洪偉鳴 徐懿 宋亮 陳海峰 吉光杰 左偉勇

摘要 [目的]為了觀察一種抗豬流行性腹瀉病的中藥復(fù)方制劑的亞慢性毒性。[方法]根據(jù)《獸藥試驗技術(shù)規(guī)范匯編》中的亞慢性毒性試驗技術(shù)要求；選用小白鼠進行了亞慢性毒性研究。[結(jié)果]試驗組與空白對照組實驗數(shù)據(jù)相比差異不顯著（P>0.05），表明該復(fù)方制劑對小鼠血常規(guī)檢查和血液生化指標檢測沒有造成任何不良影響。[結(jié)論]臨床使用該復(fù)方制劑進行治療安全可靠。

關(guān)鍵詞 豬流行性腹瀉；中藥復(fù)方制劑；小鼠；亞慢性毒性

中圖分類號 S858.28文獻標識碼 A文章編號 0517-6611（2018）31-0074-03

Key words [Objective] To study subchronic toxicity of one traditional Chinese medicine compound preparation against porcine epidemic diarrhea. [Method] According to the technical requirements of subchronic toxicity test in the Compilation of Technical Specifications for Veterinary Drug Testing， the subchronic toxicity of mice was studied. [Result] There was no significant difference（P<0.05） between data of the experimental group and the blank control group. The results showed that the compound preparation had no adverse effect on blood routine examination and blood biochemical index test in mice. [Conclusion] The traditional Chinese medicine compound preparation can be safely used for clinical application.

Key words Porcine epidemic diarrhea；Traditional Chinese medicine compound preparation；Mouse；Subchronic toxicity test

豬流行性腹瀉（PED）是由豬流行性腹瀉病毒（PEDV）引起的急性、接觸性、高度傳染性的一種消化道疾病，是危害養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)最重要的傳染病之一。該病臨床主要癥狀表現(xiàn)為急性腸炎以及嘔吐、水樣腹瀉和脫水。PED的波及范圍甚廣，在全球均有病例報道。并且PED發(fā)病率高，各種年齡的豬都能感染發(fā)病，7日齡以下仔豬感染死亡率可高達80%～100%[1]。PED的頻發(fā)給我國養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)造成了嚴重的經(jīng)濟損失[2]。

由于PEDV具有高度的變異性，給臨床治療帶來了很多困難。目前市面上預(yù)防PED主要是依靠PED弱毒苗和滅活苗[3]。治療PEDV的藥物以西藥為主，雖可緩解病情和降低死亡率，但極易引起致病病毒變異而導(dǎo)致產(chǎn)生耐藥性，并存在動物體內(nèi)藥物殘留等隱患[4]。因此，開展抗PEDV藥物的研發(fā)對控制豬流行性腹瀉病、促進養(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展有著十分重要的意義。隨著市場上人們對綠色、安全畜產(chǎn)品的需求度越來越高，中藥作為化學(xué)藥物的替代品用于防治畜禽疾病愈發(fā)獲得了大家的肯定。該研究所用藥物為江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點實驗室研制的一種用于防治豬流行性腹瀉病的純中藥復(fù)方制劑，為全面評價其安全性和為臨床安全科學(xué)用藥提供依據(jù)，根據(jù)農(nóng)業(yè)部《獸藥試驗技術(shù)規(guī)范匯編》的技術(shù)要求[5]，進行了亞慢性毒性試驗研究。同時，也為后續(xù)深入探討該復(fù)方制劑在臨床上的推廣應(yīng)用研究提供科學(xué)依據(jù)和支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗動物

清潔級昆明系小白鼠80只，雌雄各半，體重20±2g，購自江蘇省揚州大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心[動物生產(chǎn)許可證號：SYXK（蘇）2015000003]。

1.2 試驗藥物

抗豬流行性腹瀉的中藥復(fù)方制劑由黃連、白頭翁等10味中藥精制而成，濃縮至1 mL藥液相當于1 g藥材。由江蘇省獸用生物制藥高技術(shù)研究重點實驗室自行研制。

1.3 儀器

全自動血液細胞分析儀（BC-5380，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；全自動生化分析儀（BS-420，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）；光學(xué)顯微鏡（BX53，日本OLYMPUS公司）；電子天平（MS204S，梅特勒托利多公司）。

1.4 動物分組及處理

將小白鼠隨機分成四組，即低劑量組、中劑量組、高劑量組和空白對照組，每組20只，雌雄各半，進行適應(yīng)性飼養(yǎng)后開展試驗。根據(jù)預(yù)試驗的劑量，低、中、高3個劑量組分別按0.01、0.02、0.04 mL/g 3個不同劑量給藥，空白對照組按0.04 mL/g給予生理鹽水。藥物及生理鹽水均事先拌于飼料中并烘干制作成型，任由實驗動物采食，連續(xù)給藥28 d。每天仔細觀察小鼠的活動、采食、飲水、發(fā)病和死亡等情況，對小鼠進行空腹稱重，計算增重，給藥結(jié)束后對存活小鼠進行血常規(guī)和血液生化學(xué)指標檢測，隨后統(tǒng)一剖殺觀察主要臟器是否存在病變或其他異常[5]。

1.5 檢測項目

1.5.1 血常規(guī)檢查 摘除小鼠眼球進行采血，利用全自動血液細胞分析儀測定紅細胞數(shù)、白細胞數(shù)、血小板數(shù)、血紅蛋白濃度、紅細胞壓積、血小板壓積和淋巴細胞數(shù)。

1.5.2 血液生化學(xué)檢測 采血分離出血清后利用全自動生化分析儀檢測谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、堿性磷酸酶、總蛋白、白蛋白、白蛋白/球蛋白、尿素氮、肌酐和血糖含量。

1.5.3 臟器系數(shù)及組織病理學(xué)檢查 對存活小鼠進行統(tǒng)一剖檢，測定心、肝、脾、肺、腎等臟器的絕對重量及臟器系數(shù)（臟器系數(shù)=臟器濕重/體重×100），同時選擇性的對肝、腎、脾、胃腸等器官進行目檢，記錄異常或臟器病變情況。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

試驗數(shù)據(jù)以平均數(shù)±標準差表示，采用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析，組間比較采用單因素方差分析及t檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床表現(xiàn)

整個試驗過程中3個給藥組與空白對照組的小鼠均未出現(xiàn)死亡，采食和飲水均正常，活動自如，呈現(xiàn)健康狀態(tài)。

2.2 體重變化情況

如表1所示，從第7天起至28天空白對照組小鼠體重均略低于3個試驗組，但整個試驗周期內(nèi)各試驗組與空白對照組相比小鼠體重差異均不顯著（P>005），各試驗組間體重比較也無顯著差異（P>0.05），由此可說明該復(fù)方制劑對小鼠的體重影響甚微。

2.3 血常規(guī)檢查情況

血常規(guī)檢查結(jié)果顯示如表2所示，空白對照組白細胞數(shù)略高于3個試驗組，但統(tǒng)計結(jié)果分析差異不顯著（P>0.05）。其余各個檢測指標低、中、高3個劑量組與空白對照組相比差異均不顯著（P>0.05）。由此可說明該復(fù)方制劑對小鼠血常規(guī)檢查的各項指標未帶來不良影響。

2.4 血液生化學(xué)檢測情況

血液生化學(xué)檢測結(jié)果如表3所示，結(jié)果顯示空白對照組的總蛋白與血糖含量略低于3個試驗組，但結(jié)果統(tǒng)計分析差異不顯著（P>0.05）。其余各個檢測指標各試驗組測定結(jié)果與空白對照組測定結(jié)果相比差異均不顯著（P>0.05），由此可說明該復(fù)方制劑對小鼠血液生化學(xué)檢測指標未造成不良影響。

2.5 臟器系數(shù)

試驗結(jié)束時統(tǒng)一剖殺小鼠測定心臟、肝臟、腎臟等主要臟器的絕對重量，測出臟器系數(shù)，結(jié)果見表4。從表中結(jié)果可見，3個試驗組與空白對照組的臟器系數(shù)相比較差異均不顯著（P>0.05）。各組的臟器系數(shù)均在正常值范圍內(nèi)，據(jù)此可說明該復(fù)方制劑對小鼠的主要臟器系數(shù)未造成不良影響。

2.6 組織病理學(xué)檢查情況

隨機挑選各試驗組10只小鼠進行統(tǒng)一剖檢，仔細觀察該復(fù)方制劑有無對小鼠內(nèi)臟器官的造成不良影響。觀察后未見肝臟、腎臟、脾臟、胃和腸等器官組織的形態(tài)、顏色、質(zhì)地出現(xiàn)異常，組織病理學(xué)檢查亦未見臟器發(fā)生病理異常變化。由此可說明該復(fù)方制劑未對小鼠的內(nèi)臟器官造成不良影響。

3 討論

亞慢性毒性試驗是評價新獸藥一般毒性的重要內(nèi)容，對后續(xù)臨床安全合理用藥甚為關(guān)鍵。試驗研究結(jié)果表明，該復(fù)方制劑分別按0.01、0.02、0.04 mL/g等3個不同劑量進行連續(xù)給藥28 d，研究結(jié)果表明3個試驗組小鼠在整個試驗周期內(nèi)均生長正常，活動自如，體重變化、血常規(guī)檢查、血液生化學(xué)檢測、臟器系數(shù)、組織病理學(xué)檢查與空白對照組相比均無顯著差異（P>0.05）。有研究報道表明如若動物的肝功能或腎功能受到損傷，血液中的谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）或肌酐（CR）會顯著升高[6-7]，而上述3個指標在該試驗研究中均處于正常值范圍內(nèi)。

故可認為按臨床推薦劑量使用該復(fù)方制劑治療豬流行性腹瀉病是安全可靠的，同時也為后續(xù)將該制劑開發(fā)為新獸藥奠定了扎實的基礎(chǔ)。

參考文獻

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