溶解氧水平對(duì)花鱸幼魚(yú)氧化應(yīng)激與能量利用的影響及生理機(jī)制?

常志成， 溫海深， 張美昭， 李吉方， 李 昀， 張凱強(qiáng)， 王 偉， 劉 陽(yáng)， 田 源， 王曉龍

(海水養(yǎng)殖教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(中國(guó)海洋大學(xué))，山東 青島 266003)

溶解氧作為維持水生動(dòng)物生存的基本條件，是影響水生動(dòng)物生長(zhǎng)、呼吸、物質(zhì)和能量代謝等的重要環(huán)境因子[1]。水體周期性低氧和連續(xù)性低氧是水產(chǎn)養(yǎng)殖中的常見(jiàn)現(xiàn)象[2]，在人類(lèi)活動(dòng)的影響下，近岸海域底層水體缺氧現(xiàn)象也呈不斷上升趨勢(shì)[3-4]。而養(yǎng)殖動(dòng)物在低氧環(huán)境下，易引起機(jī)體的應(yīng)激反應(yīng),尤其是低氧后突然恢復(fù)到常氧狀態(tài)更易加劇氧化脅迫，導(dǎo)致機(jī)體氧化損傷[5]。為避免低氧給機(jī)體帶來(lái)的損傷，魚(yú)類(lèi)已經(jīng)形成了較為完備的生理響應(yīng)，包括增加呼吸效率[6]、增強(qiáng)血氧親和力[7]、提高血氧循環(huán)率[8]、改變代謝率以降低能量消耗[9]等來(lái)應(yīng)對(duì)低氧環(huán)境。研究低氧條件下魚(yú)類(lèi)生理水平變化及其應(yīng)激效應(yīng)不僅對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖具有指導(dǎo)意義,還可為探討魚(yú)類(lèi)適應(yīng)低氧環(huán)境的策略提供參考數(shù)據(jù)。

花鱸(Lateolabraxmaculatus)俗稱(chēng)海鱸、寨花等，隸屬于鱸形目(Perciformes)鮨科(Serranidae)花鱸屬(Lateolabrax)[10],是我國(guó)重要的海產(chǎn)經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)，在海水、半咸水、淡水或河口地區(qū)均可存活與生長(zhǎng)[11]。隨著花鱸養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，花鱸在人工育苗[12-13]、繁殖生理以及人工養(yǎng)殖模式[14-15]等方面已經(jīng)積累了較為豐富的經(jīng)驗(yàn)。目前關(guān)于低氧對(duì)水生動(dòng)物的影響研究主要集中在蝦蟹類(lèi)[16-17]以及部分魚(yú)類(lèi)[18-20]，而低氧對(duì)花鱸的生理影響機(jī)理鮮有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究低氧脅迫與恢復(fù)對(duì)花鱸幼魚(yú)血液生理生化以及肝臟、鰓和肌肉的氧化應(yīng)激與能量利用的影響，探討花鱸對(duì)溶氧的適應(yīng)性，豐富花鱸的生物學(xué)與生理學(xué)研究?jī)?nèi)容，為提高花鱸工廠化養(yǎng)殖技術(shù)、促進(jìn)花鱸苗種的選育以及健康養(yǎng)成提供理論支持，以期為花鱸養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展提供重要的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚(yú)種

試驗(yàn)所用花鱸為東營(yíng)市利津縣雙瀛水產(chǎn)苗種有限責(zé)任公司魚(yú)苗繁育基地繁殖的幼魚(yú)，試驗(yàn)選用體質(zhì)健壯、活力旺盛的幼魚(yú)進(jìn)行，試驗(yàn)用魚(yú)體長(zhǎng)為(21.43±0.77)cm、體重為(149.20±19.22)g。運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室后放置于500 L的塑料圓桶(d=0.8 m，depth=1 m)暫養(yǎng)2周，暫養(yǎng)期間連續(xù)充氣保持溶氧在7.5～8.0 mg/L，溫度保持在19～21℃，鹽度30，模擬自然光周期14L∶10D。每天09:00和17:00投餌2次，投餌后清理殘餌并換水。試驗(yàn)開(kāi)始前一天停止投食。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)在3個(gè)500 L的塑料圓桶內(nèi)進(jìn)行，開(kāi)始試驗(yàn)前通過(guò)往3個(gè)圓桶內(nèi)連續(xù)快速注入氮?dú)鈦?lái)降低溶氧含量，利用YSIDO200溶氧儀來(lái)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)溶氧量的變化，通過(guò)調(diào)節(jié)注入空氣和氮?dú)獾亩嗌賮?lái)維持所需要的溶解氧含量。在溶氧量達(dá)到2 mg/L時(shí)從暫養(yǎng)桶往試驗(yàn)圓桶內(nèi)放置約40尾花鱸幼魚(yú)，等花鱸適應(yīng)10 min后開(kāi)始計(jì)時(shí)，此時(shí)溶氧含量(1.56±0.24)mg/L。試驗(yàn)分為低氧脅迫與常氧恢復(fù)兩個(gè)階段，低氧脅迫時(shí)間分別為3、6、12和24 h , 常氧恢復(fù)時(shí)間在低氧脅迫24 h取樣后立即進(jìn)行，復(fù)氧時(shí)間分別為3和12 h ，恢復(fù)常氧后溶氧含量(7.72±0.18)mg/L。

1.3 樣品采集與處理

在低氧脅迫與常氧恢復(fù)的各時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣，其中在暫養(yǎng)桶中所取樣品作為對(duì)照組，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)每個(gè)試驗(yàn)桶各采樣3尾，將其用放置于MS-222(200 mg/L)的海水中進(jìn)行快速麻醉，每尾魚(yú)尾靜脈采血約2 mL，其中抽取約0.5 mL注入含有0.1 mL EDTA-K2的分子管中制成抗凝血用于測(cè)血液生理指標(biāo)，其余約1.5 mL血液放于4 ℃靜置4～8 h，采用12 000 r/min，4 ℃，離心 10 min，取上清血清-20 ℃保存用于測(cè)血液生化指標(biāo)。

采血后快速解剖分別取花鱸的肝臟、鰓、肌肉于1.5 mL離心管中，迅速放置于液氮中，待測(cè)。將組織樣品在液氮條件下，用杵子研磨成粉末，放置于離心管上并準(zhǔn)確稱(chēng)重，按重量體積比 1∶9(g/mL)向樣品中加入生理鹽水，振蕩混勻后采用轉(zhuǎn)速為 2 500 r/min，4 ℃，離心10 min，取上清液，保存于-20 ℃冰箱中，在 1 周內(nèi)進(jìn)行相關(guān)抗氧化酶指標(biāo)的測(cè)定。

1.4 樣品測(cè)定

血液生理指標(biāo)測(cè)定采用BS-1800全自動(dòng)血液細(xì)胞分析儀(邁瑞，深圳)，測(cè)定指標(biāo)包括紅細(xì)胞數(shù)目(Red blood cell，RBC)、白細(xì)胞數(shù)目(White blood cell，WBC)、血紅蛋白含量(Hemoglobin ，HGB)和血小板數(shù)目(Blood platelet，PLT)。血清中的生化指標(biāo)采用BS-180全自動(dòng)生化分析儀(邁瑞，深圳)及相配套的試劑盒進(jìn)行測(cè)定，包括總蛋白(Total protein，TP)，白蛋白(Albumin，ALB)，谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Glutamate pyruvic transaminase，ALT)，谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate transaminase，AST)，堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，ALP)，乳酸脫氫酶(Lactate dehydrogenase，LDH)，總膽固醇(Total cholesterol，TC)，甘油三酯(Triglyceride，TG)。

試驗(yàn)測(cè)定氧化應(yīng)激以及能量利用指標(biāo)，包括超氧化物岐化酶(Superoxide Dismutase，SOD)、過(guò)氧化氫酶(Catalase，CAT)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶(Glutathione-S-transferase，GST)、丙二醛(Malonaldehyde,MDA)、蛋白含量以及糖原、乳酸含量所用試劑盒均采購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定采取考馬斯亮藍(lán)法，考馬斯亮藍(lán)遇蛋白質(zhì)顯現(xiàn)藍(lán)色，在 595 nm 波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度，再轉(zhuǎn)換為蛋白質(zhì)含量。超氧化物歧化酶采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定，在顯色劑作用下反應(yīng)系統(tǒng)呈現(xiàn)紫紅色，在450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，通過(guò)公式轉(zhuǎn)化為酶活力值。定義 1 mg 組織蛋白在1 mL反應(yīng)液中SOD抑制率達(dá)50%時(shí)所對(duì)應(yīng)的SOD 量為一個(gè)活力單位(U)。過(guò)氧化氫酶采用鉬酸銨法測(cè)定，過(guò)氧化氫與鉬酸銨產(chǎn)生淡黃色的絡(luò)合物，在405 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，計(jì)算轉(zhuǎn)化為酶活力。定義1 mg組織蛋白1s分解1 μmol過(guò)氧化氫的量為一個(gè)活力單位(U)。谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶是通過(guò)檢測(cè)谷胱甘肽在反應(yīng)體系前后濃度的變化來(lái)測(cè)定。定義1 mg組織蛋白，在37 ℃反應(yīng)1 min扣除非酶促反應(yīng)，使反應(yīng)體系中谷胱甘肽濃度降低1 μmol/L為一個(gè)活力單位。丙二醛采用硫代巴比妥酸法(TBA)進(jìn)行測(cè)定，反應(yīng)體系產(chǎn)生紅色產(chǎn)物，在 532 nm 波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度，計(jì)算轉(zhuǎn)換為丙二醛含量。糖原測(cè)定是利用糖原在濃硫酸作用下脫水生成糖醛衍生物，后者再與蒽酮作用形成藍(lán)色化合物，再與此法處理的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液比色定量。乳酸測(cè)定是以NAD+為氫受體，LDH催化乳酸脫氫產(chǎn)生丙酮酸，使NAD+轉(zhuǎn)化成NADH。其中PMS遞氫使NBT還原為紫色呈色物，呈色物的吸光度在530 nm時(shí)與乳酸含量成線性關(guān)系。

1.5 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，利用 SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA)以及 Duncan多重比較檢驗(yàn)數(shù)據(jù)差異的顯著性，以P<0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 低氧脅迫對(duì)花鱸幼魚(yú)血液生理生化指標(biāo)的影響

表1結(jié)果顯示，白細(xì)胞數(shù)目在脅迫6、12和24 h后顯著上升(P<0.05)，血紅蛋白在脅迫3、6、12和24 h后含量顯著上升(P<0.05)，紅細(xì)胞數(shù)目在脅迫3、6和12 h后顯著上升(P<0.05)，恢復(fù)常氧后均與對(duì)照組無(wú)顯著差異。血小板數(shù)目在脅迫3 h后顯著上升(P<0.05),其余時(shí)間無(wú)顯著差異。

表1 低氧脅迫與恢復(fù)對(duì)花鱸幼魚(yú)血液生理指標(biāo)的影響Table 1 Effects of hematological physiology parameters in juvenile Lateolabrax maculatus under hypoxia and recovery

注：C代表對(duì)照，D3、D6、D12、D24分別代表低氧脅迫3、6、12和24 h 。R3、R12分別代表脅迫后立即恢復(fù)3和12 h。同一列中不同字母上標(biāo)的數(shù)值相互之間差異顯著。下同。

Note: C on behalf of the control, D3, D6, D12 and D24, respectively, represent hypoxia stress 3 h, 6 h, 12 h, 24 h. R3 and R12 represent recovery 3 h, 12 h after hypoxia stress. Values with different superscript letters in the same row were significantly different from each other(P< 0.05).The same below.

表2結(jié)果顯示，低氧脅迫后谷丙轉(zhuǎn)氨酶與谷草轉(zhuǎn)氨酶活力在低氧脅迫3和6 h后顯著上升(P<0.05)，在脅迫12和24 h以及恢復(fù)常氧后與對(duì)照組無(wú)顯著差異。堿性磷酸酶在低氧脅迫后活力有下降趨勢(shì)，在脅迫6 h后活力顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，其他時(shí)間點(diǎn)與對(duì)照組無(wú)顯著差異。乳酸脫氫酶活力在低氧3 h后顯著上升(P<0.05)，在低氧6、12和24 h與對(duì)照組無(wú)顯著差異，在復(fù)氧3和12 h后活力又顯著高于對(duì)照組(P<0.05)?？偟鞍?、白蛋白與總膽固醇在低氧脅迫12 h后含量顯著下降(P<0.05)，其余時(shí)間無(wú)顯著差異。甘油三脂在低氧脅迫12 h后含量顯著下降(P<0.05)，復(fù)氧后含量逐漸上升，在復(fù)氧12 h后含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)。

2.2 低氧脅迫與恢復(fù)下對(duì)肝、鰓、肌組織的氧化應(yīng)激

表3結(jié)果顯示，肝組織中，隨著脅迫時(shí)間的增加，SOD含量逐步增加，在低氧脅迫24 h的SOD含量顯著高于低氧脅迫3 h的SOD含量(P<0.05)；CAT活力在低氧脅迫階段沒(méi)有顯著差異，在恢復(fù)3 h后活力顯著低于初始對(duì)照組(P<0.05)；GST活力隨著低氧脅迫時(shí)間的增加而逐步增加，在低氧12和24 h時(shí)其活力顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，隨著復(fù)氧時(shí)間的增加其活力逐步降低到正常水平，在復(fù)氧3 h時(shí)活力仍顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，在復(fù)氧6和12 h差異不顯著；肝組織MDA含量在低氧3、6、12和24 h后顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，并呈逐漸升高趨勢(shì)，在復(fù)氧3和12 h后其含量仍顯著低于對(duì)照組(P<0.05)。

鰓組織中SOD活力在低氧脅迫3 h后顯著低于初始對(duì)照組(P<0.05)，在低氧6和12 h后活力顯著升高(P<0.05)，在24 h后又降低到初始水平，在恢復(fù)12 h后含量又顯著低于正常值(P<0.05)；CAT活力在低氧3和12 h后顯著升高(P<0.05)，而在復(fù)氧3和12 h后活力顯著降低(P<0.05)；GST活力在低氧3 h時(shí)顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，在復(fù)氧12 h后活力顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；MDA含量在低氧3 h和復(fù)氧3 h后顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而在其他時(shí)間段沒(méi)有顯著差異。

肌組織SOD在低氧12和24 h后活力顯著低于初始對(duì)照組(P<0.05)，復(fù)氧后沒(méi)能恢復(fù)到正常水平(P<0.05)；肌組織CAT活力在低氧3、6、12和24 h顯著低于初始對(duì)照組(P<0.05)，并呈現(xiàn)逐步降低趨勢(shì)，在低氧24 h降到最低，復(fù)氧3和12 h后活力仍顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；GST活力在低氧6 h后顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，其他時(shí)間無(wú)顯著變化；MDA含量在低氧6 h后顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，而其他時(shí)間段也沒(méi)有顯著變化。

表2 低氧脅迫與恢復(fù)對(duì)花鱸幼魚(yú)血液生化指標(biāo)的影響Table 2 Effects of hypoxia and recovery on blood biochemical indexes of juvenile Lateolabrax maculatus

2.3 低氧脅迫與恢復(fù)下肝、肌組織能量利用影響

表4結(jié)果顯示，肝糖原含量在低氧6、12和24 h后顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，在復(fù)氧3 h后其含量顯著升高(P<0.05)，而乳酸含量在低氧3 h后顯著低于對(duì)照組(P<0.05)，其他時(shí)間點(diǎn)沒(méi)有顯著差異；肌糖原在低氧24 h后含量顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，在其他時(shí)間段沒(méi)有明顯差異，而乳酸含量在各個(gè)時(shí)間段中均沒(méi)有明顯差異。

3 討論

3.1 低氧脅迫對(duì)花鱸幼魚(yú)血液生理生化指標(biāo)的影響

紅細(xì)胞(RBC)是血液中最主要的成分，主要功能是攜帶和運(yùn)輸氧氣，以滿足機(jī)體生理活動(dòng)和運(yùn)動(dòng)的需要。血紅蛋白(HGB)在血液中是運(yùn)輸氧氣的直接載體。本研究中RBC和HGB在低氧時(shí)顯著上升，這樣能夠提高對(duì)氧的親和力，提高對(duì)氧的輸送能力，進(jìn)而增加對(duì)氧的呼吸量來(lái)保持穩(wěn)態(tài)，這與在鯽魚(yú)(Carassiusauratus)中的研究結(jié)果一致[21]。白細(xì)胞(WBC)作為魚(yú)類(lèi)機(jī)體細(xì)胞免疫和體液免疫的重要成分，主要作用是保護(hù)機(jī)體抵御外部和內(nèi)部的傷害。本研究中WBC在低氧6、12和24 h后顯著上升是機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)低氧脅迫應(yīng)答的結(jié)果，在低氧3 h未能有顯著上升可能是機(jī)體先調(diào)動(dòng)其他的防御機(jī)制。血小板在正常血液中有較恒定的數(shù)量，在止血、炎癥反應(yīng)等生理和病理過(guò)程中有重要作用。本試驗(yàn)中PLT在低氧3 h顯著上升，之后便下降到正常水平，這說(shuō)明PLT在低氧脅迫開(kāi)始時(shí)比較敏感，隨著脅迫程度加深，其作用可能由其他防御機(jī)制所取代?？傮w來(lái)看，低氧脅迫后花鱸血細(xì)胞總體上逐漸上升，在復(fù)氧后又能夠降低到正常水平，這是機(jī)體為維持穩(wěn)態(tài)所采取的生理響應(yīng)機(jī)制。

血清中的蛋白質(zhì)對(duì)維持魚(yú)類(lèi)的生理學(xué)和免疫系統(tǒng)功能具有重要作用[22]。總蛋白(TP)能夠維持血液正常膠體滲透壓與pH值穩(wěn)定，并與脂肪酸、膽固醇等物質(zhì)運(yùn)輸以及免疫功能相關(guān)[23]，白蛋白(ALB)作為營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的載體，能為機(jī)體提供能量，并且作為機(jī)體重要的免疫蛋白，能提高機(jī)體的抗病力。本研究TP和ALB均在低氧12 h出現(xiàn)顯著下降，這是因?yàn)樵诘脱趺{迫下，影響機(jī)體的物質(zhì)代謝和免疫系統(tǒng)，加速蛋白的分解。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)與谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)是是廣泛存在于動(dòng)物細(xì)胞線粒體中的重要氨基轉(zhuǎn)移酶，在肝細(xì)胞中含量最高，當(dāng)血清中其活力升高則說(shuō)明肝功能受到損傷，本試驗(yàn)中ALT和AST在低氧處理后均出現(xiàn)顯著上升，說(shuō)明低氧脅迫對(duì)花鱸幼魚(yú)的肝臟損傷較為嚴(yán)重。乳酸脫氫酶(LDH)能在細(xì)胞內(nèi)催化乳酸氧化成丙酮酸，其在組織中的活力大大高于血液中的活力，若血液中LDH活力升高則預(yù)示著肝臟、腎臟和肌肉等組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生改變、受到損傷[24]，本研究中LDH在低氧3 h顯著上升而后又下降到正常水平，說(shuō)明低氧對(duì)組織的損傷較為嚴(yán)重，但可以通過(guò)自身調(diào)節(jié)來(lái)修復(fù)損傷。堿性磷酸酶(ALP)在生物體內(nèi)直接參與磷酸基團(tuán)的轉(zhuǎn)移和代謝過(guò)程，對(duì)機(jī)體內(nèi)的物質(zhì)代謝和免疫防護(hù)能發(fā)揮重要作用[25]，ALP在低氧6 h活力顯著下降，說(shuō)明低氧能對(duì)花鱸機(jī)體免疫系統(tǒng)造成一定程度的破壞。甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC)水平受體內(nèi)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)代謝的共同影響，本試驗(yàn)中TC和TG均在低氧12 h出現(xiàn)顯著下降，這與TP和ALB也在低氧12 h顯著下降具有一致性，推測(cè)這與機(jī)體供能有關(guān)，在低氧12 h后魚(yú)體內(nèi)蛋白質(zhì)和脂質(zhì)分解代謝加快，以滿足低氧脅迫后對(duì)能量的需求。

表3 低氧脅迫與恢復(fù)對(duì)花鱸肝、鰓、肌組織氧化應(yīng)激的影響Table 3 Effects of hypoxia and recovery on oxidative stress Inliver, gill and muscle tissues of Lateolabrax maculatus

3.2 低氧脅迫對(duì)花鱸幼魚(yú)氧化應(yīng)激的影響

表4 低氧脅迫與恢復(fù)對(duì)花鱸能量利用的影響Table 4 Effects of hypoxia and recovery on energy utilization of Lateolabrax maculatus

肝組織的SOD和GST活力增加，說(shuō)明花鱸肝臟在低氧受到損傷，并且發(fā)現(xiàn)GST含量變化在肝組織中較為敏感，其可以作為花鱸在應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激時(shí)的酶學(xué)指標(biāo)。肝組織的CAT活力在低氧脅迫時(shí)變化不顯著以及MDA含量在低氧脅迫時(shí)出現(xiàn)下降趨勢(shì)，這可能與低氧使肝中脂類(lèi)氧化所產(chǎn)生的過(guò)多活性氧(ROS)反過(guò)來(lái)抑制了酶活性[28]以及肝臟中SOD活力上升有關(guān)，SOD清除了大部分的ROS自由基，使得CAT活力變化不顯著以及MDA水平有所下降。而在恢復(fù)溶氧后，肝臟中的GST活力仍高于對(duì)照組，這與鯔魚(yú)(Mugilcephalus)在低氧下的研究結(jié)果一致，恢復(fù)溶氧后鯔氧化應(yīng)激反應(yīng)也較強(qiáng)烈[29]，說(shuō)明花鱸體內(nèi)的抗氧化防御機(jī)制被激活，

鰓組織的SOD活力在開(kāi)始時(shí)顯著下降，可能與GST活力升高以及MDA含量升高有關(guān)，之后SOD與CAT活力逐漸升高，使得MDA含量恢復(fù)到正常水平。在復(fù)氧后，SOD、CAT、GST也都恢復(fù)到正常水平，說(shuō)明在恢復(fù)溶氧后，鰓中的抗氧化酶失去作用。肌肉中的SOD、CAT、GST活力在低氧脅迫時(shí)顯著降低，表明肌肉組織中的抗氧化酶發(fā)揮的作用有限。但鰓和肌組織中的MDA分別在低氧3 h和低氧6 h后活力顯著上升，這與黃顙魚(yú)(Pelteobagrusfulvidraco)的研究中[20]相似，可能由于組織的特異性盡管SOD和GST活力有所上升但其消除過(guò)氧化物能力較弱，使得MDA含量仍然上升，這也說(shuō)明了肝臟中的抗氧化酶的抗氧化能力更高效。

3.3 低氧脅迫對(duì)花鱸幼魚(yú)能量利用的影響

由于水生動(dòng)物利用碳水化合物作為能量代謝底物時(shí)，可以獲得最高的氧卡系數(shù)[32]，所以在缺氧時(shí)會(huì)動(dòng)用體內(nèi)的糖原作為能量代謝底物來(lái)獲得足夠的能量。在缺氧脅迫下，魚(yú)類(lèi)通過(guò)急劇降低對(duì)能量的需求,利用體內(nèi)儲(chǔ)存的碳水化合物，轉(zhuǎn)化為厭氧代謝模式等方式，能極大延長(zhǎng)其在缺氧環(huán)境中的存活時(shí)間。

糖原為機(jī)體內(nèi)最為重要的供能物質(zhì)，對(duì)維持機(jī)體的能量代謝以及重要功能物質(zhì)的合成有重要作用。而乳酸作為厭氧代謝的一種產(chǎn)物，可以作為評(píng)估魚(yú)類(lèi)低氧耐受能力的一項(xiàng)重要指標(biāo)[33]。魚(yú)類(lèi)面臨組織缺氧時(shí)，通常采用無(wú)氧代謝方式滿足能量需求[34]，與在褐牙鲆(Paralichthysolivaceus)的研究結(jié)果一致[19]，肝中乳酸在低氧的開(kāi)始階段含量顯著下降，這可能是乳酸參與了機(jī)體的無(wú)氧代謝供能，從而使一開(kāi)始肝中糖原含量沒(méi)有顯著下降，而在之后肝糖原含量在低氧脅迫后逐漸降低，可推測(cè)此時(shí)由于低氧脅迫使大量肝糖原分解為葡萄糖，用于維持血糖濃度，在復(fù)氧后其含量又逐步升高，說(shuō)明機(jī)體已經(jīng)開(kāi)始逐步趨于穩(wěn)態(tài)。肌糖原含量在低氧24 h時(shí)有所升高且乳酸含量沒(méi)有變化，可能與肝組織糖原供能已充足，不需要額外的組織供能，可以推測(cè)此時(shí)肌糖原不參與機(jī)體供能，從而使肌肉中積累的乳酸用以轉(zhuǎn)化成糖原。

4 結(jié)語(yǔ)

低氧脅迫能夠?qū)|機(jī)體的生理狀態(tài)造成顯著影響。經(jīng)歷低氧脅迫后的花鱸幼魚(yú)其血液生理生化指標(biāo)發(fā)生顯著變化，其不同組織的抗氧化應(yīng)激能力顯著提升，其中肝組織在機(jī)體的抗氧化應(yīng)激防御中發(fā)揮了重大作用，肝組織中GST可以作為花鱸在應(yīng)對(duì)氧化應(yīng)激時(shí)的酶學(xué)指標(biāo)。在恢復(fù)正常溶氧水平后花鱸的血液生化指標(biāo)、相關(guān)酶的活力和能量供應(yīng)又能夠通過(guò)自身的生理調(diào)節(jié)逐漸恢復(fù)到正常水平，說(shuō)明花鱸具有一定抗逆性，可以進(jìn)行良種選育。

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有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)[10-12]，由于利用數(shù)字化方法制作，印模無(wú)實(shí)體模型，可切削瓷塊顏色較為單一，技工無(wú)法實(shí)現(xiàn)在模型上堆加飾瓷，只能依靠外染色調(diào)節(jié)修復(fù)體顏色，所以在顏色匹配方面的滿意度仍有欠缺，這也是使用數(shù)字化方法修復(fù)前牙缺損所面臨的比較大的挑戰(zhàn)。

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