛x得到的異養(yǎng)古細(xì)菌[27]，最適生長溫度是100℃，得到胞內(nèi)堿性磷酸酯酶的最適溫度為70℃。

2.3 微生物酯酶的發(fā)酵工藝

微生物酯酶的液體深層培養(yǎng)生產(chǎn)法就是采用液體培養(yǎng)基，在發(fā)酵瓶內(nèi)進(jìn)行一種通風(fēng)攪拌式培養(yǎng)，其優(yōu)點(diǎn)是易于控制、不易染雜菌；缺點(diǎn)是周期長。潘名志[30]等通過對(duì)4株紅曲霉進(jìn)行液體深層培養(yǎng)研究，篩選出產(chǎn)酯化酶能力較高的紅曲霉菌ZK，此菌種產(chǎn)酶的酶活力提高了42.3%。固體發(fā)酵生產(chǎn)法和液體深層培養(yǎng)生產(chǎn)法是產(chǎn)酯酶菌種常用的兩種方法，菌種培養(yǎng)大多時(shí)候只需要一種培養(yǎng)方法，有時(shí)候需要兩種方法配合完成。

3 酯酶酶活力的測(cè)定方法

目前酯酶酶活力測(cè)定的方法有比色法、氫氧化鈉滴定法、a -乙酸萘酯比色法等。

3.1 比色法

以對(duì)硝基苯酚為作用底物，利用紫外分光光度計(jì)在400nm處測(cè)體系的吸光度值。文獻(xiàn)報(bào)道的具體過程為[31]：取1mL 1mmol/L對(duì)硝基苯醋酸酯（p-NPC2）溶液、2mL Tris-HCL pH7.2的緩沖液加入試管，于40℃恒溫水浴15min，再加1mL酶液震蕩反應(yīng)8min，立即加2mL 0.1mol/L鹽酸終止反應(yīng)，在400nm處測(cè)吸光度值。以加入1mL滅活酶液作對(duì)照。每分鐘催化產(chǎn)生1mmol對(duì)硝基苯酚的酶量為1個(gè)酶活力單位。

3.2 氫氧化鈉滴定法

以NaOH滴定三醋酸甘油酯在酯酶作用下所釋放的醋酸來測(cè)定[32]。具體過程為：取5.9mL甘油三醋酸酯置于100mL的容量瓶中，加蒸餾水充分搖勻溶解，定容至100mL，取上述溶液20mL，放入三角瓶內(nèi)，調(diào)溫40℃，用0.05mol/L的NaOH將pH值滴定至6.5。然后加2mL酶液，40℃攪拌反應(yīng)30min，過程中以NaOH維持pH值為6.3～6.5，讀取NaOH耗量，用滅活酶液作對(duì)照。酶活力單位的定義：每分鐘催化分解三醋酸甘油酯釋放1mmol游離醋酸的酶量為1個(gè)酶活力單位。

3.3 α-乙酸萘酯比色法

乙酸萘酯是酯酶的一種作用底物，在顯色劑的輔助下可以用來檢測(cè)酯酶酶活力，其檢測(cè)的原理是：

乙酸萘酯+水+酶→萘酚+乙酸

萘酚+偶氮鹽→褐色偶氮化合物+氯化鋅+鹽酸

乙酸萘酯經(jīng)酯酶水解后，生成的萘酚與偶氮鹽反應(yīng)生成褐色偶氮化合物[33]，可以根據(jù)顏色的變化來確定酶活力的大小。Baumann M[34]等采用乙酸酯為篩選底物的方法，通過底物羧基端（乙酸）的釋放速度來測(cè)定酶活的大?。粚O中濤、薛慶節(jié)[35]等通過a-乙酸萘酯檢測(cè)法對(duì)工程菌酯酶進(jìn)行了純化、性質(zhì)和固定化的研究。

4 酯酶的應(yīng)用

酯酶作為一種重要的工業(yè)用酶，可催化酯交換、酯合成、多肽合成及內(nèi)酯合成等多種反應(yīng)，且具有反應(yīng)不需要輔酶、反應(yīng)條件較溫和、催化活性高以及選擇性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，因此，酯酶被廣泛應(yīng)用于洗滌劑、食品、飲料、油脂、造紙、飼料、紡織、皮革、精細(xì)化工、新型材料、醫(yī)藥、化妝品、環(huán)境治理、生物能源等工業(yè)領(lǐng)域。

4.1 酯酶在食品加工中的應(yīng)用

酯酶主要是通過酯交換、水解[36]及合成化合物等在食品加工中廣泛應(yīng)用。與使用傳統(tǒng)酶相比較，將酯酶應(yīng)用于食品加工過程中可減少纖維素水解、蛋白質(zhì)消化等引起的食品污染問題，同時(shí)也可提高食品的食用性能。如醬油和食醋的釀造過程中加入酯酶，可提高乳酸乙酯、乙酸乙酯等酯類的含量，從而增加產(chǎn)品的香味，提高了產(chǎn)品的口感[37]；釀酒過程中加入酯酶，可催化合成香酯液，應(yīng)用于濃香型白酒，大大縮短了發(fā)酵周期，提高了酒質(zhì)和香味；同樣酯酶也可以使乳制品增香；食用油脂提煉工藝中，酯酶能催化脂肪酸與甘油之間的酯化反應(yīng)，可以把油中的大量游離脂肪酸轉(zhuǎn)變成中性甘油酯，提高了食用油的價(jià)值；酯酶催化合成的單甘脂是食用量最大的食品乳化劑[38]。

4.2 酯酶在醫(yī)藥行業(yè)中的應(yīng)用

由于酯酶酯化反應(yīng)具有高底物專一性、區(qū)域選擇性、對(duì)映選擇性等優(yōu)點(diǎn)。在手性化合物拆分、藥物合成等領(lǐng)域呈現(xiàn)出很大的應(yīng)用潛力。在醫(yī)藥領(lǐng)域很多藥物都是手性化合物，而近年來酯酶拆分已經(jīng)成為手性化合物拆分的研究熱點(diǎn)。用酯酶拆分酮基布洛芬、(R)-氟比洛芬等手性藥物，均提高了對(duì)映體過量值，也提高了藥物的使用性和有效性。Zheng[39]等利用來自大腸桿菌的純化酯酶進(jìn)行薄荷醇的轉(zhuǎn)酯化的拆分，結(jié)果表明，酯酶對(duì)乙酸薄荷酯的E值大于100，效果較好。宣磊[40]等采用巨大芽孢桿菌WZ009酯酶催化水解拆分(R,S)-3-羥基丁酸乙酯得到(R)-EHB，通過對(duì)酯酶催化水解反應(yīng)條件的探討得出，在30℃，pH7的條件下，反應(yīng)經(jīng)過2h，(R)-EHB對(duì)映體過量值eep達(dá)到99%，底物轉(zhuǎn)化率達(dá)到55.5%。Zheng[41]等利用從重組細(xì)胞中提取的羧酸酯酶，在無水乙醇做溶劑，35℃，pH7.5條件下選擇性地合成了(S)-1-苯基-1，2-乙二醇，它的對(duì)映體過量值eep達(dá)到99%，底物轉(zhuǎn)化率達(dá)到45%。

4.3 酯酶在環(huán)保行業(yè)的應(yīng)用

隨著科學(xué)的進(jìn)步，農(nóng)作物產(chǎn)量的提高，伴隨著農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用的農(nóng)藥量也在不斷增加，帶來的農(nóng)藥污染、殘留問題也日趨嚴(yán)重，其中農(nóng)藥中菊酯類殺蟲劑在自然條件下難以降解，給食品安全和環(huán)境污染帶來了巨大隱患，并且有研究表明，菊酯類殺蟲劑具有類固醇結(jié)合活性，可能導(dǎo)致人體激素的波動(dòng)。許多研究人員對(duì)菊酯類殺蟲劑做了大量的研究工作，起初是從小鼠肝臟中和昆蟲內(nèi)發(fā)現(xiàn)了能降解菊酯農(nóng)藥的酯酶，近年來，研究發(fā)現(xiàn)，酯酶降解菊酯具有良好的功效，目前已篩選到能有效降解氯氰菊酯和丙烯菊酯等相關(guān)的酯酶基因，并將酯酶基因克隆導(dǎo)入微生物中[42]。未來構(gòu)建產(chǎn)酯酶的高效基因工程菌將是環(huán)境保護(hù)的一個(gè)發(fā)展趨勢(shì)。

4.4 酯酶在洗滌工業(yè)中的應(yīng)用

酯酶可催化合成糖酯類生物表面活性劑，也有提高表面活性劑釋放的作用[43]，具有低毒、環(huán)保、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，因此酯酶在洗滌用品等行業(yè)廣泛使用。Spicka[44]等利用芳基酯酶和過氧化氫原位產(chǎn)生的過乙酸在65℃下對(duì)棉織物漂白，得到了滿意的漂白效果。與傳統(tǒng)高溫高堿條件下的漂白相比，該方法的優(yōu)點(diǎn)是在溫和的作用條件下進(jìn)行，即接近中性的pH和溫度為65℃的條件下，酶促反應(yīng)產(chǎn)生的過乙酸具有很強(qiáng)的漂白性能。并且酶促漂白綠色環(huán)保，不需要添加大量的輔助劑和化學(xué)試劑。

5 展望

目前酯酶的結(jié)構(gòu)已知是 a / b 水解酶的典型結(jié)構(gòu)，但具體在催化過程所涉及到許多機(jī)理尚不明朗；酯酶的系統(tǒng)分類標(biāo)準(zhǔn)還不能滿足分類的要求，許多新檢索的酯酶還不能逐一詳細(xì)地進(jìn)行命名分類；從環(huán)境中篩選產(chǎn)酯酶的微生物菌種效率低。但近年來，隨著基因文庫、基因工程、定向進(jìn)化技術(shù)、固定化技術(shù)的發(fā)展，以及界面酶促過程等技術(shù)的深入研究，酯酶的研究可能具體到酯酶結(jié)構(gòu)中的分子層，高效產(chǎn)酯酶菌種的篩選和酯酶發(fā)酵培養(yǎng)條件的優(yōu)化、誘變育種、基因克隆等，進(jìn)而構(gòu)建高效基因工程菌的研究取得了很大的發(fā)展。繼而可能挖掘酯酶在食品、醫(yī)藥、環(huán)保和洗滌行業(yè)中更加廣泛的應(yīng)用。

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