鄧飛 韓惠云 來祝檁

[摘要] 目的 對比進(jìn)口和國產(chǎn)幾種不同廠家品牌的試劑對HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2、抗-TP傳染病四項(xiàng)的檢測結(jié)果，觀察分析不同試劑對傳染病四項(xiàng)檢測弱反應(yīng)性結(jié)果的差異。方法 2017年1—12月無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本47 586份，應(yīng)用不同全自動酶免分析儀進(jìn)行ELISA 2次檢測，并對除梅毒以外的167份弱反應(yīng)性樣本利用NAT檢測技術(shù)進(jìn)行確認(rèn)。結(jié)果 47 586份樣本中HBsAg弱反應(yīng)性120份（伯樂71份;萬泰49份）;抗-HCV弱反應(yīng)性20份（麗珠5份;萬泰15份）;抗-HIV1/2弱反應(yīng)性27份（麗珠5;伯樂22）;抗-TP弱反應(yīng)性98份（麗珠41;萬泰57），167份弱反應(yīng)性樣本NAT檢測結(jié)果HBV DNA有反應(yīng)性5份（其中伯樂3;萬泰2）;HCV RNA有反應(yīng)性0份;HIV-1 RNA有反應(yīng)性0份;梅毒螺旋體離體存活時間短不進(jìn)行核酸檢測。結(jié)論 不同試劑對傳染病四項(xiàng)檢測弱反應(yīng)性結(jié)果存在差異，盡管存在假反應(yīng)性結(jié)果的可能，但核酸檢測發(fā)現(xiàn)仍有輸血?dú)堄囡L(fēng)險，單獨(dú)使用都有可能存在漏檢。為了進(jìn)一步提高臨床輸血安全水平，2次ELISA檢測在血液篩查中仍有實(shí)際應(yīng)用價值。

[關(guān)鍵詞] ELISA;NAT;傳染病四項(xiàng);弱反應(yīng)性;血液篩查

[中圖分類號] R446 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-5654（2018）08（c）-0162-02

酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面進(jìn)行的技術(shù)[1-2]。其方法簡單，方便訊速，特異性強(qiáng)，目前仍廣泛應(yīng)用于醫(yī)療及采供血機(jī)構(gòu)[3]。國內(nèi)絕大部分采供血機(jī)構(gòu)對獻(xiàn)血者篩查可經(jīng)血傳播感染的檢測項(xiàng)目和方法的模式，仍主要以選擇2個不同生產(chǎn)廠家的ELISA試劑檢測為主，進(jìn)行2次ELISA方法的血液篩查。目前我國采供血機(jī)構(gòu)已普遍開展NAT檢測，血液篩查策略下一步可能有所改進(jìn)。為此，選取2017年1—12月無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本47586份將不同ELISA試劑對傳染病四項(xiàng)檢測弱反應(yīng)性結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)分析和比較，并利用NAT檢測技術(shù)進(jìn)行確認(rèn)?，F(xiàn)報道如下。

1? 材料與方法

1.1? 標(biāo)本來源

采集的無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本475 86份，EDTA-K2和肝素鈉抗凝真空采血管（各1支，每管5 mL）用于ELISA檢測，帶分離膠EDTA-K2抗凝真空采血管（1支5 mL）用于核酸檢測。所有標(biāo)本均嚴(yán)格按照《血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）》采集、保存。

1.2? 試劑

初檢試劑：法國伯樂乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒、珠海麗珠丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒、珠海麗珠人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒、珠海麗珠梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒。復(fù)檢試劑：北京萬泰乙型肝炎病毒表面抗原診斷試劑盒、北京萬泰丙型肝炎病毒抗體診斷試劑盒、法國伯樂人類免疫缺陷病毒抗原抗體診斷試劑盒、北京萬泰梅毒螺旋體抗體診斷試劑盒。HBV DNA、HCV RNA、HIV-1RNA核酸檢測試劑盒（PCR熒光法）（上海浩源生物科技有限公司）。經(jīng)中國藥品生物制品檢定所批檢合格，在有效期內(nèi)使用。

1.3? 主要儀器

Uranus AE 200全自動酶免分析儀2臺（深圳愛康公司），ChiTas BSS1200 全自動核酸純化儀（上海浩源生物科技有限公司），ABI 7500實(shí)時熒光定量PCR系統(tǒng)（美國ABI公司），TDL5B臺式大容量低溫離心機(jī)（長沙英泰公司）。

1.4? 方法

將采集的血液標(biāo)本離心后，由不同的檢驗(yàn)人員采用2種試劑使用不同的設(shè)備進(jìn)行2遍ELISA項(xiàng)目（HBsAg、抗-HCV、抗-HIV1/2、抗-TP）平行檢測，均按試劑說明書進(jìn)行操作，四項(xiàng)檢測s/co值<0.7為無反應(yīng)性; 1>s/co≧0.7為灰區(qū)，判為弱反應(yīng)性;s/co值≥1.0為有反應(yīng)性。

1.5? NAT檢測

應(yīng)用NAT 檢測方法將167份（HBsAg 120;抗-HCV 20;抗-HIV1/2 27）弱反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行檢測。無反應(yīng)性的判為NAT陰性，有反應(yīng)性的判為NAT陽性。

2? 結(jié)果

無償獻(xiàn)血者血液標(biāo)本弱反應(yīng)性檢測結(jié)果（除去兩種試劑都弱反應(yīng)性），見表1、2、3、4。

3? 討論

自從ELISA試驗(yàn)建立以來，隨著方法的不斷改進(jìn)、材料的不斷更新，加之自動化程度極高的ELISA檢測儀的使用，使ELISA更為簡便實(shí)用和標(biāo)準(zhǔn)化，從而使其成為最廣泛應(yīng)用的檢測方法之一[4-5]。該采供血機(jī)構(gòu)采用部分為國產(chǎn)試劑和進(jìn)口試劑聯(lián)合使用對血液標(biāo)本進(jìn)行檢測，實(shí)際應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)2次篩查的弱反應(yīng)性結(jié)果不一致，從上述結(jié)果可以看出，每一相同項(xiàng)目不同試劑所檢測的弱反應(yīng)性結(jié)果相差較大。其中存在假反應(yīng)性結(jié)果的可能，因ELISA測定中影響因素較多，操作過程中每個環(huán)節(jié)都會對試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，試劑、樣本以及操作因素都可能影響檢測結(jié)果。但從表5可以看出，167份HBsAg、抗-HCV、抗-HIV弱反應(yīng)性結(jié)果經(jīng)NAT檢測后，有5份HBV DNA陽性（其中伯樂3;萬泰2），說明經(jīng)過兩家試劑ELISA檢測后，仍存在輸血?dú)堄囡L(fēng)險，特別是HBV殘余風(fēng)險，在兩家試劑ELISA檢測弱反應(yīng)性結(jié)果中均存在HBV DNA陽性。另外，NAT檢測不進(jìn)行梅毒螺旋體病毒檢測，所以從血液安全角度考慮，用ELISA方法實(shí)施2次HBsAg、抗-HCV、抗-HIV和抗-TP的血液篩查更有利于保障血液安全。

ELISA國產(chǎn)試劑與進(jìn)口試劑弱反應(yīng)性檢測結(jié)果也存在較大差異，國產(chǎn)試劑的檢出率較進(jìn)口試劑低。HBsAg弱反應(yīng)性國產(chǎn)試劑檢出率49/47 586，進(jìn)口試劑檢出率71/47 586;抗-HIV弱反應(yīng)性國產(chǎn)試劑檢出率5/47 586，進(jìn)口試劑檢出率22/47 586。檢測結(jié)果說明進(jìn)口試劑靈敏度更高，在我國現(xiàn)有經(jīng)濟(jì)條件下結(jié)合使用國產(chǎn)試劑和進(jìn)口試劑，重復(fù)2次ELISA方法篩查對保障血液安全仍有意義。開展核酸檢測后是否減去一遍酶免檢測需經(jīng)過更加充分深入的研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]? 白潔，何靈，周建，等.傳染病四項(xiàng)不同檢測方法的臨床應(yīng)用價值對比分析[J].標(biāo)記免疫分析與臨床，2016，3（6）：688-690.

[2]? 《血站技術(shù)操作規(guī)程》2015版.

[3]? 王良華，鄔旭群，鮑自謙，等.不同ELISA試劑HBsAg初復(fù)檢結(jié)果的比較[J].中國輸血雜志，2007，20（2）：124-125.

[4]? 劉玉強(qiáng).FAME試劑槽對不同ELISA試劑檢測結(jié)果的影響分析[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2017（14）：256-257.

[5]? 李榮.不同HIV—ELISA診斷試劑檢測結(jié)果比較[J].中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)，2011，13（22）：248-249.

（收稿日期：2018-05-23）