陳裕華，何日文，朱建翠，張海冰，肖 杰，于 飛，黃 森，王 令，張海明，沈 丹

（1. 廣州市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東廣州 510440；2.廣州市農(nóng)業(yè)局，廣東廣州 510440）

2003年12月暴發(fā)的H5N1禽流感疫情和2013年發(fā)生的人H7N9流感事件，給全球養(yǎng)禽業(yè)和公共衛(wèi)生帶來極大影響。2017年出現(xiàn)的對(duì)雞具有高致病性的H7N9流感變異株，引起了養(yǎng)禽業(yè)的極大關(guān)注。2017年7月7日，我國統(tǒng)一采用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1 Re-8株+H7N9 Re-1株）對(duì)家禽實(shí)施免疫。研究發(fā)現(xiàn)，活禽市場作為流感病毒的一個(gè)重要儲(chǔ)存庫，不同種屬、不同產(chǎn)地的禽類集中在一起，為流感病毒基因重組和跨種傳播提供了良好條件[1-3]。因此，活禽交易市場被認(rèn)為是人感染H5N1、H7N9 等流感病毒的高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域[4]。為降低人感染流感風(fēng)險(xiǎn)，廣東省于2014年要求活禽交易市場須實(shí)行“一日一清潔消毒、一周一大掃除、一月一休市、過夜零存欄”制度，即“1110”制度。該制度的實(shí)施有效降低了流感病毒陽性檢出率[5-6]，但其依舊處于較高水平。本研究在活禽批發(fā)市場正常執(zhí)行“1110”制度前提下，通過分析所采活禽樣品的流感病原分布，探究活禽批發(fā)市場活禽感染流感病毒的可能風(fēng)險(xiǎn)因素，以期為政府調(diào)整流感防控政策提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 時(shí)間和對(duì)象

2017年4月，選擇廣州市黃埔區(qū)家禽批發(fā)市場（A）和花都區(qū)家禽批發(fā)市場（B）為調(diào)查對(duì)象。

1.2 抽樣策略與樣本量計(jì)算

1.2.1 群體水平 用Win Epi軟件，設(shè)預(yù)期場間流行率為40%，置信水平為90%，可接受誤差為10%，計(jì)算至少需采集的運(yùn)輸車輛和活禽經(jīng)營檔口數(shù)量。

1.2.2 個(gè)體水平 用發(fā)現(xiàn)疫病的抽樣策略抽取個(gè)體。假設(shè)群大小3 000只，置信水平95%，試驗(yàn)敏感性90%、特異性 99%，場內(nèi)預(yù)期流行率20%，得出每部運(yùn)輸車輛和每個(gè)活禽經(jīng)營檔口各抽取15只活禽樣品。對(duì)所有樣品標(biāo)明樣品種類（如雞、鴨、鵝等）并進(jìn)行唯一性編號(hào)。

1.3 采樣時(shí)間

每個(gè)家禽批發(fā)市場采集2次：第1次采集運(yùn)輸車輛中的活禽樣品，并記錄活禽去向的檔口編號(hào)；第2次采集24 h后已記錄檔口的活禽樣品。

1.4 問卷調(diào)查

問卷設(shè)計(jì)盡可能考慮到與流感傳播有關(guān)的所有風(fēng)險(xiǎn)因素，包括市場外周環(huán)境衛(wèi)生狀況、運(yùn)輸車輛和檔口消毒頻次、活禽種類、活禽來源地、活禽在途運(yùn)輸時(shí)長等13個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素。進(jìn)場前對(duì)活禽運(yùn)輸車輛司機(jī)，進(jìn)場后對(duì)活禽經(jīng)營檔口工作人員進(jìn)行問詢調(diào)查，并輔以《動(dòng)物檢疫合格證明》等資料佐證。所有問卷均由調(diào)查人員填寫。

1.5 樣品采集和保存

嚴(yán)格按照《動(dòng)物疫病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)采樣方法》（NY/T 541—2016）的要求采集并保存樣品，送廣州市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室檢測。

1.6 實(shí)驗(yàn)室檢測

采用通用型流感病毒熒光RT-PCR方法。

1.7 風(fēng)險(xiǎn)因素分析

用 Epi InfoTM7 軟件進(jìn)行單因素分析；保留P＜0.05 的風(fēng)險(xiǎn)因素，用 IBM SPSS 22 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行Spearman 相關(guān)性分析，結(jié)合生物學(xué)知識(shí)剔除相關(guān)系數(shù)大于0.4 的因素；用Epi InfoTM7 對(duì)保留的風(fēng)險(xiǎn)因子進(jìn)行多因素Logistic 回歸分析，得到回歸模型；用IBM SPSS 22做 Hosmer-Lemeshow 檢驗(yàn)和ROC曲線評(píng)估模型擬合優(yōu)度。

2 結(jié)果

2.1 總體情況

在A批發(fā)市場隨機(jī)采集15部車輛和30個(gè)活禽經(jīng)營檔口的樣品（每天約有20部運(yùn)輸活禽車輛進(jìn)入，共有55個(gè)活禽經(jīng)營檔口）；在B批發(fā)市場隨機(jī)采集7部車輛和14個(gè)活禽經(jīng)營檔口的樣品（每天約有7部運(yùn)輸活禽車輛進(jìn)入，共有18個(gè)活禽經(jīng)營檔口）。共采集活禽樣品990份。其中，運(yùn)輸車輛活禽樣品330份，經(jīng)營檔口活禽樣品660份；A批發(fā)市場675份，B批發(fā)市場315份。檢出通用型流感病毒陽性435份，樣品陽性率為43.94%。

2.2 不同市場對(duì)比

A、B兩個(gè)批發(fā)市場活禽樣品流感病毒陽性率分別為51.85%和26.98%，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=52.91，P ＜0.05）。

2.3 進(jìn)場前后對(duì)比

進(jìn)場前后的樣品流感病毒陽性率分別為24.24%和53.79%，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（χ2=77.96，P＜0.001）。

2.4 風(fēng)險(xiǎn)因素分析

2.4.1 單因素分析 對(duì)問卷中10個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行了因素分析。結(jié)果見表1。

表1 廣州市A和B兩個(gè)家禽批發(fā)市場流感感染風(fēng)險(xiǎn)因子單因素分析

2.4.2 多因素logisic回歸 篩選出單因素分析P＜0.05的8個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素，帶入SPSS進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析，先剔除“活禽在途運(yùn)輸時(shí)長”這個(gè)與“活禽來源地”等有較強(qiáng)相關(guān)性因素（相關(guān)系數(shù)為0.661），后結(jié)合有關(guān)生物學(xué)知識(shí)，剔除“活禽來源場所”和“未售完家禽處理方式”2個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素，最后將剩下的5個(gè)風(fēng)險(xiǎn)因素帶入Epi info 軟件進(jìn)行Logistic回歸分析，用倒推法選擇變量。結(jié)果表明，活禽來源地（X1）、活禽種類（X2）和檔口清洗消毒頻次（X3）是活禽批發(fā)市場活禽感染流感的高風(fēng)險(xiǎn)因素（表2）。模型的回歸方程為：Log（odds）=1.3863+2.3073X1-1.5885X2-0.147X3。 經(jīng)Hosmer-Lemeshow檢驗(yàn)，該模型的擬合度較好（P＞0.05）。模型的ROC曲線（圖1）下面積為0.659（95%CI：0.618～0.700）。

圖1 回歸模型的ROC曲線

表2 廣州市A和B兩個(gè)家禽批發(fā)市場流感感染風(fēng)險(xiǎn)因子多因素Logistic回歸分析

3 分析與討論

本研究發(fā)現(xiàn)，進(jìn)入批發(fā)市場后24 h較進(jìn)入批發(fā)市場前，活禽樣品中的流感病毒陽性率顯著升高。這可能是因?yàn)閹Ф净钋菰谑袌鰞?nèi)排毒或經(jīng)過現(xiàn)場宰殺后，對(duì)市場環(huán)境造成了直接污染而感染其他健康活禽，從而導(dǎo)致市場內(nèi)流感病毒循環(huán)傳播。Davis等[7]開展的相關(guān)研究也顯示，活禽進(jìn)入交易市場后，流感病毒檢出陽性率明顯上升。家禽批發(fā)市場作為家禽交易中轉(zhuǎn)的第一站，是控制流感病毒傳播，特別是控制H7N9流感病毒傳播的突破口。這是將家禽批發(fā)市場作為目標(biāo)群開展流感流行病學(xué)研究的主要原因。

黃埔區(qū)批發(fā)市場（A）的活禽流感陽性率顯著高于花都區(qū)批發(fā)市場（B）。這可能是因?yàn)辄S埔區(qū)家禽批發(fā)市場用是一個(gè)物流倉庫改建而成的，其頂部有一個(gè)大的不透明的遮陽頂棚。該頂棚阻擋了空氣流通和陽光直射，使環(huán)境陰暗潮濕，從而為流感病毒增殖提供了便利條件。而花都區(qū)批發(fā)市場為敞篷式設(shè)計(jì)，有利于空氣流通和陽光直射。

對(duì)不同活禽來源數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析發(fā)現(xiàn)，進(jìn)場前來自交易市場的活禽樣品流感陽性率顯著高于來自于養(yǎng)殖場的活禽樣品，進(jìn)場后24 h來自于養(yǎng)殖場的活禽樣品流感陽性率顯著高于來自于批發(fā)市場的活禽樣品，而來自于交易市場的活禽樣品進(jìn)場前和進(jìn)場后無顯著差異。分析原可能是來自于批發(fā)市場的活禽進(jìn)入廣州市前已大量感染流感病毒，而來自于養(yǎng)殖場的活禽進(jìn)場前感染率較低，而進(jìn)入批發(fā)市場后被其他帶毒活禽或環(huán)境中的流感病毒所感染。

來自外省的活禽感染流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)顯著高于本省市。這可能是春夏之交，廣東省較其他省份氣溫提前升高，流感病毒檢出率較低，但外省由于氣溫較低，活禽攜帶流感病毒的概率較高，且經(jīng)過長途運(yùn)輸，活禽受到應(yīng)激，免疫力低下，因而增加了排毒的可能。

因經(jīng)費(fèi)預(yù)算等原因，本次研究只針對(duì)通用型流感病毒進(jìn)行了病原學(xué)檢測，并未對(duì)陽性樣品進(jìn)行基因分型。此外，導(dǎo)致活禽批發(fā)市場活禽感染流感病毒的風(fēng)險(xiǎn)因素眾多，而且各因素之間存在協(xié)同作用，不同時(shí)間或季節(jié)、不同規(guī)?；虿煌灰啄Ｊ脚l(fā)市場的風(fēng)險(xiǎn)因素可能都不盡相同。因此，只有進(jìn)一步開展持續(xù)系統(tǒng)的監(jiān)測和研究，才能提出針對(duì)性更強(qiáng)的防控措施。

為控制偏倚，本次調(diào)查盡可能收集準(zhǔn)確全面的信息。如，帶毒活禽的飛沫、糞便以及尸體均含有流感病毒；病毒可經(jīng)過消化道、呼吸道和污染的環(huán)境等多種途徑傳播，也可以通過人員或交通運(yùn)輸工具的流動(dòng)而擴(kuò)散。本次調(diào)查在設(shè)計(jì)問卷時(shí)，充分考慮了這些因素，并結(jié)合廣州市活禽批發(fā)市場實(shí)際，幾經(jīng)調(diào)研修改。在填寫問卷之前，對(duì)調(diào)查人員進(jìn)行多次培訓(xùn)，統(tǒng)一認(rèn)識(shí)，以求得到真實(shí)信息。不足之處在于，問卷中設(shè)計(jì)的某些問題，對(duì)活禽經(jīng)營者來說過于敏感，因此在收集信息時(shí)，可能存在信息失真問題，如“未售完活禽的處置方式（宰殺/異地存放）”“每日每平米檔口活禽銷量”等。

4 結(jié)論

本研究通過隨機(jī)抽樣方法，對(duì)廣州市家禽批發(fā)市場活禽感染流感病毒情況及風(fēng)險(xiǎn)因素進(jìn)行了調(diào)查，發(fā)現(xiàn)廣州市2個(gè)活禽批發(fā)市場活禽進(jìn)場后的通用型流感病毒陽性率明顯升高。通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，活禽種類為雞、活禽來源地為外省和活禽經(jīng)營檔口清洗消毒頻次＜1次/周等因素，是廣州市活禽批發(fā)市場活禽感染流感病毒的高風(fēng)險(xiǎn)因素。因此，建議加強(qiáng)外省進(jìn)入活禽的監(jiān)測和跨省活禽調(diào)運(yùn)的監(jiān)管，同時(shí)活禽經(jīng)營檔口應(yīng)保持適當(dāng)?shù)幕钋菝芏?，采取水禽和陸禽分區(qū)交易、嚴(yán)格落實(shí)清洗消毒等措施。

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