郭英

摘要：我國每年都有大量新收玉米入庫，同時還有大量以往年份的儲備玉米，這些都存在被真菌污染，產(chǎn)生真菌毒素，威脅人畜安全的危險，如何在儲存過程中避免真菌大量繁殖，抑制黃曲霉毒素Bl的產(chǎn)生是本文研究的重點?，F(xiàn)通過對三個品種玉米樣品在不同水分條件下儲存一段時間后黃曲霉毒素含量的變化進行檢測和分析，尋找能夠有效抑制黃曲霉毒素Bl產(chǎn)生的適宜儲存水分。

關鍵詞：玉米；真菌；黃曲霉毒素Bl

中圖分類號：S513

文獻標識碼：B

文章編號：2095-9737（2018）04-0005-01

黃曲霉毒素Bl是一種病原真菌黃曲霉菌侵染玉米等農(nóng)作物，繁殖生長過程中產(chǎn)生的眾多真菌毒素當中的一種。黃曲霉毒素Bl的毒性很強，人畜誤食黃曲霉毒素Bl會導致中毒反應，甚至會增大癌癥發(fā)生危險，嚴重時能夠直接導致死亡。

作為一個農(nóng)業(yè)大國，我國玉米的產(chǎn)能居世界前列，玉米不單是重要的農(nóng)產(chǎn)品和工業(yè)原料，還是食品及飼料的重要組成部分，玉米真菌毒素的研究是我國糧食安全的重要課題之一。

1 樣品準備

選取黑龍江省種植范圍比較廣的三個品種先玉335、飛天358、綏玉23的玉米各5000 g，將三個品種的玉米分別平均分成10份，每份樣品500 g。將這30份樣品分別調節(jié)成相應的水分并進行編號如表1所示：

檢測三個品種的玉米中的黃曲霉毒素Bl的含量，之后將做好編號并調節(jié)好水分的30份樣品分別隔離儲存3個月，檢測其中黃曲霉毒素Bl的含量。

2 實驗原理

一般來說檢測玉米中黃曲霉毒素Bl有三種常用的方法。第一種為薄層色譜法，將玉米試樣中黃曲霉毒素Bl進行一系列的提取、濃縮、薄層分離操作，最后在365 nm的紫外光下顯色，通過顯示藍色熒光的最低檢出量進行粗略定量。第二種為酶標法，將玉米試樣中黃曲霉毒素Bl進行提取后進行脫脂、濃縮之后與定量特異性抗體進行反應，反應剩余的游離特異性抗體再與酶標板內的抗原結合，與加入的底物和酶標記物進行顯色再與標準進行比較定量。第三種方法為膠體金快速定量法，將玉米試樣中的黃曲霉毒素Bl提取到提取液中，在溫度一定條件下與檢測條中的膠體金微粒進行顯色反應，使用讀數(shù)儀對檢測條上的質控線以及檢測線的顏色深度進行測定，顏色的深度與黃曲霉毒素Bl的含量呈線性的相關關系，顏色與讀數(shù)儀內置的曲線對應，自動計算出黃曲霉毒素Bl的總量。本實驗采用的為第三種膠體金快速定量法。

3 黃曲霉毒素Bl含量檢測

3.1 儀器及試劑

電子天平（分度值o.Ol g）；粉碎機（可使試樣細度達到全部通過20目篩）；離心機（轉速達到4000 r/min）；渦旋振蕩儀；孵育器（可進行45℃恒溫）；讀數(shù)儀（自動計算并顯示結果）；ROSA黃曲霉毒素Bl膠體金快速定量檢測條；針頭式過濾器；Whatman 2V濾紙；提取液（70%甲醇水溶液）。

3.2 實驗方法

將500 g左右的樣品粉碎至全部通過20目篩，混合均勻，寫好編號備用。用電子天平（分度值0.01 g）準確稱取玉米樣品10.00 g于50 mL帶蓋離心管中，分別加入20.O mL提取液（70%甲醇水溶液），擰緊螺旋蓋，使用渦旋振蕩器震蕩100 s，靜置至澄清，吸取上層清液1.0 mL于3 mL離心管中，在離心機（調節(jié)轉速為4000 r/min）中離心60 s。移取離心后的上清液100 μL于另一支3 mL離心管中，再加入1.0 mL稀釋緩沖液，渦旋混勻待測。

將冷藏室中保存的膠體金檢測條取出，放置一段時間直至其達到室溫，同時啟動孵育器開始預熱，使其溫度恒定在45℃±l℃。將恢復至室溫的膠體金檢測條平放于恒溫完成的孵育器當中，撕開檢測條的塑料薄膜露出加樣口。準確移取300 μL待測液注入加樣口中，蓋好塑料薄膜封閉加樣孔，關閉孵育器上蓋，孵育5 min之后，將檢測條取出插入讀數(shù)儀中進行讀數(shù)。如果黃曲霉毒素B1濃度太高超出檢測濃度范圍，則需移取300 μL待測液注入另一離心管中，再次加入1.O mL稀釋緩沖液，渦旋混勻后重復上述步驟，進行再次測定。

4 數(shù)據(jù)處理

3個品種初始樣品的黃曲霉毒素Bl檢測結果均為未檢出，在同樣的條件下對3個品種的10份不同水分含量樣品進行儲存實驗，3個月后對樣品的黃曲霉毒素Bl含量分別進行檢測。檢測結果分別如表2，表3，表4所示。

5 結論

國家標準《GB 2761- 2011食品安全國家標準食品中真菌毒素限量》中規(guī)定，玉米中黃曲霉毒素Bl的含量不得超過20μg/kg，由實驗數(shù)據(jù)可以看出，三個品種在儲存實驗中，不同水分含量的樣品均表現(xiàn)出水分含量達到一定的高度后，隨著水分含量的增加，黃曲霉毒素Bl的含量呈現(xiàn)上升趨勢。初始樣品中的黃曲霉毒素Bl均為未檢出，三個品種的玉米經(jīng)過3個月的儲藏試驗后，水分含量為13.5%以下的樣品均未出現(xiàn)變化，而在水分含量達到14.3%以上時都超出了標準限量標準。試驗樣品在含水量處于13.7%—14. 1%時，黃曲霉毒素Bl含量有一定的增長。本實驗的結果表明，玉米的含水量對黃曲霉毒素Bl在儲存期間的增長有顯著地影響，含水量在13.5%以下時其生長速度較慢。影響黃曲霉毒素Bl含量增長的條件還有很多，要進一步探尋玉米的安全儲藏條件，還需要進一步的實驗進行探索。